一种猴头菇食品指纹图谱的构建方法及质量检测方法与流程

本发明属于食品检测，具体涉及一种猴头菇食品指纹图谱的构建方法及质量检测方法。

背景技术：

1、猴头菇(学名：hericium erinaceus(bull.)pers.)是齿菌科、猴头菇属真菌。子实体中等、较大或大型，肉质，外形呈头状或倒卵状，似猴子的头，故名“猴头”。基部着生处狭窄，人工栽培猴头菇基部常因长于瓶口或塑料袋口内而呈柄状。除基部外，周体外被覆菌刺。菌刺长1-5厘米，针形，粗1-2毫米。是一种珍贵的药食两用菌。猴头菇的有效成分主要有多糖、多酚、猴头菌素、核苷类、甾醇类、三萜类等。其对多种消化系统疾病如慢性胃炎、消化不良和胃溃疡都具有较好的疗效，同时猴头菇还具有抗肿瘤、免疫调节、抗衰老、降血糖和保护神经等活性。目前已广泛应用于药品、保健食品及食品等领域。然而，一方面，通过上述现有的标准或相关研究，并没有具体的含猴头菇食品的质量控制方法，更不能从整体上检测和控制其质量；另一方面，只通过单一成分的含量测定联合其他成分的鉴别含猴头菇食品，费时、费力，难以广泛地应用于生产实践。

2、现有技术中，对猴头菇的质量控制都是针对猴头菇药材，并非是针对含猴头菇食品，当用于猴头菇食品时存在共有信息少、特征性不足的缺陷，不能适用于含猴头菇食品。

3、含猴头菇食品常见的类型有饼干、米糊等，例如猴头菇饼干是由猴头菇经过与其他材料混合，干燥，高温烤制等步骤得到。然而由于猴头菇饼干已经不具备猴头菇性状鉴别的特征，现有鉴别猴头菇的方法不适于猴头菇饼干等含猴头菇食品，特征峰少，分离效果差。

技术实现思路

1、因此，本发明的目的在于提供一种猴头菇食品指纹图谱的构建方法及质量检测方法，该方法根据猴头菇食品的特点，建立该品种的指纹图谱，实现多个特征峰的有效分离、节约检测时间、提高特征性，为全面、快速建立猴头菇食品的质量控制标准提供科学依据。

2、为此，本发明提供了一种猴头菇食品指纹图谱的构建方法，包括极性成分的指纹图谱的构建方法和/或非极性成分的指纹图谱的构建方法；

3、所述极性成分的指纹图谱的构建方法，包括如下步骤：

4、(1)供试品溶液的制备：采用水或者醇水溶液为提取溶剂提取后制得；

5、(2)取供试品溶液采用高效液相色谱法检测，得到供试品的指纹图谱，色谱条件包括：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，以甲醇和含磷酸的水溶液为流动相，进行梯度洗脱，梯度洗脱程序包括：0→15min，流动相中甲醇的体积百分数为：6％→18％；

6、所述非极性成分的指纹图谱的构建方法，包括如下步骤：

7、(1)供试品溶液的制备：采用醇溶剂为提取溶剂提取后制得；

8、(2)取供试品溶液采用高效液相色谱法检测，得到供试品的指纹图谱，色谱条件包括：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，以甲醇和含磷酸的水溶液为流动相，进行梯度洗脱，梯度洗脱程序包括：0→8min→20min，流动相中甲醇的体积百分数为：90％→100％→100％。

9、进一步地，在所述极性成分的指纹图谱的构建方法的步骤(2)中，检测波长为245-270nm；和/或，柱温为25-35℃；和/或，流速为0.8-1.2ml/min；和/或，梯度洗脱程序还包括：15→20min，流动相中甲醇的体积百分数为：18％→32％；和/或，含磷酸的水溶液中磷酸的体积百分数为0.02％-0.2％；和/或，进样量为5μl-20μl；

10、在所述非极性成分的指纹图谱的构建方法的步骤(2)中，检测波长为265-285nm；和/或，柱温为25-35℃；和/或，流速为0.8-1.2ml/min；和/或，含磷酸的水溶液中磷酸的体积百分数为0.02％-0.2％；和/或，进样量为5μl-20μl。

11、进一步地，在所述极性成分的指纹图谱的构建方法中，步骤(1)包括如下步骤：

12、1)取供试品加入石油醚脱脂，弃去石油醚，收集药渣；

13、2)将药渣加入所述提取溶剂进行提取，固液分离，取液体，即得供试品溶液；优选的，步骤(1)满足如下a-d中的任意一项或者多项：

14、a、步骤1)中，供试品加入5～20倍量石油醚脱脂；步骤2)中，药渣中加入占供试品质量6～15倍量的提取溶剂进行提取；

15、b、所述提取溶剂为体积百分数小于等于50％的甲醇水溶液或者水；

16、c、步骤2)中，提取方式为超声提取或者回流提取，提取时间为0.5-1h；

17、d、步骤2)中，所述固液分离为离心或者过滤。

18、步骤2)中，固液分离之后取液体进行浓缩后加水定容，其中，供试品的质量与加入甲醇的体积比为20-40：10-25，质量与体积的配比关系为g/ml。

19、进一步地，在所述非极性成分的指纹图谱的构建方法中，步骤(1)包括如下步骤：

20、1)取供试品加入石油醚脱脂，弃去石油醚，收集药渣；

21、2)将药渣加入所述提取溶剂进行提取，固液分离，取液体；即得供试品溶液；优选的，步骤(1)满足如下a-d中的任意一项或者多项：

22、a、步骤1)中，供试品加入5～20倍量石油醚脱脂；步骤2)中，药渣中加入占供试品质量6～15倍的提取溶剂进行提取；

23、b、步骤2)中，提取方式为超声提取或者回流提取，提取时间为0.5-1h；

24、c、步骤2)中，所述固液分离为离心或者过滤；

25、d、所述提取溶剂为甲醇。

26、步骤2)中，固液分离之后取液体进行干燥后加甲醇定容，其中，供试品的质量与加入甲醇的体积比为20-40：10-25，质量与体积的配比关系为g/ml。

27、在某些优选的实施方式中，在所述极性成分的指纹图谱的构建方法中，供试品溶液的制备方法为：取供试品10.0～30.0g，加供试品5～20倍量的石油醚超声或回流提取脱脂，弃去石油醚，药渣中加入占供试品质量6～15倍量的水或体积百分数小于等于50％的甲醇水溶液，超声提取或回流提取0.5h～1.0h，过滤，滤液转移至25ml～50ml量瓶中，加入水或体积百分数小于等于50％的甲醇水溶液定容，即得。

28、在某些优选的实施方式中，在所述非极性成分的指纹图谱的构建方法中，供试品溶液的制备方法为：取供试品20g～40g，加供试品5～10倍量的石油醚，超声提取，弃石油醚，残渣中加入占供试品质量6～15倍量的甲醇，超声或回流提取0.5h～1h，离心，上清液置水浴上挥至近干，转移至10ml～25ml容量瓶中，加甲醇定容，即得。

29、进一步地，所述极性成分的指纹图谱的构建方法还包括采用腺苷为对照品加溶剂制备对照品溶液的步骤，以及按照上述任一所述的极性成分的指纹图谱的构建方法中的高效液相色谱法检测对照品溶液得到对照品参照图谱的步骤；所述非极性成分的指纹图谱的构建方法还包括采用麦角甾醇为对照品加溶剂制备对照品溶液的步骤，以及按照上述任一所述的非极性成分的指纹图谱的构建方法中的高效液相色谱法检测对照品溶液得到对照品参照图谱的步骤。

30、在某些优选的实施方式中，腺苷对照品溶液或者麦角甾醇对照品溶液的溶剂为水。

31、在某些优选的实施方式中，腺苷对照品溶液或者麦角甾醇对照品溶液的浓度为0.05mg/ml～0.3mg/ml。

32、进一步地，还包括通过外标法计算供试品溶液中腺苷含量和/或麦角甾醇含量的步骤。

33、进一步地，所述极性成分的指纹图谱的构建方法还包括采用猴头菇对照药材按照上述任一所述的极性成分的指纹图谱的构建方法中的供试品溶液的制备方法制得对照药材参照物溶液，以及按照上述任一所述的极性成分的指纹图谱的构建方法中的高效液相色谱法检测对照药材参照物溶液得到对照药材参照图谱的步骤；或者，所述非极性成分的指纹图谱的构建方法还包括采用猴头菇对照药材按照上述任一所述的非极性成分的指纹图谱的构建方法中的供试品溶液的制备方法制得对照药材参照物溶液，以及按照上述任一所述的非极性成分的指纹图谱的构建方法中的高效液相色谱法检测对照药材参照物溶液得到对照药材参照图谱的步骤。

34、进一步地，所述猴头菇食品极性成分的指纹图谱具有6个共有特征峰，峰4与腺苷对照品参照物峰的保留时间相对应，腺苷对照品参照物峰的保留时间相对应的峰为s1峰，峰1-峰6与s1的相对保留时间在规定值的±10％范围之内，峰1-峰6与s2峰的规定值依次为0.555、0.702、0.807、1.000、1.127、1.324。

35、进一步地，所述猴头菇食品非极性成分的指纹图谱具有6个共有特征峰，峰6与麦角甾醇对照品参照物峰的保留时间相对应，麦角甾醇对照品参照物峰的保留时间相对应的峰为s2峰，峰1-峰6与s2的相对保留时间在规定值的±10％范围之内，峰1-峰6与s2峰的规定值依次为0.293、0.341、0.664、0.809、0.914、1.000。

36、进一步地，所述猴头菇食品包括猴头菇饼干、猴头菇米糊、猴头菇饮料、猴头菇固体饮料中的一种或者多种。

37、本发明还提供了一种猴头菇食品的质量检测方法，包括将待测产品按照上述任一所述的构建方法构建得到指纹图谱的步骤；优选的，还包括测定猴头菇食品中腺苷含量和/或麦角甾醇含量的含量的步骤。

38、本发明技术方案，具有如下优点：

39、1.本发明提供的猴头菇食品指纹图谱的构建方法，包括极性成分的指纹图谱的构建方法和/或非极性成分的指纹图谱的构建方法，分别采用特定的提取溶剂提取后得到的供试品溶液采用高效液相色谱法检测，得到供试品的指纹图谱，色谱条件包括：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，以甲醇和含磷酸的水溶液为流动相，分别在2个特定洗脱程序下采集即可获得12个共有特征峰，并实现了这些共有特征峰的很好分离，得到的指纹图谱基线平稳，特征峰峰形好、分析时间短且各特征峰分离效果好，为猴头菇食品的质量检测和控制提供依据，实现对猴头菇食品整体成分表征，重现性稳定。此外，通过流动相梯度的筛选实现了腺苷、麦角甾醇等专属性成分的同时指认，特征性显著。

40、2.本发明提供的猴头菇食品指纹图谱的构建方法，采集猴头菇极性成分与非极性成分，共采集到12个色谱峰，能较完整体现猴头菇有效成分，同时判断其猴头菇有效成分在各食品中真伪与含量。本发明的检测方法精密性、准确性、重现性均良好，且易于操作，能较好地控制产品质量。猴头菇极性成分与非极性成分的制取方法均简单易操作，分析效率高，成本也低。