检测胃癌三级淋巴结相关特征指标的试剂在制备胃癌预后试剂中的应用

本发明属于生物医药检测领域，涉及检测胃癌三级淋巴结相关特征指标的试剂在制备胃癌预后试剂中的应用。

背景技术：

1、早期胃癌患者的5年生存率可超过90％。然而，大约一半的胃癌患者在诊断时已进入晚期，5年生存率降至30％以下。尽管胃癌(gc)的发病率和死亡率显著降低，但它仍然是全球癌症负担的重要贡献者。目前，肿瘤-淋巴结-转移(tnm)分期系统被认为是gc预后预测和治疗决策的基础。然而，根据最新的tnm分期系统对胃癌患者的预后分层往往很差，目前的tnm分期系统提供的预后信息不足，无法准确为临床治疗提供有益的帮助，这凸显了迫切需要发现与胃癌预后的新生物标志物。

2、三级淋巴样结构(tertiary lymphoid structure，tlss)，在许多癌症类型中形成，除了少数例外，它们的存在与良好的预后和对免疫治疗的反应有关。tlss是在肿瘤部位的非淋巴样组织中发育的异位淋巴样器官。继发性淋巴器官发生和tlss新生之间的关键共同特征已经确定。tlss存在于肿瘤中不同的成熟状态，最终形成生发中心。tlss在抗肿瘤适应性免疫应答中的作用机制正在被大量研究。

3、组织驻留记忆t细胞(tissue resident memory t cells，trm)，已在很多组织中发现，被称为trm细胞。trm细胞会表达整合素cd103，将它们束缚在驻留组织中，因此trm也被定义为cd103+t细胞。

4、cxcl13+cd103+cd8+t细胞在胃癌组织三级淋巴结中高度富集，目前尚未见关于cxcl13+cd103+cd8+t细胞与胃癌预后关系的相关报道。

技术实现思路

1、本发明的目的是针对现有技术的上述不足，提供检测胃癌三级淋巴结相关特征指标的试剂在制备胃癌预后试剂中的应用。

2、本发明的另一目的是提供一种预测或辅助预测胃癌患者预后情况的产品。

3、在肿瘤免疫研究中，trm被发现与抗肿瘤免疫显著相关。我们的研究发现，在预后良好的胃癌患者的胃癌组织三级淋巴结中高度富集一群cxcl13+trm(即cxcl13+cd103+cd8+t细胞)，这群细胞与积极的抗肿瘤免疫应答相关，并且该细胞特征的基因组成的集合能够预测胃癌的生存预后。综上我们开发出来通过检测胃癌组织中cxcl13+trm，或者通过检测cxcl13+trm特征基因表达量来预测胃癌患者预后的方法。

4、本发明的目的可通过以下技术方案实现：

5、检测胃癌三级淋巴结相关特征指标的试剂在制备预测或辅助预测胃癌患者预后情况的产品中的应用；所述的胃癌三级淋巴结相关特征指标选自以下(i)和/或(ii)：

6、(i)胃癌三级淋巴结中cxcl13+cd103+cd8+t细胞的占比；

7、(ii)包含cxcl13+trm细胞特征基因集在内的胃癌组织所有基因表达量；所述的cxcl13+trm细胞特征基因集由cxcl13、entpd1、havcr2、tigit、tnfrsf1b、ctla4、phlda1、sirpg、rbpj、tuba1b、gapdh、tox、cd7、tpi1、dusp4、sla、ac007952.4、pkm、ccnd2、fkbp1a、cblb、smc4、ptpn7、cd82、hspb1、klrd1、hsph1、hmgb、ivns1abp、lyst、hspa1a、lag3、h2afz、ccl3、rgs2、pgam1、gbp2、tubb、hspd1、hsp90aa1、hspa1b、hmgn2及birc3组成。

8、作为本发明的一种优选，检测三级淋巴结中cxcl13+cd103+cd8+t细胞的占比的试剂为检测三级淋巴结中cxcl13+cd103+cd8+t细胞的占比的组织免疫荧光染色试剂。

9、作为本发明的一种优选，检测胃癌组织全部基因表达量的试剂为检测所述的胃癌组织全部基因的特异性引物的组合、基因芯片或高通量测序试剂。

10、检测胃癌三级淋巴结相关特征指标的试剂以及记载有数学模型和/或数学模型使用方法的介质在制备预测或辅助预测胃癌患者预后情况的产品中的应用；所述的胃癌三级淋巴结相关特征指标选自以下(i)和/或(ii)：

11、(i)胃癌三级淋巴结中cxcl13+cd103+cd8+t细胞的占比；

12、(ii)包含cxcl13+trm细胞特征基因集在内的胃癌组织所有基因表达量；所述的cxcl13+trm细胞特征基因集由cxcl13、entpd1、havcr2、tigit、tnfrsf1b、ctla4、phlda1、sirpg、rbpj、tuba1b、gapdh、tox、cd7、tpi1、dusp4、sla、ac007952.4、pkm、ccnd2、fkbp1a、cblb、smc4、ptpn7、cd82、hspb1、klrd1、hsph1、hmgb、ivns1abp、lyst、hspa1a、lag3、h2afz、ccl3、rgs2、pgam1、gbp2、tubb、hspd1、hsp90aa1、hspa1b、hmgn2及birc3组成；

13、所述数学模型为：es＝cxcl13+trm细胞特征基因集中所有基因的表达总和-胃癌组织中非cxcl13+trm细胞特征基因集中的基因表达总和；

14、所述的数学模型使用方法为以下任意一种或两种：

15、a)将三级淋巴结中cxcl13+cd103+cd8+t细胞的占比与最佳cut-off值0.0778％比较，高于cut-off值判断为生存预后好，低于cut-off值判断为生存预后差；b)将胃癌组织基因表达量数据带入公式es＝cxcl13+trm细胞特征基因集中所有基因的表达总和-胃癌组织中非cxcl13+trm细胞特征基因集中的基因表达总和，根据计算结果，与cut-off值进行对比，大于cut-off值生存预后更好；总生存期的最佳cut-off值为0.395033364，无病生存期的最佳cut-off值为0.8725297。

16、作为本发明的一种优选，检测三级淋巴结中cxcl13+cd103+cd8+t细胞的占比的试剂为检测三级淋巴结中cxcl13+cd103+cd8+t细胞的占比的组织免疫荧光染色试剂；检测胃癌组织全部基因表达量的试剂为检测所述的胃癌组织全部基因的基因芯片或高通量测序试剂。

17、一种预测或辅助预测胃癌患者预后情况的产品，包含(i)或(ii)中的任意一种或多种：

18、(i)检测胃癌三级淋巴结中cxcl13+cd103+cd8+t细胞的占比的组织免疫荧光染色试剂；

19、(ii)检测包含cxcl13+trm细胞特征基因集在内的胃癌组织所有基因表达量的试剂；所述的cxcl13+trm细胞特征基因集由cxcl13、entpd1、havcr2、tigit、tnfrsf1b、ctla4、phlda1、sirpg、rbpj、tuba1b、gapdh、tox、cd7、tpi1、dusp4、sla、ac007952.4、pkm、ccnd2、fkbp1a、cblb、smc4、ptpn7、cd82、hspb1、klrd1、hsph1、hmgb、ivns1abp、lyst、hspa1a、lag3、h2afz、ccl3、rgs2、pgam1、gbp2、tubb、hspd1、hsp90aa1、hspa1b、hmgn2及birc3组成。

20、作为本发明的一种优选，检测胃癌组织全部基因表达量的试剂为检测所述的胃癌组织全部基因的特异性引物的组合、基因芯片或高通量测序试剂。

21、一种预测或辅助预测胃癌患者预后情况的系统，包含所述的产品，以及记载有数学模型和/或数学模型使用方法的介质，所述的数学模型用于对所述的产品所获得的数据进行处理进而判断样本预后情况。

22、作为本发明的一种优选，所述的数学模型为es＝cxcl13+trm细胞特征基因集中所有基因的表达总和-胃癌组织中非cxcl13+trm细胞特征基因集中的基因表达总和。

23、作为本发明的一种优选，所述的数学模型使用方法为以下任意一种或两种：a)将三级淋巴结中cxcl13+cd103+cd8+t细胞的占比与最佳cut-off值0.0778％比较，高于cut-off值判断为生存预后好，低于cut-off值判断为生存预后差；b)将胃癌组织基因表达量数据带入公式es＝cxcl13+trm细胞特征基因集中所有基因的表达总和-胃癌组织中非cxcl13+trm细胞特征基因集中的基因表达总和，根据计算结果，与cut-off值进行对比，大于cut-off值生存预后更好；总生存期的最佳cut-off值为0.395033364，无病生存期的最佳cut-off值为0.8725297。

24、有益效果：

25、本发明基于对肿瘤微环境的深入研究，发现cxcl13+trm在预后良好的胃癌中高度富集，与良好的预后相关。本发明通过对cxcl13+trm的特征基因进行分析，获取动态、多基因表达信息找到能够预测胃癌预后的标记物，并且根据上述标记物建立了胃癌预后模型，用于胃癌患者预后的预测，本发明预测方法能够获取动态的、多基因肿瘤微环境信息，准确预测胃癌患者预后。