大苞荆芥药材特征图谱的建立方法及应用与流程

本发明涉及一种大苞荆芥药材特征图谱的建立方法及应用。

背景技术：

1、大苞荆芥为唇形科荆芥属植物大苞荆芥nepeta bracteata benth.的干燥全草，具有镇咳平喘、清热利湿的作用，其在民间用于寒性哮喘、咳嗽感冒、湿性痰多、乃孜来毒液流窜胸肺、胸膜炎、气管炎、肺炎及水肿。神香草为唇形科神香草属硬尖神香草hyssopuscuspidatus boriss.的干燥全草，均称为祖发，由于神香草主要为野生，有时货源短缺，于是市场上出现它的混淆品，主要为大苞荆芥。但两者为同名异物，是同科不同属植物，而且化学成分和药性各不相同，在使用时应倍加注意。为确保临床用药安全、有效，本实验建立了一种大苞荆芥特征图谱检测方法及其特征图谱，可明显区分两者不同，研究结果为大苞荆芥药材与其同名异物神香草药材的鉴定质量评价提供科学依据。

2、本发明目的在于，提供一种大苞荆芥药材特征图谱的建立方法及应用，通过特征图谱中的共有峰，可以对大苞荆芥药材进行质量评价，其中可以将异槲皮苷、迷迭香酸等15个共有特征峰对大苞荆芥药材进行鉴别研究。并且该方法能较好的分离神香草药材，经比对两种药材特征图谱存在较大差异，可以为鉴别大苞荆芥药材及神香草药材提供数据支持。该方法重复性、稳定性好，具有可操作性。为大苞荆芥质量控制提供全面的评价方法，为进一步开发、制定其中药材标准提供参考依据、规范、保障临床用药。

3、本发明所述的一种大苞荆芥药材特征图谱的构建方法，按下列步骤进行：

4、供试品溶液制备：

5、a、取大苞荆芥药材约1g，精密称定，置具塞锥形瓶中，加20ml浓度50％甲醇，密封称重，超声处理：功率300w，频率45khz，时间40min，放冷，再称定重量，用浓度50％甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取滤液，作为供试品溶液；

6、对照品溶液制备：

7、b、取异槲皮苷、迷迭香酸对照品各1mg，加50％甲醇定容至10ml容量瓶中，作为对照品溶液；

8、测定：

9、c、精密吸取供试品溶液和对照品溶液各20μl，注入液相色谱仪中，选择色谱条件：反相色谱柱c18色谱柱250×4.6mm，5μm，加保护柱；有机相以乙腈为流动相a，水相0.1％磷酸水溶液为流动相b，梯度洗脱：0min，a相10％，b相90％；15min，a相10％，b相90％；30min，a相15％，b相85％；40min，a相18％，b相82％；60min，a相23％，b相77％；70min，a相55％，b相45％；85min，a相60％，b相40％；85.01min，a相10％，b相90％；90min，a相10％，b相90％；柱温为30℃；流速为1.0ml/min；检测波长为330nm；进样量20μl；记录其色谱图，并用对照品的指认，确定大苞荆芥药材的特征峰归属：其中峰11为异槲皮苷、峰15为迷迭香酸。

10、所述方法获得的大苞荆芥药材特征图谱在制备利用所得到的图谱鉴别大苞荆芥的真伪及评价优劣中的应用。

11、本发明所述的大苞荆芥药材特征图谱的建立方法，该方法经过试验研究：

12、1.仪器材料与试剂：

13、1.1实验仪器：

14、agilent 1260高效液相色谱仪(1260infinity agilent techeologies)；电子天平te212-l(赛多利斯科学仪器有限公司)；pa225 d型电子天平(赛多利斯科学仪器sartorius，germany)；kq-500vdv型超声清洗仪(昆山市超声仪器有限公司，昆山)；

15、1.2试剂与试药：

16、乙腈为色谱纯，甲醇分析醇，水为哇哈哈纯净水；

17、异槲皮苷(ps001042)对照品来自成都普思生物科技股份有限公司，迷迭香酸(111871-202007)对照品来自中国食品药品检定研究院，大苞荆芥及神香草药材信息见表1；

18、表1药材信息表

19、

20、2方法与结果：

21、2.1大苞荆芥药材特征图谱的建立：

22、2.1.1检测波长选定：

23、用高效液相色谱仪为dad检测器，设定检测波长230nm、254nm、270nm、290nm、300nm、330nm对药材进行测定。结果表明在330nm处吸收较好，基线平稳，峰个数较多、峰形较好；

24、2.1.2供试品溶剂选择：

25、本实验筛选了甲醇、无水乙醇、50％乙醇和50％甲醇为不同溶剂进行实验，结果显示，在甲醇和乙醇中虽然溶解较好，但色谱峰少，50％甲醇与50％乙醇相比较，50％甲醇峰形较尖锐对称，峰个数多，故最终选定50％甲醇作为供试品溶剂；

26、2.1.3流动相条件的选择：

27、2.1.3.1流动相的选择：

28、流动相选用甲醇、乙腈分别与0.2％甲酸溶液、0.1％磷酸溶液、0.2％磷酸溶液配比，进行样品的hplc分析，结果显示乙腈与0.1％磷酸溶液配比出峰峰形更好且分离好，基线平稳，故确定有机相为乙腈，水相为0.1％磷酸溶液；

29、2.1.3.2流动相梯度：

30、为使各色谱峰能达到良好的分离，峰形尖锐，缩短分析时间，故选择梯度进行洗脱，结果见表2，确定流动相梯度4为最终方法；

31、表2流动相梯度条件选择

32、

33、2.2方法学考察：

34、2.2.1精密度：

35、大苞荆芥(s1)称取1份，按上述方法制备供试品溶液，按确定的色谱条件进行测定，连续进样6次，结果显示大苞荆芥药材特征图谱共有峰的相对保留时间rsd值在0.01％～0.16％之间，由结果可知仪器精密度良好；

36、2.2.2重复性：

37、大苞荆芥(s1)称取6份，按确定的色谱条件进行测定，结果显示大苞荆芥药材特征图谱共有峰的相对保留时间rsd值在0.01％-0.09％之间，结果表明大苞荆芥药材特征图谱方法的重复性良好；

38、2.2.3稳定性：

39、同一份大苞荆芥(s1)供试品溶液，分别在0h、3h、6h、9h、15h、24h按确定的色谱条件进行测定，结果显示大苞荆芥药材特征图谱共有峰的峰面积rsd值在0.52％～4.67％之间，因此测定大苞荆芥药材样品在24h内稳定；

40、2.2.4耐用性考察：

41、2.2.4.1柱温的考察：

42、取同一份大苞荆芥(s1)供试品溶液，分别采用不同柱温28℃、30℃、32℃，按确定的色谱条件进行测定，结果显示大苞荆芥药材特征图谱共有峰的相对保留时间rsd值在0.03％-4.26％，确定柱温为30℃；

43、2.2.4.2流速的考察：

44、取同一份大苞荆芥(s1)供试品溶液，分别采用不同流速0.9ml/min、1.0ml/min、1.1ml/min按确定的色谱条件进行测定，结果显示大苞荆芥药材特征图谱共有峰的相对保留时间rsd在0.06％～6.66％，流速改变，影响峰的分离情况，导致差异较大，最终确定流速为1.0ml/min。

技术实现思路