基于液相色谱质谱联用技术检测血清中M蛋白的方法

本发明涉及液相色谱质谱检测的领域，尤其涉及基于液相色谱质谱联用技术检测血清中m蛋白的方法。

背景技术：

1、人体血清中m蛋白的浓度高低与肿瘤等一类疾病息息相关，大多数肿瘤疾病在病发初期无法通过ct等方式进行检测，而对人体血清中m蛋白的浓度变化情况进行检测，能够为肿瘤疾病的早期筛查提供可靠的参考依据。目前蛋白质定量检测技术中比较常用的方式是利用同位素标记的电离质谱分析，上述技术需要准备经过同位素标记和未经过同位素标记的两种样品，在对这两种样品进行串联质谱峰差异定量对比检测，使得在样品准备和质谱检测过程中均需要耗费较多的时间和人力操作，增大m蛋白检测耗时和检测干扰，无法确保m蛋白定量检测的准确性。

技术实现思路

1、本发明的目的在于提供基于液相色谱质谱联用技术检测血清中m蛋白的方法，其从血清样品提取得到蛋白质萃取物，对蛋白质萃取物检测，以此判断蛋白质萃取物是否满足预设杂质含量条件，并对不满足预设杂质含量条件的蛋白质萃取物进行二次萃取处理，以此确保蛋白质萃取物的洁净度，避免对后续质谱分析产生干扰；还对满足预设杂质含量条件的蛋白质萃取物进行液相色谱分离处理，得到蛋白质萃取物在液相色谱分离处理过程中的物质分离状态信息，以此调整液相色谱分离处理的操作参数，提高蛋白质萃取物下属不同物质组分的分离效率和彻底性；再对分离样品进行质谱检测并调整质谱检测的操作参数，确保最终质谱曲线的可信度，以此得到血清样品中m蛋白含量信息，其并不需要耗费较多人力物力准备样品，还能有效降低对蛋白检测的干扰，确保m蛋白定量检测的准确性。

2、本发明是通过以下技术方案实现：

3、基于液相色谱质谱联用技术检测血清中m蛋白的方法，包括：

4、对血清样品进行萃取处理，得到所述血清样品内部的蛋白质萃取物；对所述蛋白质萃取物进行检测，判断所述蛋白质萃取物是否满足预设杂质含量条件，并对不满足预设杂质含量条件的蛋白质萃取物进行二次萃取处理；

5、对满足预设杂质含量条件的蛋白质萃取物进行液相色谱分离处理，并对所述液相色谱分离处理进行视觉检测，得到所述蛋白质萃取物在所述液相色谱分离处理过程中的物质分离状态信息；基于所述物质分离状态信息，调整所述液相色谱分离处理的操作参数，从而获得满足预设物质分离状态条件的分离样品；

6、对所述分离样品进行质谱检测，得到所述分离样品的初始质谱曲线图的生成状态信息；基于所述初始质谱曲线图的生成状态信息，调整所述质谱检测的操作参数，以此得到最终质谱曲线图；对所述最终质谱曲线图进行分析，得到所述血清样品中的m蛋白含量信息。

7、可选地，对血清样品进行萃取处理，得到所述血清样品内部的蛋白质萃取物，包括：

8、对血清样品进行蛋白质沉淀处理和离心处理，将所述血清样本的蛋白质沉淀物，并对所述蛋白质沉淀物进行清洗和干燥处理，得到蛋白质萃取物。

9、可选地，对所述蛋白质萃取物进行检测，判断所述蛋白质萃取物是否满足预设杂质含量条件，并对不满足预设杂质含量条件的蛋白质萃取物进行二次萃取处理，包括：

10、对所述蛋白质萃取物进行显微成像处理，得到蛋白质萃取物显微图像；对所述蛋白质萃取物显微图像进行分析，得到所述蛋白质萃取物的表面杂质分布数据；基于所述表面杂质分布数据，估计得到所述蛋白质萃取物的表面杂质含量占比；

11、将所述表面杂质含量占比与预设含量占比阈值进行对比，若所述表面杂质含量占比大于预设含量占比阈值，则判断所述蛋白质萃取物不满足预设杂质含量条件；否则，判断所述蛋白质萃取物满足预设杂质含量条件；

12、当所述蛋白质萃取物不满足预设杂质含量条件，则对所述蛋白质萃取物再次进行溶解、沉淀、离心、清洗和干燥处理，直到满足预设杂质含量条件为止。

13、可选地，若所有蛋白质萃取物均满足预设杂质含量条件，则筛选其中部分的蛋白质萃取物进行二次萃取处理，其包括：

14、步骤s1，若所有蛋白质萃取物均满足预设杂质含量条件，则利用下面公式(1)，根据所有蛋白质萃取物各自在杂质生成过程中的杂质分布上升线，确定所述杂质分布上升线的斜率，

15、

16、在上述公式(1)中，k表示杂质分布上升线的斜率；n(a)表示所述第a个蛋白质萃取物中的杂质含量；nmax表示所有蛋白质萃取物中的杂质含量最大值；nmin表示所有蛋白质萃取物中的杂质含量最小值；m表示所有蛋白质萃取物的总个数；

17、步骤s2，利用下面公式(2)，根据所述杂质分布上升线的斜率，对所述预设杂质含量条件对应的预设杂质含量进行减量处理，

18、

19、在上述公式(2)中，δn表示对预设杂质含量进行减量处理的降低量；n0表示预设杂质含量；

20、步骤s3，利用下面公式(3)，根据对预设杂质含量进行减量处理的降低量，从所有蛋白质萃取物筛选其中部分的蛋白质萃取物进行二次萃取处理，

21、a＝{*,n(a)≥n0-δn-&&,1≤a≤m-+|a}  (3)

22、在上述公式(3)中，a表示进行二次萃取处理的蛋白质萃取物编号集合；&&表示逻辑与；{*,n(a)≥n0-δn-&&,1≤a≤m-+|a}表示在满足n(a)≥n0-δn和1≤a≤m的共同条件下的所有a值组成集合。

23、可选地，对满足预设杂质含量条件的蛋白质萃取物进行液相色谱分离处理，并对所述液相色谱分离处理进行视觉检测，得到所述蛋白质萃取物在所述液相色谱分离处理过程中的物质分离状态信息，包括：

24、将满足预设杂质含量条件的蛋白质萃取物配置成蛋白质溶液后，将所述蛋白质溶液送入到液相色谱仪的进样器；再通过所述进样器将所述蛋白质溶液输入到所述液相色谱仪的流动相和固定相中进行反复多次相对运动；

25、采集所述蛋白质溶液对应的相对运动图像，对所述相对运动图像进行识别，得到所述蛋白质溶液包含的蛋白质组分从所述固定相中的分离析出状态信息，以此作为所述蛋白质萃取物在所述液相色谱分离处理过程中的物质分离状态信息。

26、可选地，对所述相对运动图像进行识别，得到所述蛋白质溶液包含的蛋白质组分从所述固定相中的分离析出状态信息，包括：

27、从所述相对运动图像提取相应的图像像素轮廓特征信息，基于所述图像像素轮廓特征信息，确定所述蛋白质溶液包含的蛋白质组分在所述固定相中在单位时间内的分离析出量变化速率。

28、可选地，基于所述物质分离状态信息，调整所述液相色谱分离处理的操作参数，从而获得满足预设物质分离状态条件的分离样品，包括：

29、基于所述分离析出量变化速率，判断所述蛋白质组分在所述固定相中经过预设时间长度后在单位时间内分离析出量是否保持不变；若是，则判断所述蛋白质组分在所述固定相中处于分离析出饱和状态；若否，则判断所述蛋白质组分在所述固定相中不处于分离析出饱和状态；

30、当所述蛋白质组分在所述固定相中处于分离析出饱和状态，则保持所述蛋白质溶液当前在所述流动相和所述固定相的相对运动速度不变；当所述蛋白质组分在所述固定相中不处于分离析出饱和状态，则增大所述蛋白质溶液在所述流动相和所述固定相的相对运动速度，从而获得满足预设物质分离状态条件的分离样品。

31、可选地，对所述分离样品进行质谱检测，得到所述分离样品的初始质谱曲线图的生成状态信息；基于所述初始质谱曲线图的生成状态信息，调整所述质谱检测的操作参数，以此得到最终质谱曲线图，包括：

32、对所述分离样品进行质谱检测，得到所述分离样品在生成初始质谱曲线图过程中对应所有质谱数据各自的生成灵敏度值；将所述生成灵敏度值与预设灵敏度阈值进行对比，若所述生成灵敏度值小于预设灵敏度阈值，则将所述初始质谱曲线图对应的质谱数据确定为不可信质谱数据；否则，将所述初始质谱曲线图对应的质谱数据确定为可信质谱数据；

33、基于所有不可信质谱数据在所述质谱检测过程中的检测时间区间，调整所述质谱检测在所述检测时间区间对应的检测电压参数，以此得到最终质谱曲线图。

34、可选地，对所述最终质谱曲线图进行分析，得到所述血清样品中的m蛋白含量信息，包括：

35、将所述最终质谱曲线图与预设质谱标准曲线图进行对比处理，得到所述血清样品中m蛋白含量浓度信息。

36、与现有技术相比，本发明具有如下有益效果：

37、本技术提供的基于液相色谱质谱联用技术检测血清中m蛋白的方法从血清样品提取得到蛋白质萃取物，对蛋白质萃取物检测，以此判断蛋白质萃取物是否满足预设杂质含量条件，并对不满足预设杂质含量条件的蛋白质萃取物进行二次萃取处理，以此确保蛋白质萃取物的洁净度，避免对后续质谱分析产生干扰；还对满足预设杂质含量条件的蛋白质萃取物进行液相色谱分离处理，得到蛋白质萃取物在液相色谱分离处理过程中的物质分离状态信息，以此调整液相色谱分离处理的操作参数，提高蛋白质萃取物下属不同物质组分的分离效率和彻底性；再对分离样品进行质谱检测并调整质谱检测的操作参数，确保最终质谱曲线的可信度，以此得到血清样品中m蛋白含量信息，其并不需要耗费较多人力物力准备样品，还能有效降低对蛋白检测的干扰，确保m蛋白定量检测的准确性。