1.一种茶叶中α-淀粉酶抑制剂的高通量筛选方法,其特征在于包括以下步骤:
2.如权利要求1所述的一种茶叶中α-淀粉酶抑制剂的高通量筛选方法,其特征在于步骤1)中,茶叶提取液的制备方法为:取茶粉置于100℃沸水中进行水浸提30min,收集浸提液即为茶叶提取液。
3.如权利要求1所述的一种茶叶中α-淀粉酶抑制剂的高通量筛选方法,其特征在于步骤2)中,α-淀粉酶的固定化的步骤为:
4.如权利要求1所述的一种茶叶中α-淀粉酶抑制剂的高通量筛选方法,其特征在于步骤3)中,茶叶提取液与固定化的α-淀粉酶共同孵育的步骤为:将茶叶提取液和琼脂糖凝胶固定的α-淀粉酶混合,在37℃下以600rpm的转速涡旋20分钟使其孵育,其中,茶叶提取液与琼脂糖凝胶固定的α-淀粉酶的料液比为10:1。
5.如权利要求1所述的一种茶叶中α-淀粉酶抑制剂的高通量筛选方法,其特征在于步骤4)中,移除未与α-淀粉酶结合的化合物的方法为:孵育结束后,静置10分钟,吸出与茶叶提取液相同体积的上清液,再用相同体积的ph 6.8的磷酸盐缓冲液洗涤上述固定化α-淀粉酶的琼脂糖凝胶,洗涤次数为2-6次,以除去未与琼脂糖凝胶结合的茶叶化合物。
6.如权利要求1所述的一种茶叶中α-淀粉酶抑制剂的高通量筛选方法,其特征在于步骤5)中,释放靶点蛋白α-淀粉酶结合底物的方法为:用55%甲醇水溶液,ph 3.3的解析液处理琼脂糖凝胶,以释放捕获的潜在α-淀粉酶抑制剂,然后收集释放的馏分在真空冷冻浓缩仪中进行浓缩,对照组以同样的方式收集洗脱液,其中,解析液的使用量为每次吸出上清液体积的一半。
7.如权利要求1所述的一种茶叶中α-淀粉酶抑制剂的高通量筛选方法,其特征在于步骤6)中化合物筛选及结构鉴定具体为:将步骤5)收集的馏分复溶于10%甲醇水溶液并进行高分辨液质联用分析,筛选出α-淀粉酶组溶液中比对照组溶液中比值>1.5,student’s t-检验p<0.05的化合物,并根据化合物的精确分子量与二级质谱信息进行结构鉴定;上述高分辨液质联用分析所用仪器为uhplc-q-exactive;液相色谱条件为:waters hss t3色谱柱,100×2.1mm,1.8μm,流动相a为0.1%的甲酸溶液,流动相b为含0.1%甲酸的乙腈溶液,流动相梯度设置如下:0分钟,2%b;0.5分钟,2%b;10分钟,15%b;18分钟,40%b;20分钟,90%b;20.9分钟,90%b;21分钟,2%b;25分钟,2%b;流速0.4毫升/分钟,进样量3微升;质谱条件为:采用电喷雾离子源,离子化模式为正离子,毛细管电压为3.5kv,毛细管温度设置为300℃,辅助气温度和流速分别设置为350℃和10升/分钟,扫描范围为质荷比m/z100-1000。
8.如权利要求1所述的一种茶叶中α-淀粉酶抑制剂的高通量筛选方法,其特征在于步骤7)中化合物抑制α-淀粉酶活性测定方法为:对步骤6)筛选出来的化合物,通过购买标样或者从茶叶中分离纯化制备化合物单体,配制成不同浓度的母液,首先吸取0.1ml不同浓度的化合物溶液和0.05mlα-淀粉酶溶液于2ml离心管中,在25℃的水浴锅中孵育10分钟,其次加入0.2ml淀粉溶液后继续在25℃的水浴锅中孵育10分钟,接着再加入0.4ml dns试剂充分混匀,在100℃水浴锅中孵育10分钟,最后再吸取0.1ml反应液至96孔培养板中,用酶标仪在540nm处测量其吸光值,化合物对α-淀粉酶活性的抑制率由以下公式计算: