一种同时测定5-(2-氟苯基)-1H-吡咯-3-甲醛中有关物质的HPLC检测方法与流程

本发明属于药物分析，具体涉及一种同时测定5-(2-氟苯基)-1h-吡咯-3-甲醛中有关物质的hplc检测方法。

背景技术：

1、富马酸伏诺拉生，是一种钾离子竞争性酸阻滞剂（p-cab），适用于胃溃疡、十二指肠溃疡、反流性食道炎，可预防服用低剂量阿司匹林期间胃溃疡或十二指肠溃疡的复发以及预防服用非甾体类抗炎药期间胃溃疡或十二指肠溃疡的复发。可辅助胃溃疡、十二指肠溃疡、胃粘膜相关淋巴组织（malt）淋巴癌、原发免疫性血小板减少症、早期胃癌内窥镜切除术后、幽门螺杆菌感染性胃炎等疾病根除幽门螺旋杆菌。

2、富马酸伏诺拉生，cas号：881681-01-2，化学名为1-[5-(2-氟苯基)-1-(吡啶-3-磺酰基)-1h-吡咯-3-基]-n-甲基甲胺单富马酸盐，结构式如下：

3、

4、富马酸伏诺拉生

5、富马酸伏诺拉生起始物料5-(2-氟苯基)-1h-吡咯-3-甲醛（以下可称为化合物（ⅳ）），cas号：881674-56-2，是合成富马酸伏诺拉生的重要起始物料，结构式如下：

6、

7、化合物（iv）

8、依据5-(2-氟苯基)-1h-吡咯-3-甲醛的化学结构及制备工艺，其可能存在多种杂质，其中，2个氟位置异构体及脱氟杂质，在合成工艺过程中均会直接参与反应，产生富马酸伏诺拉生对应的氟位置异构体及脱氟杂质。由于其结构与伏诺拉生相似，性质相近，故在合成工艺过程中很难去除，从而可能影响终产品富马酸伏诺拉生的质量。因此，建立一种稳定有效的测定5-(2-氟苯基)-1h-吡咯-3-甲醛异构体及其他杂质的hplc检测方法，完善对该起始物料的质量控制，是非常必要的。目前尚未检索到5-(2-氟苯基)-1h-吡咯-3-甲醛有关杂质的检测方法。

技术实现思路

1、本发明解决了现有技术中存在的难题，提供了一种同时测定富马酸伏诺拉生起始物料5-(2-氟苯基)-1h-吡咯-3-甲醛中有关物质的hplc检测方法，操作简便，专属性、线性、精密度均良好，且溶液稳定、灵敏度高、方法耐用性好，可用于富马酸伏诺拉生起始物料5-(2-氟苯基)-1h-吡咯-3-甲醛的质量控制，满足现有需要。

2、本发明提供了一种同时测定5-(2-氟苯基)-1h-吡咯-3-甲醛中有关物质的hplc检测方法，包括以下步骤：分别取分离度溶液、供试品溶液进样，按高效液相色谱条件进行检测，记录色谱图；

3、所述色谱条件为：色谱柱：五氟苯基键合硅胶为填充剂的色谱柱；流动相a为缓冲溶液，流动相b为有机溶剂；按下表进行梯度洗脱：

4、；

5、进一步的，梯度洗脱条件为：

6、；

7、更优选的，梯度洗脱条件为：

8、。

9、其中，所述有关物质包括异构体1、脱氟杂质，其结构如下所示：

10、；

11、所述有关物质还可进一步包括异构体2、脱氟杂质、杂质1、杂质2，其结构如下所示：

12、。

13、所述色谱条件还包括：

14、检测器：紫外检测器；

15、流速：1.0ml/min；

16、柱温：20~30℃，优选25℃；

17、检测波长：242nm或270nm；

18、进样量：20μl；

19、运行时间：55分钟。

20、所述的色谱柱优选welch ultimate pfp，4.6mm×250mm，5μm。

21、所述的流动相a，缓冲溶液为磷酸二氢钾溶液、磷酸二氢钠溶液、磷酸氢二钾溶液、磷酸氢二钠溶液、甲酸铵溶液、醋酸铵溶液或磷酸溶液，其中，所述磷酸二氢钾溶液用酸性试剂调节ph值至2.5～3.5，优选3.0，其浓度为10~50 mmol/l，优选10 mmol/l，所述酸性试剂为选自冰醋酸、磷酸、甲酸中的一种或多种，优选磷酸；所述磷酸溶液浓度为0.1%~0.3%（ml/ml），优选0.1%（ml/ml）。

22、所述的流动相b，有机溶剂选自乙腈或甲醇-乙腈混合溶液，优选甲醇-乙腈混合溶液，其比例为1：1~6，优选1：1。

23、所述分离度溶液通过以下过程配制：取脱氟杂质对照品、异构体1对照品、异构体2对照品、杂质1对照品、杂质2对照品各适量，加溶剂使溶解并稀释，摇匀，作为各杂质贮备液。称取化合物（ⅳ）适量，加溶剂使溶解，再加各杂质贮备液适量，用溶剂稀释摇匀即得。

24、所述供试品溶液通过以下过程配制：取化合物（ⅳ）适量，加溶剂溶解并稀释摇匀即得。

25、其中所述溶剂为流动相a：流动相b=60~70∶30~40。

26、本发明进一步提供了一种同时测定5-(2-氟苯基)-1h-吡咯-3-甲醛中有关物质的hplc检测方法，包括以下步骤：分别取分离度溶液、供试品溶液进样，按高效液相色谱条件进行检测，记录色谱图；

27、所述色谱条件为：色谱柱：welch ultimate pfp，4.6mm×250mm，5μm；流动相a为磷酸二氢钾溶液或磷酸溶液；流动相b为乙腈或甲醇-乙腈混合溶液；按下表进行梯度洗脱：

28、；

29、进一步的，梯度洗脱条件为：

30、。

31、其中，所述有关物质包括异构体1、脱氟杂质，其结构如下所示：

32、；

33、所述有关物质还可进一步包括异构体2、脱氟杂质、杂质1、杂质2，其结构如下所示：

34、。

35、所述色谱条件还包括：

36、检测器：紫外检测器；

37、流速：1.0ml/min；

38、柱温：25℃；

39、检测波长：242nm或270nm；

40、进样量：20μl；

41、运行时间：55分钟。

42、所述的色谱柱优选welch ultimate pfp，4.6mm×250mm，5μm。

43、所述的流动相a中，所述磷酸二氢钾溶液用磷酸调节ph值至3.0，其浓度为10mmol/l；所述磷酸溶液浓度为0.1%（ml/ml）。

44、所述的流动相b为甲醇-乙腈混合溶液，其比例为1∶1~6，优选1：1。

45、所述分离度溶液通过以下过程配制：取脱氟杂质对照品、异构体1对照品、异构体2对照品、杂质1对照品、杂质2对照品各约2mg，置10ml量瓶中，加乙腈和溶剂适量使溶解，用溶剂稀释至刻度，摇匀，作为各杂质贮备液。称取化合物（ⅳ）约2mg，置10ml量瓶中，加溶剂适量使溶解，再加各杂质贮备液0.1ml，用溶剂稀释至刻度，摇匀，即得。

46、所述供试品溶液通过以下过程配制：取5-(2-氟苯基)-1h-吡咯-3-甲醛（化合物（ⅳ））约5mg，置25ml量瓶中，加溶剂溶解并稀释至刻度，摇匀，作为供试品溶液。

47、其中所述溶剂为流动相a：流动相b=60~70∶30~40。

48、本发明进一步提供了同时测定5-(2-氟苯基)-1h-吡咯-3-甲醛中有关物质的hplc检测方法在富马酸伏诺拉生质量控制中的用途。

49、本发明的有益技术效果为：

50、（1）本发明提出一种5-(2-氟苯基)-1h-吡咯-3-甲醛中的有关物质分析方法，采用高效液相色谱法，可实现5-(2-氟苯基)-1h-吡咯-3-甲醛与其氟位置异构体及脱氟杂质的有效分离，同时可实现对其他杂质的控制。

51、（2）本发明操作简便，专属性、线性、精密度均良好，且溶液稳定、灵敏度高、方法耐用性好，可用于富马酸伏诺拉生起始物料5-(2-氟苯基)-1h-吡咯-3-甲醛的质量控制。