地榆和长叶地榆药材特征图谱构建方法和鉴别方法与流程

本发明涉及中药鉴定和质量评价，尤其涉及一种地榆和长叶地榆药材特征图谱构建方法和鉴别方法。

背景技术：

1、我国中药材品种繁多，资源丰富，同名异物、同物异名、一药多源等现象普遍存在，导致目前市场上流通的中药材存在中药品种混乱、品种不真、质量低劣等现象。所以，在严格区分药材真伪的基础上，还应建立有效的种属鉴别和质量优劣的评价方法，提高质量标准的科学性和严谨性，从而确保中药材的质量。

2、随着现代中药新技术、新方法的应用以及大型分析仪器的普及，中药特征图谱技术逐步得到了推广，与传统中药材鉴定方法(原植物/动物鉴定、性状鉴定和显微鉴定)相比，既能用于鉴定基源(定性水平)，又能用于评价质量(定量水平)，优势较为明显，因此逐渐成为主流的药材真伪及基源鉴定手段。中药特征图谱是指采用现代仪器分析技术以及分析方法，对中药材进行相应的处理后，检测并标识中药材中各种组分群的共有峰的特征图谱，主要分为化学成分特征图谱以及生物特征图谱。中药化学成分特征图谱技术有光谱法、色谱法以及联用分析技术。生物特征图谱技术有随机扩增多态性dna技术、pcr技术、限制性内切酶片段长度多态性分析技术(rflp)等，其中dna特征图谱应用广泛。

3、地榆，为蔷薇科植物地榆或长叶地榆的干燥根。后者习称“绵地榆”。春季将发芽时或秋季植株枯萎后采挖，除去须根，洗净，干燥，或趁鲜切片，干燥。通过研究发现，长叶地榆是地榆的变种，两个主导单倍型的差异很小，且出现种间差异的位点同时也是种内差异位点，即地榆和长叶地榆的dna条形码种间差异小，不能准确地对地榆和长叶地榆进行区分和鉴别。中药化学成分是中药发挥临床疗效的物质基础，也是药材质量评价的主要指标。能够体现中药内在化学成分整体性和动态性等特点的指纹(特征)图谱技术为中药质量控制提供了新思路，也为道地药材标准化，特别是中医药守正创新提供了必要技术支持。

4、公开号为cn113391005a的专利文献公公开了地榆与地榆炭饮片、对照提取物、配方颗粒的高效液相检测方法及其鉴别方法，该项发明专利建立的地榆高效液相色特征图谱，使用hplc进行检测，检测时间为60min，特征峰数量为7个，仅指认3个特征峰，仅针对生品与炮制品的区别，未能对不同基源品种进行鉴别。公开号为cn113325095a的专利文献公开了地榆药材的uplc指纹图谱构建方法和检测方法，建立了地榆药材超高效液相指纹图谱，检测时间为60min，仅有4个特征峰，第一峰为没食子酸，第三峰为儿茶素或表儿茶素，第四峰为鞣花酸，该方法提高了地榆药材检测的准确性和稳定性，但未能区分不同基源的地榆药材。

技术实现思路

1、针对以上不足，本发明提供一种地榆和长叶地榆药材特征图谱构建方法，可用于鉴定、区分地榆、长叶地榆两个不同基源药材，具体技术方案如下：

2、一种地榆和长叶地榆药材特征图谱构建方法，包括以下步骤：

3、(1)参照物溶液的制备：取地榆对照药材或长叶地榆对照药材加水提取，滤过，取续滤液，用乙酸乙酯萃取，合并乙酸乙酯液，蒸干；残渣加甲醇溶解，滤过，取续滤液，作为对照药材参照物溶液；另取没食子酸、没食子儿茶素、儿茶素、鞣花酸、2,3,8-三-o-甲基鞣花酸对照品加甲醇制成混合溶液，作为对照品参照物溶液；

4、(2)供试品溶液的制备：取地榆或长叶地榆粉末，加入供试品提取溶剂，提取，滤过，取续滤液，用萃取溶剂萃取，合并萃取液蒸干；残渣加甲醇溶解，滤过，取续滤液，即得。

5、(3)色谱条件：色谱柱：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；二极管阵列检测器，检测波长为225～235nm；柱温25℃～35℃；流速0.28～0.32ml/min；以乙腈为流动相a，0.1％磷酸溶液为流动相b，进行梯度洗脱；

6、(4)采用超高液相色谱法检测参照物溶液与供试品溶液，获得对应色谱图，比较参照物溶液和供试品溶液对应的图谱，得到所述地榆和长叶地榆药材特征图谱。

7、优选的，上述的地榆和长叶地榆药材特征图谱构建方法中，所述步骤(1)中，参照物溶液的制备：取地榆对照药材或长叶地榆对照药材加水，对照药材与水比例为0.2g:25～100ml，加热回流或超声提取20～40min，滤过，取续滤液，用乙酸乙酯振摇提取2～3次，合并乙酸乙酯液，蒸干；残渣加75％甲醇溶解，取续滤液，作为对照药材参照物溶液；另取没食子酸、没食子儿茶素、儿茶素、鞣花酸、2,3,8-三-o-甲基鞣花酸对照品适量，加50％甲醇制成每1ml各含35～45μg的混合溶液，作为对照品参照物溶液。

8、优选的，上述的地榆和长叶地榆药材特征图谱构建方法中，所述步骤(2)中，供试品提取溶剂为水或30％～100％甲醇，地榆或长叶地榆粉末与供试品提取溶剂的比例为0.2g:25～100ml；萃取溶剂为水饱和正丁醇或乙酸乙酯，提取方式为回流提取或超声提取，提取时间为15～60min，萃取次数为1～3次。

9、优选的，上述的地榆和长叶地榆药材特征图谱构建方法中，所述步骤(2)中，供试品提取溶剂为水，地榆或长叶地榆粉末与供试品提取溶剂的比例为0.2g:25ml；萃取溶剂为乙酸乙酯，提取方式为超声提取，提取时间为30min，萃取次数为2次。

10、优选的，上述的地榆和长叶地榆药材特征图谱构建方法中，所述梯度洗脱为：

11、0～15min，a相：2％→10％，b相：98％→90％；

12、15～30min，a相：10％→20％，b相：90％→80％；

13、30～35min，a相：20％→35％，b相：80％→65％；

14、35～45min，a相：35％→45％，b相：65％→55％。

15、优选的，上述的地榆和长叶地榆药材特征图谱构建方法中，所述色谱柱柱长为100mm，内径为2.1mm，粒径为1.8μm；检测波长230nm，柱温30℃，流速0.3ml/min；理论板数按鞣花酸峰计算应不低于10000。

16、优选的，上述的地榆和长叶地榆药材特征图谱构建方法中，所述的供试品色谱图中应呈现7～8个特征峰，并应与对照药材参照物色谱中的特征峰保留时间相对应，其中峰1、峰2、峰4、峰6、峰8应与没食子酸、没食子儿茶素、儿茶素、鞣花酸、2,3,8-三-o-甲基鞣花酸对照品参照物峰保留时间相对应。

17、优选的，上述的地榆和长叶地榆药材特征图谱构建方法中，与鞣花酸参照物峰相对应的峰为s峰，计算峰3、峰5、峰7与s峰的相对保留时间，其相对保留时间应在规定值的±10％范围之内，规定值为峰3-0.48、峰5-0.85、峰7-1.32。

18、优选的，上述的地榆和长叶地榆药材特征图谱构建方法中，所述地榆药材对应的峰8与峰6的相对峰面积为0.060～0.230；所述长叶地榆药材对应的峰8与峰6的相对峰面积为0～0.057。

19、一种地榆和长叶地榆药材的特征图谱鉴别方法，采用上述的方法进行检测，分析检测结果。

20、与现有技术相比，本发明的有益效果是：

21、本发明的地榆和长叶地榆药材特征图谱构建方法，构建了地榆药材、长叶地榆药材的uplc特征图谱，充分全面反映地榆药材和长叶地榆药材的特征峰信息，共有峰的分离度均好、基线平稳，且方法稳定，精密度，重现性较好。通过构建地榆、长叶地榆药材的uplc特征图谱，为地榆、长叶地榆药材质量提供快速、全面的检测及鉴别手段，能够直观评估地榆药材和长叶地榆药材的质量差异情况，有效区分不同基源的地榆药材。