一种高效检测注射用醋酸西曲瑞克有关物质的分析方法与流程

本发明属于医药，具体涉及药品原料和制剂杂质分离技术，尤其涉及一种高效检测注射用醋酸西曲瑞克有关物质的分析方法。

背景技术：

1、醋酸西曲瑞克(cetrorelix)是德国asta medica公司研制的一种促性腺激素释放激素(gnrh)拮抗剂，通过与内源性gnrh竞争结合垂体细胞上的膜受体，控制促黄体激素(lh)和促卵泡激素(fsh)的释放，从而控制卵巢的刺激作用，预防不成熟卵泡过早排出，帮助受孕。醋酸西曲瑞克用药后即产生抑制作用，持续治疗可维持此抑制作用。研究表明，醋酸西曲瑞克对卵巢癌、前列腺癌、子宫肌瘤、子宫内膜异位等疾病有较好疗效，且对良性前列腺肥大和卵巢过度刺激综合症有预防和改善作用。对于进行卵巢刺激的妇女，醋酸西曲瑞克的作用时间呈剂量依赖性。治疗结束后，其拮抗激素作用可完全逆转，安全性更高。因此，醋酸西曲瑞克在临床上具有很强的不可替代性，具有很高的开发价值。注射用醋酸西曲瑞克目前已被批准在国内上市(进口注册标准号jx20130315)，但未被收录到中国药典2020版、usp43、ep10以及jp18中。由于合成方法的原因，醋酸西曲瑞克原料药中会夹杂多种杂质，根据在注射用醋酸西曲瑞克有关物质测定中，存在许多结构相似的肽杂质，对药品生产质量有至关重要的影响，因此有必要对其进行含量控制。

2、现有技术公开的技术方案如下：

3、cn114624366a公开了一种醋酸西曲瑞克聚合物杂质的检测方法，该方法采用乙腈-水-三氟乙酸体系按一定比例等度洗脱醋酸西曲瑞克中的聚合物，尽管所述方法流动相组分简单，基线平稳，方法专属性好，灵敏度高，耐用性良好，但是其主要是针对醋酸西曲瑞克中大分子量聚合物杂质开发的分析方法。

4、cn107664666a公开了一种醋酸西曲瑞克及其制剂的有关物质测定方法，该方法采用硫酸盐缓冲液-乙腈按一定梯度洗脱醋酸西曲瑞克有关物质中的杂质，该专利技术方案对比了磷酸盐与硫酸盐缓冲体系对杂质洗脱的影响，确定选择硫酸盐缓冲体系对醋酸西曲瑞克杂质的分离效果明显。该发明虽实现了特定杂质的分离，但是其色谱图结果显示其在主峰前的杂质分离度仍不是特别满意，部分杂质灵敏度仍不高。

5、因此，如何开发一种简单可行，灵敏度高，且能同时将醋酸西曲瑞克及其体系中存在的几种主要杂质依次洗脱、分离，并定量分析的方法具有现实意义。

技术实现思路

1、本发明的目的在于针对现有技术的不足，提供一种测定注射用醋酸西曲瑞克有关物质的hplc分析方法。该方法具有专属性好，分析速度快，检测灵敏度高等优势。

2、为达到上述目的，本发明采取以下技术方案：

3、本发明提供了一种高效检测注射用醋酸西曲瑞克有关物质的分析方法，所述方法步骤如下：

4、1)供试品溶液配制：以醋酸溶液溶解醋酸西曲瑞克，得供试品溶液；

5、2)自身对照溶液配制：取步骤1)溶液，用醋酸溶液稀释，得自身对照溶液；

6、3)检测：以十八烷基硅烷键合硅胶填料色谱柱为固定相，以离子对试剂缓冲液为流动相a，以乙腈溶液为流动相b，采用高效液相色谱法检测所述供试品溶液中醋酸西曲瑞克有关物质的含量。其中，所述离子对试剂的配制方法为：将离子对试剂溶于水中，用磷酸调ph至所需ph值；

7、所述有关物质杂质为以下杂质：

8、 名称 杂质 杂质结构 1 <![cdata[d-orn⁶]]> <![cdata[ac-d-2-nal-d-cpa-d-pal-ser-tyr-d-orn-leu-arg-pro-d-ala-nh₂]]> 2 <![cdata[d-pro⁹]]> <![cdata[ac-d-2-nal-d-cpa-d-pal-ser-tyr-d-cit-leu-arg-d-pro-d-ala-nh₂]]> 3 <![cdata[d-arg⁸]]> <![cdata[ac-d-2-nal-d-cpa-d-pal-ser-tyr-d-cit-leu-d-arg-pro-d-ala-nh₂]]> 4 <![cdata[d-ser⁴]]> <![cdata[ac-d-2-nal-d-cpa-d-pal-d-ser-tyr-d-cit-leu-arg-pro-d-ala-nh₂]]> 5 脱酰胺 ac-d-2-nal-d-cpa-d-pal-ser-tyr-d-cit-leu-arg-pro-d-ala-oh 6 <![cdata[[ser⁴(ac)]]]> <![cdata[ac-d-2-nal-d-cpa-d-pal-ser(ac)-tyr-d-cit-leu-arg-pro-d-ala-nh₂]]>

9、。

10、进一步地，所述供试品溶液浓度为0.25mg/ml、所述自身对照溶液浓度为2.5μg/ml。

11、进一步地，所述色谱柱为十八烷基硅烷键合硅胶填料色谱柱规格为250mm×4.6mm，3μm。

12、进一步地，所述离子对试剂缓冲液选自戊烷磺酸钠、己烷磺酸钠、庚烷磺酸钠、辛烷磺酸钠、壬烷磺酸钠和葵烷磺酸钠缓冲液中的一种或多种；优选庚烷磺酸钠缓冲液；

13、进一步地，所述离子对试剂缓冲液浓度为1mmol/l-10mmol/l，例如可以是1mmol/l、5mmol/l、7mmol/l、9mmol/l、10mmol/l，优选5mmol/l。

14、进一步地，所述庚烷磺酸钠缓冲液浓度为1mmol/l-10mmol/l，例如可以是1mmol/l、5mmol/l、7mmol/l、9mmol/l、10mmol/l，优选5mmol/l。

15、进一步地，所述离子对试剂缓冲液采用无机酸调节ph值至1.5-3，例如可以是1.5、2、2.5、3，优选1.5-2.5，更优选2。

16、进一步地，所述庚烷磺酸盐缓冲液采用无机酸调节ph值至1.5-3，例如可以是1.5、2、2.5、3，优选1.5-2.5，更优选2。

17、进一步地，所述无机酸选自磷酸、三氟乙酸和高氯酸中的一种或多种，优选磷酸。

18、进一步地，所述色谱柱柱温设置为30℃-60℃，例如可以是30℃、33℃、35℃、37℃、40℃、42℃、45℃、47℃、50℃、55℃、60℃，优选40℃-50℃，更优选45℃。

19、进一步地，所述流动相流速为0.8-1.2ml/min，例如可以是0.8ml/min、1.0ml/min、1.1ml/min、1.2ml/min，优选1.0ml/min。

20、进一步地，所述分析方法中检测波长为205-254nm，例如可以是210nm、220nm、226nm、235nm、245nm、254nm，优选226nm。

21、进一步地，所述流动相b乙腈溶液为乙腈水溶液，其中乙腈体积分数为80-100％(v/v)，例如80％、85％、90％、100％，优选90％。

22、本发明所述分析方法，采用自身对照法进行定量分析，计算有关物质的含量。

23、作为本发明优选的技术方案，本发明提供了一种高效检测注射用醋酸西曲瑞克有关物质的分析方法，所述方法步骤如下：

24、4)供试品溶液配制：以30％醋酸溶液(v/v)溶解注射用醋酸西曲瑞克，得注射用醋酸西曲瑞克供试品溶液，所述供试品溶液浓度为0.25mg/ml；

25、5)自身对照溶液配制：取步骤1)溶液，用30％醋酸溶液(v/v)稀释，得醋酸西曲瑞克自身对照溶液，所述自身对照溶液浓度为2.5μg/ml；

26、6)检测：以十八烷基硅烷键合硅胶填料色谱柱为固定相，以1mmol/l-10mmol/l庚烷磺酸钠缓冲液为流动相a，采用无机酸调节庚烷磺酸钠溶液ph为1.5-3.0，以80％-100％乙腈水溶液为流动相b，采用高效液相色谱法检测所述供试品溶液中醋酸西曲瑞克有关物质的含量。

27、所述色谱条件设置：

28、色谱柱：十八烷基硅烷键合硅胶填料色谱柱柱，规格250mm×4.6mm，3μm

29、柱温：30-60℃

30、流速：0.8-1.2ml/min

31、检测波长：205-254nm

32、进样体积：20μl

33、梯度洗脱条件如下：

34、

35、在本发明一些实施例中，本发明提供了一种高效检测注射用醋酸西曲瑞克有关物质的分析方法，所述方法步骤如下：

36、4)供试品溶液配制：以30％醋酸溶液(v/v)溶解注射用醋酸西曲瑞克，得注射用醋酸西曲瑞克供试品溶液，所述供试品溶液浓度为0.25mg/ml；

37、5)自身对照溶液配制：取步骤1)溶液，用30％醋酸溶液(v/v)稀释，得醋酸西曲瑞克自身对照溶液，所述自身对照溶液浓度为2.5μg/ml；

38、6)检测：以十八烷基硅烷键合硅胶填料色谱柱为固定相，以5mmol/l庚烷磺酸钠缓冲液为流动相a(庚烷磺酸钠3.0g，加水2000ml溶解后，加入磷酸调节ph为2)，以90％乙腈水溶液为流动相b，采用高效液相色谱法检测所述供试品溶液中醋酸西曲瑞克有关物质的含量。

39、所述色谱条件设置：

40、色谱柱：十八烷基硅烷键合硅胶填料色谱柱，规格250mm×4.6mm，3μm

41、柱温：45℃

42、流速：1.0ml/min

43、检测波长：226nm

44、进样体积：20μl

45、梯度洗脱条件如下：

46、

47、与现有技术相比，本发明具有以下有益效果：

48、本发明方法能使得西曲瑞克有关物质很好的达到基线分离，因此能够准确测定西曲瑞克有关物质的含量。该方法简单、快速、准确、高效，重现性好，为注射用醋酸西曲瑞克质量标准的制定建立了良好的基础。