一种鱼腥草中马兜铃酸类成分的分离和定量检测方法及应用

本发明属于色谱分析领域，具体涉及一种鱼腥草中马兜铃酸类成分的分离和定量检测方法及应用。

背景技术：

1、鱼腥草是一种传统的“药食两用”物质。除普通食用用途外，鱼腥草有着清热解毒，消痈排脓，利尿通淋，肺痈吐脓，痰热喘咳，热痢，痈肿疮毒的功效，同时还有显著的杀菌和抗病毒的作用。

2、随着对鱼腥草化学组分解析的深入研究，其含有的马兜铃酸类物质的安全性引起了广泛的关注。鱼腥草中含有的马兜铃酸类物质，主要为马兜铃内酰胺类化合物，包括马兜铃内酰胺bii、马兜铃内酰胺aii与马兜铃内酰胺fi等。马兜铃酸类物质，是一类硝基菲羧酸化合物及其衍生物。马兜铃酸i具有肾毒性和致癌性。马兜铃酸ⅰ和ⅱ是主要的毒性成分。研究认为，马兜铃酸的致毒作用机制是马兜铃酸在体内经过肝脏的代谢，形成马兜铃内酰胺。马兜铃内酰胺能够与dna形成加合物，引发基因突变，进而损伤肾脏。如果短期摄入过多或长期小剂量摄入，马兜铃酸就会在肾脏中蓄积，导致肾脏功能障碍。症状包括蛋白尿、血尿、尿量减少等，长期积累甚至会引起肾功能衰竭或引发上尿路上皮癌。

3、由于鱼腥草中含有的马兜铃酸类物质的安全性仍缺乏深入和系统的研究，而且其食用和药用范围较广，因此建立鱼腥草中马兜铃酸类物质快速、简便、灵敏的分析技术对鱼腥草安全评估及质量监控有重要意义。

4、目前，在2020年版《中国药典》中尚未规定鱼腥草中的马兜铃酸类物质的测定方法，现有技术中关于马兜铃酸类物质的测定方法主要有薄层色谱法、紫外分光光度法、毛细管电泳法和液相色谱紫外检测法，液相色谱质谱法，但关于鱼腥草中的马兜铃酸类物质的测定的报道很少。

5、公开号为cn113063862a的中国专利申请公开了一种简单快捷的同时检测鱼腥草中4种马兜铃酸类物质（马兜铃酸i、马兜铃酸ii、马兜铃内酰胺i和马兜铃内酰胺aii）的超高效液相色谱-质谱分析方法，超高效液相色谱包括a相为水（含0.1%甲酸），b相为乙腈（含0.1 %甲酸）；质谱条件包括使用一级和二级质谱；该方法仅能同时检测4种马兜铃酸类物质，无法对鱼腥草中主要马兜铃酸类物质马兜铃内酰胺bii和马兜铃内酰胺fi进行定量检测，且无法对马兜铃酸类物质中的同分异构体进行有效分离。

6、授权公告号为cn113252810b的中国专利申请公开了一种细辛中6种马兜铃酸类成分的含量测定方法，同时测定细辛中马兜铃酸a、马兜铃酸b、马兜铃酸c、马兜铃酸d、马兜铃酸ⅲ及马兜铃酸ⅶa六种成分含量的测定方法。该方法无法对鱼腥草中主要马兜铃酸类成分进行定量分析，且不能分离马兜铃酸类物质中的同分异构体。

技术实现思路

1、为了解决上述问题，本发明开发了一种鱼腥草中马兜铃酸类成分的分离和定量检测方法及应用。该方法能够实现10种马兜铃酸类成分的分离和定量检测，且将马兜铃酸iva与7-羟基马兜铃酸i、马兜铃内酰胺aii与马兜铃内酰胺fi两对同分异构体分离。

2、一方面，本发明提供了一种马兜铃酸类成分含量的检测方法。

3、具体地，所述的检测方法包括使用超高效液相色谱串联质谱法；所述的超高效液相色谱条件包括：

4、色谱柱包括csh色谱柱；

5、流动相a中包含4.0-6.0mm醋酸铵和质量分数0.05%-0.15%甲酸，溶剂为水；

6、流动相b为甲醇。

7、优选地，所述的色谱柱包括csh氟苯基色谱柱；所述的流动相a中包含5.0 mm醋酸铵和质量分数0.1%甲酸，溶剂为水。

8、进一步优选地，所述的csh氟苯基色谱柱规格为1.7μm，2.1mm×100mm。

9、具体地，所述的超高效液相色谱条件还包括梯度洗脱程序：

10、 起始时间/min 流动相a/% 流动相b/% 0 60-80 20-40 1.5 60-80 20-40 2.0 30-50 50-70 10.0 2-7 93-98 13.0 2-7 93-98 13.1 60-80 20-40 15.0 60-80 20-40

11、优选地，所述的梯度洗脱程序：

12、 起始时间/min 流动相a/% 流动相b/% 0 70 30 1.5 70 30 2.0 40 60 10.0 5 95 13.0 5 95 13.1 70 30 15.0 70 30

13、具体地，所述质谱的条件包括使用三重四级杆质谱仪。

14、优选地，所述的三重四级杆质谱仪采用xevo tq-s。

15、具体地，所述质谱的条件还包括定量检测扫描方式为多反应监测扫描；采用正离子模式采集。

16、具体地，所述质谱的条件还包括：锥孔温度150±10℃，脱溶剂气温度500±10℃，脱溶剂气流速800±200l/h。

17、另一方面，本发明提供了上述检测方法在马兜铃酸类成分评价中的应用。

18、具体地，用于评价产品中马兜铃酸类成分的种类和/或含量；所述产品的成分中包含鱼腥草。

19、所述的产品类型包括但不限于食品、药品、保健品。

20、具体地，所述的马兜铃酸类成分包括马兜铃酸i，马兜铃酸ii，马兜铃酸iiia，马兜铃酸iva，马兜铃内酰胺i，马兜铃内酰胺fi，马兜铃内酰胺aii，马兜铃内酰胺bii，7-羟基马兜铃酸i和马兜铃酮中的一种或多种。

21、所述的马兜铃酸i为：

22、；

23、所述的马兜铃酸ii为：

24、；

25、所述的马兜铃酸iiia为：

26、；

27、所述的马兜铃酸iva为：

28、；

29、所述的马兜铃内酰胺i为：

30、；

31、所述的马兜铃内酰胺fi为：

32、；

33、所述的马兜铃内酰胺aii为：

34、；

35、所述的马兜铃内酰胺bii为：

36、；

37、所述的7-羟基马兜铃酸i为：

38、；

39、所述的马兜铃酮为：

40、。

41、再一方面，本发明提供了一种鱼腥草的质量评价方法。

42、具体地，所述的质量评价方法包括上述的检测方法。

43、具体地，所述的质量评价方法包括以下步骤：

44、s1、供试品溶液和标准品溶液配制；

45、s2、将s1配制的供试品溶液和标准品溶液使用上述检测方法检测，得到计算供试品中马兜铃酸类物质的含量。

46、具体地，所述的供试品溶液制备步骤包括：将供试品粉碎、过筛后，使用甲醇溶液超声提取，离心后取上清液。

47、具体地，所述的上清液使用氮气吹干，用甲醇复溶。

48、本发明的有益效果：

49、本发明提供了一种鱼腥草中马兜铃酸类成分的分离和定量检测方法及应用。所述的检测方法包括使用超高效液相色谱串联质谱法；所述的超高效液相色谱条件包括：色谱柱包括csh色谱柱；流动相a中包含4.0-6.0mm醋酸铵和质量分数0.05%-0.15%甲酸，溶剂为水；流动相b为甲醇。该方法能够实现10种马兜铃酸类成分的分离和定量检测，且将马兜铃酸iva与7-羟基马兜铃酸i、马兜铃内酰胺aii与马兜铃内酰胺fi两对同分异构体分离。