外泌体TMEM176B在制备诊断肿瘤的药物中的用途

本发明属于生物医药领域，涉及外泌体tmem176b在制备诊断肿瘤的药物中的用途。

背景技术：

1、目前，临床肿瘤诊断方法主要包括分子影像学、组织活检及血清肿瘤标志物检测等方法。其中，胃肠道肿瘤早期的筛查诊断多采用胃肠镜检查，结合血清肿瘤标志物癌胚抗原(cea)、甲胎蛋白(afp)、癌抗原19-9(ca19-9)、癌抗原72-4(ca72-4)、癌抗原242(ca242)；乳腺肿瘤最主要的方法为影像学检查，主要包括:x光射线、超声、磁共振、热图、冷光照射等；肺癌临床诊断方法有胸部x线片是肺癌患者初诊时或肺癌普查中最基本、最常用的方法。ct扫描目前已成为肺良恶性病变诊断、肺癌分期以及肺癌疗后随诊的最主要和最常用的检查方法；血清中甲胎蛋白(afp)及b超普检是目前肝癌临床诊断的常规方法。

2、尽管目前临床诊断方法能够实现一定程度的精准诊断，但仍存在缺乏诊断敏感性和特异性较高的肿瘤标志物，故早期诊断效率不高。因此，增加基于肿瘤病人外周血的无创早期诊断方法，对于及早发现并控制肿瘤发生、发展、转移，提高肿瘤治愈率具有重要的意义。

技术实现思路

1、本发明人经过深入的研究和创造性的劳动，得到了一种肿瘤诊断或者预后判断的标志物，其具有较高的灵敏度和同一性。由此提供了下述发明：

2、本发明的一个方面涉及外泌体来源的tmem176b蛋白或者检测外泌体来源的tmem176b蛋白的试剂在制备诊断肿瘤或者肿瘤患者预后判断的药物中的用途。

3、tmem176b是四次跨膜结构蛋白ms4a家族成员之一，其定位于细胞内多种细胞器膜上，具有调节胞内ca2+运输进而调节免疫细胞功能的作用。tmem176b在淋巴细胞中多表达与单核细胞、巨噬细胞、树突状细胞及rorγt+细胞。研究表明，降低树突状细胞中tmem176b表达可激活caspase-1/il-1β信号通路并提高树突状细胞抗肿瘤免疫功能，进而提高机体对免疫检查点阻断(immune checkpoint blockade，icb)治疗敏感性。另有报道显示，tmem176b在人结直肠肿瘤组织中高表达，与肿瘤病人预后具有显著的负相关性，并与临床icb治疗敏感性具有明确的相关性。

4、在本发明的一些实施方式中，所述的用途，其中，所述外泌体是外周血中的外泌体。

5、在本发明的一些实施方式中，所述的用途，其中，所述tmem176b蛋白的氨基酸序列如seq id no:1所示。

6、人tmem176b氨基酸序列如下：

7、mtqntvivngvamasrpsqpthvnvhihqesaltqllkag

8、gslkkflfhpgdtvpstarigyeqlalgvtqillgvvscvlgvc

9、lslgpwtvlsasgcafwagsvviaagagaivhekhpgklagyis

10、slltlagfatamaavvlcvnsfiwqtepflyidtvcdrsdpvfp

11、ttgyrwmrrsqenqwqkeecraymqmlrklftairalflav

12、cvlkvivslvslgvglrnlcgqssqplneegsekrllgensvpp

13、spsreqtstaivl(seq id no:1)

14、人tmem176b的核酸序列如下：

15、atgacgcaaaacacggtgattgtgaatggagttgctatggcctctaggccatcccagcccacccacgtcaacgtccacatccaccaggagtcagctttgacacaactgctgaaagctggaggttctctgaagaagtttctttttcaccctggggacactgtgccttccacagccaggattggttatgagcagctggctctaggggtgactcagatattgctgggggttgtgagttgtgttcttggagtgtgtctcagcttggggccctggactgtgctgagtgcctcaggctgtgccttctgggcggggtctgtggtgatcgcagcaggagctggggccattgtccatgagaagcacccgggcaaacttgctggctatatatccagcctgctcaccctggcaggctttgctacagctatggctgctgttgtcctctgcgtgaatagcttcatctggcaaactgaaccctttttatacatcgacactgtgtgtgatcgctcagaccctgtcttccctaccactgggtacagatggatgcggcgaagtcaagagaaccaatggcagaaggaggagtgtagagcttacatgcagatgctgaggaagttgttcacagcaatccgtgccctgttcctggctgtctgtgtcttgaaggtcattgtgtccttggtttccttgggagtaggtcttcgaaacttgtgtggccagagctcccagcccctgaatgaggaaggatcagagaagaggctactgggggagaattcagtgcccccttcgccctctagggagcagacctccactgccattgtcctgtga(seq id no:2)

16、在本发明的一些实施方式中，所述的用途，其中，所述检测外泌体来源的tmem176b蛋白的试剂包括：

17、(1)从受试者外周血提取外泌体的试剂；

18、(2)分离或富集外泌体或其内容物的试剂；和/或

19、(3)测定tmem176b蛋白浓度或含量的试剂。

20、在本发明的一些实施方式中，所述的用途，其中，第(1)项中，所述从受试者外周血提取外泌体的试剂包括exoquick试剂。

21、在本发明的一些实施方式中，所述的用途，其中，第(2)项中，所述分离或富集外泌体或其内容物的试剂为抗tmem176b抗体。

22、在本发明的一些实施方式中，所述的用途，其中，第(3)项中，测定tmem176b蛋白浓度或者含量的试剂包括用于测定tmem176b的elisa试剂、纳米流式细胞术试剂或免疫蛋白印迹试剂。

23、在本发明的一些实施方式中，所述的用途，其中，将受试者的tmem176b蛋白浓度与外泌体tmem176b蛋白的浓度或含量对肿瘤患者及健康对照组间的受试者工作曲线的截断值相比较：

24、如果受试者的tmem176b蛋白的浓度或含量大于截断值，判断患肿瘤的风险较高；

25、如果受试者的tmem176b蛋白的浓度或含量小于或等于截断值，判断患肿瘤的风险较低；

26、优选地，所述绘制所述工作曲线的肿瘤患者受试者样本和健康受试者样本的数量独立地大于或等于10、大于或等于20、大于或等于30、大于或等于50、大于或等于80、大于或等于100、大于或等于200或者大于或等于500。

27、在本发明的一些实施方式中，所述的用途，其中：

28、如果受试者的tmem176b蛋白的浓度或含量大于阈值，判断患肿瘤的风险较高；或者

29、如果受试者的tmem176b蛋白的浓度或含量小于或等于阈值，判断患肿瘤的风险较低；

30、优选地，所述阈值为0.5ng/μg(elisa检测法)或者0.45％(纳米流式检测法)。

31、在本发明的一些实施方式中，所述的用途，其中，tmem176b蛋白的浓度或含量通过elisa法或纳米流式检测法得到。

32、在本发明的一些实施方式中，所述的用途，其中，所述阈值通过elisa检测法或纳米流式检测法得到。

33、在本发明的一些实施方式中，所述的用途，其中，elisa检测法得到的tmem176b蛋白的浓度或含量或者阈值以“tmem176b蛋白的质量/外泌体质量”表示。

34、在本发明的一些实施方式中，所述的用途，其中，纳米流式检测法得到的tmem176b蛋白的浓度或含量或者阈值以“tmem176b阳性表达的外泌体/全部外泌体”表示。

35、在本发明的一些实施方式中，所述的用途，其中，被检测的样本为外周血样本。

36、在本发明的一些实施方式中，所述的用途，其中：

37、如果受试者的tmem176b蛋白的浓度或者含量大于健康受试者的tmem176b蛋白的浓度(例如，0.5ng/μg，elisa检测法)或者含量(例如，0.45％，纳米流式检测法)，判断患肿瘤的风险较高；

38、如果受试者的tmem176b蛋白的浓度或者含量小于或等于健康受试者的tmem176b蛋白浓度(例如，0.5ng/μg，elisa检测法)或者含量(例如，0.45％，纳米流式检测法)，判断患肿瘤的风险较低。

39、在本发明的一些实施方式中，所述的用途，其中，所述健康受试者的tmem176b蛋白的浓度或者含量是健康受试者的tmem176b蛋白的浓度或者含量的平均值。

40、在本发明的一些实施方式中，所述的用途，其中，所述健康受试者的tmem176b蛋白的浓度或者含量是健康受试者的tmem176b蛋白的浓度或者含量的最高值。

41、在本发明的一些实施方式中，所述的用途，其中，

42、如果肿瘤患者的tmem176b蛋白的浓度或者含量升高，判断预后变差或者生存期减少；

43、如果肿瘤患者的tmem176b蛋白的浓度或者含量降低，判断预后变好或者生存期增加。

44、本发明人在研究中发现，肿瘤病人外周血外泌体中tmem176b蛋白含量与肿瘤病人预后生存期具有显著负相关性。

45、在本发明的一些实施方式中，所述的用途，其中，所述肿瘤为选自结肠癌、直肠癌、胃癌、食管癌、肺癌、乳腺癌和肝癌中的一种或多种；

46、优选地，所述结肠癌为结肠腺癌；

47、优选地，所述胃癌为胃腺癌；

48、优选地，所述肺癌为肺腺癌。

49、发明的有益效果

50、外泌体来源的tmem176b蛋白能够作为肿瘤诊断和/或预后判断的标志物，具有良好的应用前景。