枸杞不同入药部位或其水提物的特征图谱的构建方法、检测方法和应用与流程

本技术涉及中药检测，特别涉及枸杞不同入药部位或其水提物的特征图谱的构建方法、检测方法和应用；所述枸杞不同入药部位或其水提物包括枸杞根皮、枸杞茎皮、枸杞根木芯、枸杞根皮水提物、枸杞茎皮水提物和枸杞根木芯水提物。

背景技术：

1、枸杞为茄科枸杞属多年生木本植物，根据入药部位具有不同的药用价值。地骨皮为茄科植物枸杞（lycium chinense mill.）或宁夏枸杞（lycium barbarum l.）的干燥根皮，秋后采挖根部，洗净，抽取木芯，剥取根皮，晒干而得，味甘，寒，归肺、肝、肾经，具有凉血除蒸，清肺降火等功效，常用于阴虚潮热，骨蒸盗汗，肺热咳嗽，咯血，衄血，内热消渴等症状。

2、古籍中地骨皮常载于枸杞条下，西汉时期枸杞根茎叶果实均可入药，尚未明确药用部位，《本草衍义》首次提出“枸杞”作为梗皮部位的药材名，将其与枸杞子、根的药性做出区别：“枸杞当用梗皮，地骨当用根皮，枸杞子当用其红实，是一物有三用”，其中“梗”即植物的枝或茎，“梗皮”即与现代用语“茎(枝)皮”相契合。枸杞子实可明确区分，而根皮与茎皮较为相似，据调查研究其在性状上有一定的差异，但该差异的专属性和普属性的研究尚较少，目前尚无报道其他区分方法。

3、枸杞根皮、茎皮、根木芯都含有生物碱类、有机酸及其酯类、蒽醌类等有效化合物成分，但是，因其组成上的差异，在药用上又有所区分。2020版《中国药典》规定地骨皮药用部位为干燥根皮，地骨皮与茎皮以及根木芯应区别药用，不能混用或错用，可见，针对枸杞不同的入药部位提供其有效区分方法是很有必要的。

4、兰婷等通过采用性状鉴别和显微鉴别的方法区分地骨皮及其茎皮，然而，该方法并未研究其化学成分的差异，可靠性有待改善。钱鑫等对枸杞根药材进行了研究，枸杞根药材中用药部位包含了枸杞根木芯部位，研究中主要对枸杞主根建立了定性研究以及测定其中绿原酸、阿魏酸、甜菜碱等的含量，但是这几种成分专属性较差，并不适合作为枸杞不同入药部位中的指标成分。另外，文献报道中常见采用uplc或hplc法测定地骨皮药材地骨皮乙素的含量，然而，地骨皮乙素不仅仅是地骨皮主要活性成分，在枸杞茎皮以及根木芯中地骨皮乙素含量均较高，仅测定地骨皮乙素也不能对根皮、茎皮和根木芯三者进行有效区分。

5、水提物是中成药、中药配方颗粒等中药制剂的重要原料之一，由于失去了药材的特征，无法进行有效的鉴别，因此，针对枸杞不同入药部位的水提物，也有必要建立合适的区分方法。

技术实现思路

1、基于此，本技术的目的包括提供一种枸杞不同入药部位或其水提物的特征图谱的构建方法、检测方法和应用，可以对枸杞不同入药部位和其水提物进行有效区分，可用于对枸杞不同入药部位和其水提物进行鉴别。

2、本技术的一个方面，提供一种枸杞不同入药部位或其水提物的特征图谱的构建方法，所述枸杞不同入药部位或其水提物包括枸杞根皮、枸杞茎皮、枸杞根木芯、枸杞根皮水提物、枸杞茎皮水提物和枸杞根木芯水提物；

3、所述枸杞不同入药部位或其水提物的特征图谱的构建方法包括：

4、取供试的枸杞不同入药部位或其水提物，加提取溶剂进行提取，制得供试品溶液；

5、取所述供试品溶液进行液相色谱分析，建立枸杞不同入药部位或其水提物的特征图谱；

6、其中，所述液相色谱分析的条件包括：

7、（1）流动相a为乙腈和甲醇的混合液，所述乙腈和所述甲醇的体积比为1:(1.5~2.5)，

8、流动相b为三氟乙酸、三乙胺和水的混合液，所述三氟乙酸在所述流动相b中的体积占比为0.2%~0.4%，所述三乙胺在所述流动相b中的体积占比为0.08%~0.12%；

9、（2）采用梯度洗脱，所述梯度洗脱的程序包括：

10、0~8min，维持所述流动相a的体积百分比为11%，

11、8min~18min，所述流动相a的体积百分比由11%上升至13%，

12、18min~28min，所述流动相a的体积百分比由13%上升至18%，

13、28min~33min，所述流动相a的体积百分比由18%上升至19%，

14、33min~38min，维持所述流动相a的体积百分比为19%，

15、38min~65min，所述流动相a的体积百分比由19%上升至56%。

16、本技术的再一方面，提供一种枸杞不同入药部位或其水提物的检测方法，所述枸杞不同入药部位或其水提物包括枸杞根皮、枸杞茎皮、枸杞根木芯、枸杞根皮水提物、枸杞茎皮水提物和枸杞根木芯水提物；

17、所述枸杞不同入药部位或其水提物的检测方法包括：

18、取待测的枸杞不同入药部位或其水提物，加提取溶剂进行提取，制得待测品溶液；

19、取所述待测品溶液进行液相色谱分析，检测所述待测品溶液中指标成分的含量，所述指标成分包括咖啡酰丁二胺、n-阿魏酰基-1, 4-丁二胺、地骨皮乙素、地骨皮甲素、枸杞素a和枸杞素b；

20、其中，所述液相色谱分析的条件包括：

21、（1）流动相a为乙腈和甲醇的混合液，所述乙腈和所述甲醇的体积比为1:(1.5~2.5)，

22、流动相b为三氟乙酸、三乙胺和水的混合液，所述三氟乙酸在所述流动相b中的体积占比为0.2%~0.4%，所述三乙胺在所述流动相b中的体积占比为0.08%~0.12%；

23、（2）采用梯度洗脱，所述梯度洗脱的程序包括：

24、0~8min，维持所述流动相a的体积百分比为11%，

25、8min~18min，所述流动相a的体积百分比由11%上升至13%，

26、18min~28min，所述流动相a的体积百分比由13%上升至18%，

27、28min~33min，所述流动相a的体积百分比由18%上升至19%，

28、33min~38min，维持所述流动相a的体积百分比为19%，

29、38min~65min，所述流动相a的体积百分比由19%上升至56%。

30、本技术的再一方面，提供上述任一技术方案所述的特征图谱的构建方法构建得到的特征图谱和/或上述任一技术方案所述的检测方法在鉴别枸杞不同入药部位或其水提物中的应用，鉴别枸杞不同入药部位或其水提物包括：

31、（1）鉴别枸杞根皮、枸杞茎皮和枸杞根木芯；

32、（2）鉴别枸杞根皮水提物、枸杞茎皮水提物和枸杞根木芯水提物；

33、（3）鉴别枸杞根皮和枸杞根皮的伪品；

34、（4）鉴别枸杞根皮的水提物和枸杞根皮的伪品的水提物；

35、（5）鉴别枸杞茎皮和枸杞茎皮的伪品；

36、（6）鉴别枸杞茎皮的水提物和枸杞茎皮的伪品的水提物；

37、（7）鉴别枸杞根木芯和枸杞根木芯的伪品；

38、（8）鉴别枸杞根木芯的水提物和枸杞根木芯的伪品的水提物。

39、本技术通过建立合适的色谱条件对枸杞不同入药部位或其水提物进行液相色谱分析，构建其特征图谱，得到的特征图谱具有丰富的特征峰信息，各特征峰的分离效果好，能够很好的表征原料到汤剂的物质传递，为枸杞不同入药部位和其水提物的质量提供快速、全面的检测手段。

40、本技术对枸杞不同入药部位和其水提物的特征成分进行大量的研究，通过建立合适的色谱条件，获得8个共有特征峰：峰1、峰2、峰3、峰4、峰5、峰6、峰7和峰8，并指认了其中的咖啡酰丁二胺、n-阿魏酰基-1, 4-丁二胺、地骨皮乙素、地骨皮甲素、枸杞素a和枸杞素b，这些共有峰和其在特征图谱中展现的峰信息可以作为枸杞不同入药部位或其水提物的鉴定基准。

41、本技术的特征图谱的构建方法和/或检测方法可靠性强，专属性好，可以用于检测枸杞不同入药部位或其水提物中专属性较强的成分的含量，进一步可以将其作为标识成分，并用于作为鉴定依据；优选地，指标成分包括咖啡酰丁二胺、n-阿魏酰基-1, 4-丁二胺、地骨皮乙素、地骨皮甲素、枸杞素a和枸杞素b。