海龙蛤蚧口服液的质量检测方法与流程

本发明涉及一种海龙蛤蚧口服液的质量检测方法，属于中药成分检测。

背景技术：

1、海龙蛤蚧口服液具有温肾壮阳、补益精血的功效，临床用于腰足酸软、面色白，阳痿遗精，宫冷不孕，头目眩晕等症，其处方为：海龙39.1g、蛤蚧0.73g、人参4.68g、羊鞭4.68g、羊外肾4.68g、黄芩4.68g、熟地黄3.1g、菟丝子3.1g、何首乌3.1g、地黄3.1g、陈皮3.1g、当归1.56g、黄芪4.68g、阳起石1.56g、莲须1.56g、甘草1.56g、川芎1.56g、泽泻1.56g、锁阳1.56g、豆蔻1.56g、沉香1.56g、鹿茸1.56g、枸杞子1.56g、肉苁蓉0.78g、炙淫羊藿1.56g、肉桂1.56g、韭菜子1.56g、蛇床子1.56g、花椒0.31g；制法为：以上二十九味，加水煎煮二次，每次2小时，合并煎液，浓缩至相对密度为1.04～1.06(80℃)的清膏，加乙醇二倍量，冷藏12小时，滤过，浓缩，加水，冷藏，滤过；取蔗糖500g加水溶解与上述滤液合并，混匀，加苯甲酸1.7g使溶解，用氢氧化钠调ph值4.6～4.8，调整总量至1000ml，滤过，分装，灭菌，即得。

2、目前，关于海龙蛤蚧口服液的质量检测主要包括对人参、黄芩、陈皮、黄芪的鉴别以及对淫羊藿苷的含量测定，检测项目少，尤其是对处方中人参的鉴别方法为薄层色谱法，而无法对人参皂苷的含量进行检测，不利于对药品的质量进行更加有效的控制和检测。

3、需要说明的是，上述内容属于发明人的技术认知范畴，并不必然构成现有技术。

技术实现思路

1、本发明为了解决现有技术所存在的问题，提供了一种海龙蛤蚧口服液的质量检测方法，能够对海龙蛤蚧口服液的质量进行更加有效、全面的检测、评价和控制，保证药品的质量和临床效果。

2、本发明通过采取以下技术方案实现上述目的：

3、海龙蛤蚧口服液的质量检测方法，包括采用高效液相色谱-质谱法对人参皂苷rg1、人参皂苷re、人参皂苷rf与人参皂苷rb1的含量进行测定的方法和/或对黄岑苷的含量测定方法和/或对何首乌的薄层色谱鉴别方法。

4、在优选的实施方式中，采用高效液相色谱-质谱法对人参皂苷rg1、人参皂苷re、人参皂苷rf与人参皂苷rb1的含量进行测定的方法包括如下步骤：

5、(1)制备供试品溶液以及人参皂苷rg1、人参皂苷re、人参皂苷rf与人参皂苷rb1的混合对照品溶液；

6、(2)确定色谱和质谱条件；

7、其中，色谱条件为：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，柱温为40℃，流速为0.3ml/min；以乙腈为流动相a，水为流动相b进行梯度洗脱；

8、质谱条件为：采用三重四极杆串联质谱仪，离子源为电喷雾离子源，扫描方式为负离子模式，检测方式为多反应监测；

9、(3)测定：分别取供试品溶液、混合对照品溶液各1μl，注入高效液相色谱-质谱联用仪，测定，根据峰面积计算供试品溶液中各对照品的含量。

10、可选的，步骤(2)中，梯度洗脱程序为：0～12min：19％a，81％b；12～15min：19％→25％a，81％→75％b；15～35min：25％→80％a，75％→20％b。

11、可选的，步骤(2)中，质谱条件中还包括：

12、人参皂苷rg1的定量离子对为m/z799.5→637.4，定性离子对为m/z799.50→475.4；

13、人参皂苷re的定量离子对为m/z945.5→637.4，定性离子对为m/z945.55→475.4；

14、人参皂苷rf的定量离子对为m/z799.5→637.4，定性离子对为m/z799.50→475.4；

15、人参皂苷rb1的定量离子对为m/z1107.6→179.1，定性离子对为m/z1107.6→945.6。

16、可选的，步骤(1)中，供试品溶液的制备方法为：取海龙蛤蚧口服液100ml，加乙醚80ml，振摇提取，放置，弃去乙醚液，水层用水饱和正丁醇提取3次，每次50ml，合并正丁醇液，用氨试液洗涤2次，每次50ml，第一次洗涤放置12h，合并2次氨试液，用水饱和正丁醇提取2次，每次25ml，合并2次正丁醇液，蒸干，残渣加甲醇2ml使溶解，通过大孔吸附树脂柱，先后用水50ml、20％乙醇50ml和80％乙醇80ml洗脱，收集80％乙醇洗脱液，蒸干，残渣加甲醇溶解，定容至5ml，制成供试品溶液；

17、混合对照品溶液的制备方法为：分别取人参皂苷rg1对照品、人参皂苷re对照品、人参皂苷rf对照品及人参皂苷rb1对照品，加甲醇制成每1ml分别含0.1μg的混合对照品溶液。

18、在优选的实施方式中，对黄岑苷的含量测定方法包括如下步骤：

19、(1)制备供试品溶液和黄芩苷对照品溶液：

20、供试品溶液的制备方法为：取海龙蛤蚧口服液10ml置25ml量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，制成供试品溶液；

21、黄芩苷对照品溶液的制备方法为：取黄芩苷对照品10.23mg，置250ml量瓶中，加60％甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，取40ml，置50ml量瓶中，加60％甲醇稀释至刻度，摇匀，制成浓度为31.23μg/ml的黄芩苷对照品溶液；

22、(2)确定色谱条件：

23、以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，柱温25℃，流速为1ml/min，以体积比为47:53的甲醇-0.2％磷酸溶液为流动相进行洗脱，检测波长为280nm；

24、(3)测定：分别取黄芩苷对照品溶液与供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，根据峰面积计算供试品溶液中黄芩苷的含量。

25、在优选的实施方式中，对何首乌的薄层色谱鉴别方法包括如下步骤：

26、(1)制备供试品溶液、对照药材溶液、大黄素对照品溶液、阴性对照溶液；

27、供试品溶液的制备方法为：取海龙蛤蚧口服液50ml，加入质量分数37％的盐酸3ml后，加乙酸乙酯振摇提取3次，每次加乙酸乙酯30ml，合并乙酸乙酯提取液，蒸干，残渣加甲醇1ml使溶解，制成供试品溶液；

28、对照药材溶液的制备方法为：取何首乌对照药材0.2g，加质量分数37％的盐酸0.5ml后，加乙酸乙酯20ml，超声处理20分钟，滤过，滤液挥干，残渣浓缩至1ml，制成对照药材溶液；

29、大黄素对照品溶液的制备方法为：取大黄素对照品5.02mg，加甲醇5ml使溶解，制成大黄素对照品溶液；

30、阴性对照溶液的制备：取海龙蛤蚧口服液处方中除去何首乌的其他药味，制成缺何首乌阴性对照样品，采用同供试品溶液的制备方法制成阴性对照溶液；

31、(2)照薄层色谱法试验，吸取供试品溶液10～20μl、对照药材溶液2μl、大黄素对照品溶液1～2μl、阴性对照溶液10～20μl，分别点于同一硅胶g薄层板上，以体积比为15:2:1的甲苯-乙酸乙酯-甲酸混合溶液的上层溶液为展开剂，展开8cm，取出，晾干，置紫外光灯365nm下检视；供试品色谱中，在与对照药材和大黄素对照品相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点，阴性对照在相应位置没有斑点。

32、本技术的有益效果包括但不限于：

33、本发明提供的海龙蛤蚧口服液的质量检测方法，采用高效液相色谱-质谱法对海龙蛤蚧口服液中人参皂苷rg1、人参皂苷re、人参皂苷rf与人参皂苷rb1的含量进行了测定，采用高效液相色谱法对黄岑苷的含量进行了测定，采用薄层色谱法对何首乌进行了鉴别；所提供的检测方法精确性、稳定性、重复性好，能够对海龙蛤蚧口服液的质量进行更加有效、全面的检测、评价和控制，保证药品的质量和临床效果。