一种三唑类抗真菌药物的检测试剂盒及其检测方法与流程

本技术涉及临床治疗药物监测的，具体涉及一种三唑类抗真菌药物的检测试剂盒及其检测方法。

背景技术：

1、药物能够预防、治疗和诊断疾病，与疾病的发生发展关系密切。药物经机体吸收入血，再分布到组织器官，最终经肝肾代谢排泄至体外。临床上开展治疗药物监测的药物有精神类药物、免疫抑制剂、心血管类药物、抗肿瘤药、抗真菌药及抗生素等。

2、体内抗真菌药的药物浓度和临床疗效及不良反应息息相关，不少药物因治疗范围窄，毒副作用大而需要进行实时监测。通过测定患者治疗用药的血浓度或其它体液浓度，根据药动学原理和计算方法拟定个体化给药方案，以提高疗效和降低不良反应，达到有效而安全治疗的目的。

3、目前，三唑类抗真菌药物的检测方法主流为液相色谱-质谱法，该检测方法需要专业的操作人员，需要先离心分离得到血浆，然后加入有机试剂和内标试剂，沉淀蛋白离心再次得到上清，建立标准曲线，检测实际样本时需要对建立的曲线进行校准，且前处理过程相对复杂耗时，不适用于现场及时检测；其它方法如免疫法和发光法容易受到类似物的干扰出现假阳性结果，准确性欠佳。

技术实现思路

1、为了快捷、方便地检测三唑类抗真菌药物的药物浓度，同时提高检测方法的准确性，本技术提供一种三唑类抗真菌药物的检测试剂盒及其检测方法。

2、第一方面，本技术提供了一种三唑类抗真菌药物的检测试剂盒，包括原位电离试剂盒、同位素内标工作溶液；所述同位素内标工作溶液以体积比为100：(5-10)：(1-5)的乙腈、异丙醇、醋酸铵作为稀释液。

3、本技术提供的试剂盒基于同位素稀释质谱法原理(idms，isotope dilution massspectrometry)进行定量检测，即采用与待测物具有相同分子结构的某种浓缩同位素物质作为稀释剂，与试样进行充分混合后使用质谱检测，结合同位素丰度的比值和已知同位素物质的浓度求得样品中待测物浓度；该方法灵敏、准确，可以降低基质效应，减小前处理的操作误差以及系统的误差。

4、本技术以上述体积比的乙腈、异丙醇、醋酸铵作为稀释液，以配制得到同位素内标工作溶液对三唑类抗真菌药物进行检测，可以有效提高检测方法的准确度和精密度。

5、优选地，所述稀释液为体积比为100：(7-10)：(1-3)的乙腈、异丙醇、醋酸铵。

6、在一个具体的实施方案中，所述乙腈、异丙醇、醋酸铵的体积比可以为100：5：1、100：7：1、100：10：1、100：5：3、100：7：3、100：10：3、100：5：5、100：7：5、100：10：5。

7、在一些具体的实施方案中，所述乙腈、异丙醇、醋酸铵的体积比还可以为100：5：(1-3)、100：7：(1-3)、100：10：(1-3)、100：(7-10)：3、100：(5-10)：3、100：10：(1-5)、100：(7-10)：5、100：(5-10)：5、100：10：(1-5)。

8、经过试验分析可知，本技术利用上述重量比的乙腈、异丙醇、醋酸铵作为稀释液，以配制同位素内标工作溶液，可以有效提高检测方法的准确度和精密度。

9、优选地，所述原位电离试剂盒包括壳体、纸芯、毛细管、钢珠；所述钢珠内嵌在上壳体的凹槽中；所述毛细管插在所述纸芯中间，纸芯发挥载样功能；所述纸芯由含有卡扣设计的上下壳体夹紧固定。

10、优选地，所述毛细管插在所述纸芯中间的深度为0.8-1.2mm。

11、原位电离试剂盒由壳体、纸芯、毛细管、钢珠等组成，集色谱分离和前处理功能于一体，极大程度上减少了样品分析时间，且更加便捷和低耗。钢珠内嵌在上壳体的凹槽中，提供电压传导功能；毛细管插在长条形纸芯中间，深度约为1mm，纸芯发挥载样功能；插了毛细管的纸芯由含有卡扣设计的上下壳体夹紧固定，壳体起到支撑保护作用。将液体滴加在纸芯上，液体溶剂进入毛细管，在高压电压驱动下形成电喷雾，进而进入检测器，从而进行分析。

12、优选地，所述三唑类抗真菌药物选自伏立康唑、氟康唑、艾沙康唑、泊沙康唑中的任意一种或多种。

13、优选地，所述三唑类抗真菌药物为伏立康唑，所述同位素内标工作溶液为0.05-50g/ml的伏立康唑-d3。

14、进一步地，所述三唑类抗真菌药物为伏立康唑，所述同位素内标工作溶液为0.1-10g/ml的伏立康唑-d3。

15、采用伏立康唑-d3(cas#:1217661-14-7)作为同位素内标工作溶液，与固定体积的待测样本充分混合后滴加至检测试剂盒中，插入便携式质谱分析系统中，对样品实现电喷雾离子化，并通过质谱系统进行分析，得到伏立康唑与伏立康唑-d3的信号峰面积比值，结合伏立康唑-d3的实际浓度，通过数据计算，得到样品中伏立康唑药物的浓度。

16、第二方面，本技术提供了一种三唑类抗真菌药物的检测方法，利用上述检测试剂盒进行检测，包括以下步骤：

17、将待测样本置于所述同位素内标工作溶液中，涡旋充分混合，将混匀的液体滴加在所述原位电离试剂盒上，静置5-30s后，插入cell小型便携式质谱仪中，对样品实现电喷雾离子化，并通过质谱系统进行分析，得到所述三唑类抗真菌药物与所述同位素的信号峰面积比值，计算得到所述待测样本中三唑类抗真菌药物的含量。

18、优选地，所述静置的时间为5-15s。

19、经过试验分析可知，在检测过程中，本技术将混匀的液体滴加在原位电离试剂盒上，静置一定的时间后，可以有效提高检测方法的准确度和精密度。

20、优选地，所述三唑类抗真菌药物为伏立康唑时，所述质谱仪分析条件为：伏立康唑检测模式：正模式，前体离子：m/z：350.1，定量离子m/z：127.1、224.0、281.1中的一种或多种，离子选择能量:0.5～5v，碰撞诱导解离能量：1-4v；

21、伏立康唑-d3：检测模式：正模式，前体离子m/z：353.1，定量离子m/z：127.1、224.0、284.1中的一种或多种，离子选择能量：0.5-5v，碰撞诱导解离能量：1-4v。

22、同时，本技术利用上述检测试剂盒和检测方法时，在单同位素内标定量方法时，同位素内标浓度已知，基于待测物和同位素标记的待测物性质相同，包括离子化效率、碎裂效率、基质效应等，进而利用待测物和同位素内标碎片峰面积比值进行定量，无需建立校准曲线；在多同位素内标定量方法时，使用两种或多种同位素内标，同位素内标浓度覆盖整个线性范围，分析检测时利用两种或多种同位素建立两点或多点校准曲线，依据线性方程计算待测物浓度，实现校准曲线的建立和待测物的定量分析同步完成，极大程度上减少系统偏差，无需定期对校准曲线进行校准。

23、综上所述，本技术的技术方案具有以下效果：

24、本技术提供的检测试剂盒基于原位电离质谱法，原位电离试剂盒搭配便携式质谱分析系统在保证了准确度和灵敏度的同时，一方面可以避免代谢物与药物结构相似带来的假阳性问题。同时其操作简单，随时可测，5分钟内就可以出具相应的结果，有利于临床快速制定个体化给药方案以及代谢动力学研究。

25、本技术开发的检测试剂盒和检测流程方法无需复杂的前处理以及专业的质谱背景知识，实现即时分析，并且具有良好准确度和精密度。