一种茺蔚子药材、含有炒茺蔚子的原料的高效液相特征图谱的构建方法与流程

本发明属于分析检测，具体涉及一种茺蔚子药材、含有炒茺蔚子的原料的高效液相特征图谱的构建方法。

背景技术：

1、炒茺蔚子为唇形科植物益母草leonurus japonicus houtt.的干燥成熟果实的加工炮制品。炒茺蔚子辛、苦，微寒，归心包、肝经，具有活血调经，清肝明目的功效。用于月经不调，经闭痛经，目赤翳障，头晕胀痛[2]。目前，从炒茺蔚子中共分离鉴定出的化合物类型主要包括环肽类、三萜类、黄酮类、甾醇类等。现代药效学研究表明，茺蔚子具有收缩子宫、降血压、抗氧化、抗癌等作用，可用于治疗肝经热盛所致的一切内外障眼病，高血压，面部肌肉痉挛、偏头痛、鼻渊(慢性副鼻窦炎)、突发耳聋等。

2、《中国药典》2020版中茺蔚子的炮制品收录了茺蔚子和炒茺蔚子，文献报道对炮制品炒茺蔚子及其相关制剂的质量控制方法进行研究较少，且并未对其特征图谱进行深入研究。文献报道中，化学成分，药理作用研究较多，关于药材、饮片的质量控制、特征图谱研究几乎没有，没有提取物和配方颗粒的深入研究。

3、吴世蓉等人采用为waters hss t3柱(150mm×2.1mm，1.8μm)，流动相为乙腈-0.1％三氟乙酸溶液(梯度洗脱)，流速为0.30ml/min，检测波长为254nm，柱温为30℃。以4-羟基苯甲酸为参照，测定18批茺蔚子饮片的uplc图谱。其中，梯度洗脱程序如下。uplc图谱检测结果见图1，图1为现有技术的方法测定18批茺蔚子饮片的uplc图谱。

4、

5、由图1可知，现有技术所用的方法仅针对茺蔚子饮片开展定性研究，并且指认的色谱峰成分较少，且所用的色谱方法得到的色谱图基线不平稳分离效果差。另外，上述方法所用的方法为超高效液相色谱法，实用性较差。

技术实现思路

1、有鉴于此，本发明要解决的技术问题在于提供一种茺蔚子药材、含有炒茺蔚子的原料的高效液相特征图谱的构建方法，本发明提供的方法适用性好，适用范围广，并且能够指认的色谱峰成分多，且得到的色谱图基线平稳，分离效果好。

2、本发明提供了一种茺蔚子药材、含有炒茺蔚子的原料的高效液相特征图谱的构建方法，包括以下步骤：

3、a)将茺蔚子药材或含有炒茺蔚子的原料用溶剂处理后，得到供试品溶液；

4、b)将供试品溶液采用高效液相色谱法测定，得到茺蔚子药材、含有炒茺蔚子的原料的高效液相特征图谱；

5、所述高效液相色谱法色谱条件为：色谱柱为c18柱；流动相a为乙腈，流动相b为0.1％三氟乙酸水溶液，梯度洗脱，所述梯度洗脱程序为：

6、

7、优选的，所述含有炒茺蔚子的原料包括炒茺蔚子饮片、炒茺蔚子提取物冻干粉或炒茺蔚子配方颗粒。

8、优选的，步骤a)为：

9、将茺蔚子药材或含有炒茺蔚子的原料与10％甲醇溶液混合后进行超声处理，放冷，再称定重量，用10％甲醇溶液补足减失重量，摇匀，滤过，取续滤液，得到供试品溶液。

10、优选的，所述茺蔚子药材或含有炒茺蔚子的原料与10％甲醇溶液的质量体积比为0.1g：25ml；

11、所述超声处理的时间为10～30min。

12、优选的，还包括对照药材参照物溶液的制备：茺蔚子对照药材与加水混合，加热回流，放冷，取续滤液，作为对照药材参照物溶液；

13、对照品参照物溶液的制备：取腺苷、尿苷、4-羟基苯甲酸对照品，加10％甲醇溶液制成每1ml各含10μg的混合溶液，作为对照品参照物溶液；

14、将对照药材参照物溶液与对照品参照物溶液采用高效液相色谱法测定，得到对照品参照物和对照药材参照物的色谱图；并根据对照品参照物和对照药材参照物的色谱图对茺蔚子药材、含有炒茺蔚子的原料hplc特征图谱的成分进行分析。

15、优选的，所述色谱柱为c18柱，柱温为25℃，理论板数按4-羟基苯甲酸峰计算应不低于6000。

16、优选的，所述流动相的流速为1.0ml/min。

17、优选的，所述高效液相色谱法的检测波长为254nm。

18、优选的，所述炒茺蔚子提取物冻干粉供试品的高效液相特征图谱中呈现10个特征峰，并与对照药材参照物的高效液相特征图谱中的10个特征峰保留时间相对应，与4-羟基苯甲酸对照品参照物峰相对应的峰为s峰，计算各特征峰与s峰的相对保留时间，相对保留时间应在规定值的±10％范围内，规定值为：0.21(峰1)、0.28(峰2)、0.31(峰3)、0.37(峰4)、0.48(峰5)、0.52(峰6)、1.19(峰8)、1.25(峰9)、1.52(峰10)；

19、所述炒茺蔚子配方颗粒供试品的高效液相特征图谱中呈现10个特征峰，并与对照药材参照物的高效液相特征图谱中的10个特征峰保留时间相对应，与4-羟基苯甲酸对照品参照物峰相对应的峰为s峰，计算各特征峰与s峰的相对保留时间，相对保留时间在规定值±10％范围内，规定值为：0.20(峰1)、0.28(峰2)、0.32(峰3)、0.37(峰4)、0.49(峰5)、0.53(峰6)、1.19(峰8)、1.23(峰9)、1.55(峰10)；

20、所述炒茺蔚子饮片供试品的高效液相特征图谱中呈现10个特征峰，并与对照药材参照物的高效液相特征图谱中的10个特征峰保留时间相对应，与4-羟基苯甲酸参照物相对应的峰为s峰，计算各特征峰与s峰的相对保留时间，其相对保留时间在规定值±10％范围内，规定值为0.21(峰1)、0.28(峰2)、0.32(峰3)、0.37(峰4)、0.48(峰5)、0.52(峰6)、1.19(峰8)、1.24(峰9)1.52(峰10)；

21、所述茺蔚子药材供试品的高效液相特征图谱中呈现10个特征峰，并与对照药材参照物的高效液相特征图谱中的10个特征峰保留时间相对应，与4-羟基苯甲酸参照物相对应的峰为s峰，计算各特征峰与s峰的相对保留时间，其相对保留时间在规定值±10％范围内，规定值为0.21(峰1)、0.28(峰2)、0.32(峰3)、0.37(峰4)、0.48(峰5)、0.52(峰6)、1.19(峰8)、1.24(峰9)1.52(峰10)。

22、与现有技术相比，本发明提供了一种茺蔚子药材、含有炒茺蔚子的原料的高效液相特征图谱的构建方法，包括以下步骤：a)将茺蔚子药材或含有炒茺蔚子的原料用溶剂处理后，得到供试品溶液；b)将供试品溶液采用高效液相色谱法测定，得到茺蔚子药材、含有炒茺蔚子的原料的高效液相特征图谱；所述高效液相色谱法色谱条件为：色谱柱为c18柱；流动相a为乙腈，流动相b为0.1％三氟乙酸水溶液，梯度洗脱，所述梯度洗脱程序为：0～10min，流动相a：0％，流动相b：100％；10～38min，流动相a：0％→4％，流动相b：100％→96％；38～55min，流动相a：4％→6％，流动相b：96％→94％；55～62min，流动相a：6％→9％，流动相b：94％→91％；62～70min，流动相a：9％→10％，流动相b：91％→90％；70～110min，流动相a：10％，流动相b：90％。本发明建立了高效液相特征图谱方法用于茺蔚子药材、炒茺蔚子饮片、炒茺蔚子提取物及炒茺蔚子配方颗粒的检测。本发明建立了炒茺蔚子提取物及炒茺蔚子配方颗粒的特征图谱，确认了10个共有特征峰，建立了茺蔚子药材及炒茺蔚子饮片的特征图谱，确认了10个共有特征峰，并对其相对保留时间进行了研究，保证了其化学组成稳定性和使用安全性。指认了3个指标成分，克服了单一成分含量测定难以反映整体含量的缺陷，可以从整体上、宏观上控制炒茺蔚子及其相关制剂的内在质量，保证了药物的疗效，使其相关制剂得到了更为正规的质量控制。本发明建立了茺蔚子药材及炒茺蔚子饮片的特征图谱，确认了10个共有特征峰，指认出了3个成分，可用于茺蔚子药材、炒茺蔚子饮片的质量控制。本发明方法稳定性好、精密度高、重现性好、便捷且易于掌握。本发明旨在构建一种高效液相特征图谱方法，全面反映炒茺蔚子及其相关制剂的质量水平，对炒茺蔚子饮片、炒茺蔚子提取物、炒茺蔚子配方颗粒及其相关制剂的质量评价及资源开发利用提供依据。

23、参见图2，图2为本发明的茺蔚子药材、炒茺蔚子饮片、炒茺蔚子提取物、炒茺蔚子配方颗粒色谱图对比，图2中，峰2：尿苷；峰5：腺苷；峰7(s)：4-羟基苯甲酸。由图2可知，本发明所提供的方法共有峰有10个，从药材到配方颗粒的化学成分一致性较好。

24、本发明可以增加炒茺蔚子的研究基础，对炒茺蔚子进行定性研究，同时在炒茺蔚子提取物、炒茺蔚子配方颗粒及其相关制剂的质量控制方面则更有优势。