一种低共熔溶剂在农药、农药代谢物或抗生素检测中的应用

本发明属于农药检测，具体涉及一种低共熔溶剂在农药、农药代谢物或抗生素检测中的应用。

背景技术：

1、农药的使用能够有效促进农业生产。然而，过量使用农药会导致农药残留在环境中的分布和积累。只有不到0.1％的施用农药能达到目标害虫，而其余部分均可以进入环境区域。由于农药的不当使用，多种环境介质中均有农药被检出，其中水环境农药污染尤为严重，有必要建立环境水体中的农药多残留检测方法。环境样品中的农药残留分析具有其特殊性与复杂性，农药残留水平较低且背景复杂，其前处理过程需尽可能去除基质干扰并增加富集倍数，检测手段则要求灵敏度高、特异性好。

2、低共熔溶剂(des)是指由一定化学计量比的氢键受体和氢键供体组合而成的两组分或三组分低共熔混合物，其凝固点显著低于各个组分纯物质的熔点，通常在100℃以下，为液体，由abbott等人于2003年首次报道。des不仅具备离子液体的优点，还具有廉价、易制备、可降解、生物相容性好等性能。与传统有机萃取剂相比，des除绿色环保性能外，可设计性是其另一大优势。通过改变氢键供受体的种类和比例，来调控des的物性以适应萃取操作窗口以及它对溶质组分的氢键形成能力和作用强度，提高对溶质的识别能力。分散液液微萃取(dllme)于2006年首次被rezaee等人报道用于浓缩水中的有机污染物，是一种简单、快速、高效、低成本和环保的样品处理技术。过程包括将二元溶剂混合物(萃取剂和分散剂)快速注入含有目标分析物的水性样品中，形成乳浊液，萃取剂以非常小的液滴形式分散，分析物被萃取到萃取溶剂液滴中。其需要的溶剂更为少量，且产生的废液更少。

3、des与dllme相结合，可以充分发挥两者的优势，形成萃取和浓缩一体化的绿色环保新技术，具有操作简单、回收率高、富集倍数高、预处理微型化等特点。目前开发的des结合dllme进行农药残留分析检测的方法，大多只能针对几种或一类化合物，可同时检测的目标化合物种类少，且前处理过程中多会用到分散剂。因此如何提供一种能够同时检测多种目标化合物的des，实现对多种目标农药的检测，成为了亟待解决的问题。

技术实现思路

1、针对现有技术的不足，本发明的目的在于提供一种低共熔溶剂在农药、农药代谢物或抗生素检测中的应用。本发明提供的低共熔溶剂具有绿色环保、成本低廉等优点，且该低共熔溶剂疏水性良好，易与水相分离，可同时提取几十种包括农药、代谢物、抗生素的目标化合物，相比现有仅针对一类或某几种目标化合物提取的低共熔溶剂，具有更大优势，在农药多残留检测方面具有高效分离能力以及高灵敏度和高选择性，可更精准地进行定性与定量分析。

2、为达到此发明目的，本发明采用以下技术方案：

3、一方面，本发明提供了一种低共熔溶剂在农药、农药代谢物或抗生素检测中的应用，所述低共熔溶剂的氢键受体为麝香草酚和/或甲基三辛基氯化铵，氢键供体为peg-200(聚乙二醇200)和/或正癸酸。

4、所述农药包括多菌灵、吡虫啉、啶虫脒、甲基硫菌灵、莠灭净、西玛津、硝磺草酮、砜嘧磺隆、克百威、灭草松、二甲四氯、扑草净、莠去津、五氟磺草胺、烟嘧磺隆、苄嘧磺隆、双草醚、水胺硫磷、咯菌腈、吡嘧磺隆、嘧菌酯、啶酰菌胺、戊唑醇、戊唑醇、三唑磷、腐霉利、异丙甲草胺、丙环唑、噻呋酰胺、苯醚甲环唑、莎稗磷、吡唑醚菌酯、噻嗪酮、丙草胺、丁草胺、噁草酮、二甲戊灵、甲氰菊酯、毒死蜱、噻螨酮或哒螨灵中任意一种或至少两种的组合。

5、所述农药代谢物包括6-氯-n,n-二甲基-3-吡啶胺(im-1-4)、吡虫啉烯烃、吡虫啉脲、脱异丙基莠去津(dia)、去甲基啶虫脒、3-羟基克百威、脱乙基莠去津(dea)、氰氟草二酸、氰氟草酸、3,5,6-三氯-2-吡啶酚(tcp)、4-氯-2-甲基苯酚(4-mcp)或氧化毒死蜱(cpo)中任意一种或至少两种的组合。

6、所述抗生素包括恩诺沙星、丹诺沙星、环丙沙星、双氟沙星、奥比沙星、司帕沙星、沙拉沙星、诺氟沙星、氟罗沙星、麻保沙星、氧氟沙星、恶喹酸或氟甲喹中任意一种或至少两种的组合。

7、上述特定组成的低共熔溶剂具有绿色环保、成本低廉等优点，且该低共熔溶剂疏水性良好，易与水相分离，可同时提取几十种包括农药、代谢物、抗生素的目标化合物，相比现有仅针对一类或某几种目标化合物提取的低共熔溶剂，具有更大优势，在农药多残留检测方面具有高效分离能力以及高灵敏度和高选择性，可更精准地进行定性与定量分析。

8、优选地，所述氢键受体为麝香草酚，氢键供体为正癸酸。

9、上述特定氢键受体和氢键供体能够进一步提高检测的回收率。

10、优选地，所述氢键受体与氢键供体的摩尔比为1:2-2:1，，例如1:2、1:1或2:1等，但不限于以上所列举的数值，上述数值范围内其他未列举的数值同样适用，优选1:2。

11、另一方面，本发明还提供了一种农药、农药代谢物或抗生素的检测方法，所述检测方法包括以下步骤：

12、将待测样品与如上所述的低共熔溶剂混合提取，之后离心，取上层提取液进行液相色谱检测，得到检测结果，根据检测结果判断待测样品中农药、农药代谢物或抗生素的存在情况。

13、所述农药包括多菌灵、吡虫啉、啶虫脒、甲基硫菌灵、莠灭净、西玛津、硝磺草酮、砜嘧磺隆、克百威、灭草松、二甲四氯、扑草净、莠去津、五氟磺草胺、烟嘧磺隆、苄嘧磺隆、双草醚、水胺硫磷、咯菌腈、吡嘧磺隆、嘧菌酯、啶酰菌胺、戊唑醇、戊唑醇、三唑磷、腐霉利、异丙甲草胺、丙环唑、噻呋酰胺、苯醚甲环唑、莎稗磷、吡唑醚菌酯、噻嗪酮、丙草胺、丁草胺、噁草酮、二甲戊灵、甲氰菊酯、毒死蜱、噻螨酮或哒螨灵中任意一种或至少两种的组合。

14、所述农药代谢物包括6-氯-n,n-二甲基-3-吡啶胺、吡虫啉烯烃、吡虫啉脲、脱异丙基莠去津、去甲基啶虫脒、3-羟基克百威、脱乙基莠去津、氰氟草二酸、氰氟草酸、3,5,6-三氯-2-吡啶酚、4-mcp或氧化毒死蜱中任意一种或至少两种的组合。

15、所述抗生素包括恩诺沙星、丹诺沙星、环丙沙星、双氟沙星、奥比沙星、司帕沙星、沙拉沙星、诺氟沙星、氟罗沙星、麻保沙星、氧氟沙星、恶喹酸或氟甲喹中任意一种或至少两种的组合。

16、上述方法将特定低共熔溶剂应用于分散液液微萃取前处理过程中，方法集萃取与浓缩为一体，实验操作简便且所需时间短，所需样品体积小，提取剂用量微量，是一种灵敏度高的前处理方法，为环境水体中多种农兽药和农药代谢物的提取提供了新的选择，并展示了低共熔溶剂作为绿色溶剂取代传统疏水性有机溶剂的潜力。

17、优选地，检测对象为农药或农药代谢物时，所述待测样品与低共熔溶剂混合提取前还经过样品盐浓度调节，所述调节至待测样品中氯化钠的质量浓度为6-10％，例如6％、7％、8％、9％或10％等，但不限于以上所列举的数值，上述数值范围内其他未列举的数值同样适用。

18、优选地，所述提取采用震荡提取，所述震荡提取的时间为1.5-2.5min，例如1.5min、1.6min、1.7min、1.8min、1.9min、2min、2.1min、2.2min、2.3min、2.4min或2.5min等，但不限于以上所列举的数值，上述数值范围内其他未列举的数值同样适用。

19、优选地，所述液相的色谱柱为c18色谱柱。

20、优选地，所述液相的柱温为35-45℃，流动相流速为0.15-0.25ml/min，其中柱温可以是35℃、36℃、37℃、38℃、39℃、40℃、41℃、42℃、43℃、44℃或45℃等，流速可以是0.15ml/min、0.16ml/min、0.17ml/min、0.18ml/min、0.19ml/min、0.2ml/min、0.21ml/min、0.22ml/min、0.23ml/min、0.24ml/min或0.25ml/min等，但不限于以上所列举的数值，上述数值范围内其他未列举的数值同样适用。

21、优选地，所述液相的流动相包括流动相a和流动相b，所述流动相a为甲酸水溶液，所述流动相b为乙腈。

22、优选地，所述甲酸水溶液的体积分数为0.08-0.12％，例如0.08％、0.09％、0.1％、0.11％或0.12％等，但不限于以上所列举的数值，上述数值范围内其他未列举的数值同样适用。

23、优选地，检测对象为农药，所述液相的洗脱程序如下：

24、第0-1min，流动相a的体积分数为88-92％，流动相b的体积分数为8-12％；

25、第1-1.1min，流动相a的体积分数由88-92％匀速变为48-52％，流动相b的体积分数由8-12％匀速变为48-52％；

26、第1.1-15min，流动相a的体积分数由48-52％匀速变为1-3％，流动相b的体积分数由48-52％匀速变为97-99％；

27、优选地，检测对象为农药代谢物，所述液相的洗脱程序如下：

28、第0-1min，流动相a的体积分数为88-92％，流动相b的体积分数为8-12％；

29、第1-1.1min，流动相a的体积分数由88-92％匀速变为48-52％，流动相b的体积分数由8-12％匀速变为48-52％；

30、第1.1-8min，流动相a的体积分数由48-52％匀速变为1-3％，流动相b的体积分数由48-52％匀速变为97-99％；

31、优选地，检测对象为抗生素，所述液相的洗脱程序如下：

32、第0-1min，流动相a的体积分数为88-92％，流动相b的体积分数为8-12％；

33、第1-1.1min，流动相a的体积分数由88-92％匀速变为48-52％，流动相b的体积分数由8-12％匀速变为48-52％；

34、第1.1-7min，流动相a的体积分数由48-52％匀速变为1-3％，流动相b的体积分数由48-52％匀速变为97-99％。

35、优选地，所述得到检测结果后还包括根据检测结果结合标准曲线计算待测样品中农药、农药代谢物或抗生素含量。

36、相对于现有技术，本发明具有以下有益效果：

37、(1)本发明提供了一种低共熔溶剂在农药、农药代谢物或抗生素检测中的应用，其中特定组成的低共熔溶剂具有绿色环保、成本低廉等优点，且该低共熔溶剂疏水性良好，易与水相分离，可同时提取几十种包括农药、代谢物、抗生素的目标化合物，相比现有仅针对一类或某几种目标化合物提取的低共熔溶剂，具有更大优势，在农药多残留检测方面具有高效分离能力以及高灵敏度和高选择性，可更精准地进行定性与定量分析。

38、(2)本发明还提供了一种农药、农药代谢物或抗生素的检测方法，通过将特定低共熔溶剂应用于分散液液微萃取前处理过程中，方法集萃取与浓缩为一体，实验操作简便且所需时间短，所需样品体积小，提取剂用量微量，是一种灵敏度高的前处理方法，为环境水体中多种农兽药和农药代谢物的提取提供了新的选择，并展示了低共熔溶剂作为绿色溶剂取代传统疏水性有机溶剂的潜力。