一种分离和/或检测奥扎格雷合成中间体及其有关物质的方法与流程

本发明涉及药物分析，具体涉及一种分离和/或检测奥扎格雷合成中间体及其有关物质的方法。

背景技术：

1、奥扎格雷钠(sodium ozagrel)是一种高效、选择性血栓素合成酶抑制剂，通过抑制血栓烷a2(txa2)的产生及促进前列环素(pgi2)的生成而改善两者间的平衡失调，具有抗血小板聚集和扩张血管作用，最早由日本小野药品工业株式会社于1989年上市，临床主要用于治疗急性血栓性脑梗死和脑梗死伴随的运动障碍。奥扎格雷化学名为(e)-3-(咪唑基-1-甲基)肉桂酸，结构如下式i。

2、

3、式ii化合物是制备奥扎格雷的关键中间体(路线一为奥扎格雷钠的制备工艺)，

4、

5、

6、药品杂质分为工艺杂质(包括制备中未反应完全的反应物及试剂、中间体、副产物等)、降解产物、从反应物及试剂中混入的杂质等。对原料药制备过程中各步中间体的杂质控制与分析直接决定了终产物原料药的纯度和质量，研发人员在实际工作中需要对原料药合成过程中的起始物料以及各步反应的中间体都进行杂质分析和控制。制备奥扎格雷的关键中间体即上述式ii化合物的相关杂质情况及分离检测方法未见报道，开发能高效分离并检测式ii化合物及其有关物质的方法具有重要的产业价值。

技术实现思路

1、本发明的目的一方面在于提供一种分离和/或检测式ii所示的奥扎格雷合成中间体化合物及其有关物质的方法，其包括如下特征：采用高效液相色谱法，色谱柱固定相为十八烷基硅烷键合硅胶，流动相由a相和b相组成，a相为磷酸水溶液，b相为乙腈，流动相为梯度洗脱，所述有关物质选自有关物质1、有关物质2、有关物质3、有关物质4、有关物质5、有关物质6、有关物质7中的任一种或其组合：

2、

3、本发明优选的技术方案中，所述十八烷基硅烷键合硅胶色谱柱选自eclipse plusc18、kromasil 100-5-c18、kromasil eternity-5-c18、kromasil eternityxt-10-c18、kromasil100-10-c18、kromasil 300-5-c18、ymc triat c18、ymc ods c18、ymc-pack proc18、phenomenex kinetex c18、phenomenex luna pfp(2)100a、agilent zorbax sb-c18、poroshell120ec-c18、bonshell c18、bonshell asb c18、venusil hlp c18、venusil c18plus、venusil xbp c18(a)、venusil xbp c18(b)、venusil mp c18、innoval neo xd c18、techmate c18-st、techmate c18-stⅱ、techmate ci8 ug、agilent microspher c18、agilent infinitylab poroshell 120ec-c18、waters xselect csh fluoro-phenyl、daicel chiralcel od-rh、welch ultimate xs c18中的任一种或其组合。

4、本发明优选的技术方案中，所述十八烷基硅烷键合硅胶色谱柱优选为welchultimate xs c18。

5、本发明优选的技术方案中，所述色谱柱具体为welch ultimate xs c18，4.6mm×250mm，5μm。

6、本发明优选的技术方案中，所述色谱柱的柱温为18℃-32℃，优选为20℃-30℃，更优选为23-27℃。

7、本发明优选的技术方案中，所述a相磷酸水溶液的体积浓度为0.01-1％，优选为0.05-0.5％，更优选为0.05-0.25％。

8、本发明的优选技术方案中，梯度洗脱程序为：

9、

10、优选梯度洗脱程序为：

11、

12、本发明优选的技术方案中，所述流动相的流速为0.7ml/min-1.3ml/min，优选为0.9ml/min-1.1ml/min。

13、本发明优选的技术方案中，所述方法配紫外检测器，所述紫外检测器检测波长为200nm-220nm，优选为205nm-215nm，更优选为208nm-212nm。

14、本发明优选的技术方案中，所述方法的进样体积为1-10μl，优选1-8μl，更优选1-5μl。

15、本发明的优选技术方案中，出峰顺序依次为有关物质1、有关物质2、有关物质3、有关物质4、有关物质5、有关物质6、有关物质7和式ii化合物，其中，各有关物质峰之间及式ii化合物峰与相邻化合物峰之间的分离度均大于1.5。

16、本发明的优选技术方案中，所述方法包括下述步骤：

17、1)溶液配制：

18、溶剂：体积比为1：1的乙腈-水；

19、供试品溶液：取式ii化合物适量，用溶剂配制为浓度约为1mg/ml的溶液；

20、系统适用性溶液：分别称取有关物质1-7和式ii化合物对照品各适量，用溶剂溶解并稀释制成每1ml含各有关物质约3μg和含式ii化合物约1mg的混合溶液；

21、2)以色谱柱welch ultimate xs-c18，4.6mm×250mm，5μm为固定相，柱温为20℃-30℃，流动相由a相和b相组成，a相为0.1％(v/v)磷酸水溶液，b相为乙腈，流动相为梯度洗脱，所述梯度洗脱程序如下，

22、，

23、将洗脱样品注入液相色谱仪，进样量为5μl，紫外检测器的检测波长为208-212nm，流速为0.9ml/min-1.1ml/min，洗脱并记录色谱图。

24、本发明的优选技术方案中，所述方法包括下述步骤：

25、1)溶液配制：

26、溶剂：体积比为1：1的乙腈-水；

27、供试品溶液：取式ii化合物适量，用溶剂配制为浓度约为1mg/ml的溶液；

28、系统适用性溶液：分别称取有关物质1-7和式ii化合物对照品各适量，用溶剂溶解并稀释制成每1ml含各有关物质约3μg和含式ii化合物约1mg的混合溶液；

29、2)以色谱柱welch ultimate xs-c18，4.6mm×250mm，5μm为固定相，柱温为25℃，流动相由a相和b相组成，a相为0.1％(v/v)磷酸水溶液，b相为乙腈，流动相为梯度洗脱，所述梯度洗脱程序如下，

30、，

31、将洗脱样品注入液相色谱仪，进样量为5μl，紫外检测器的检测波长为210nm，流速为1ml/min，洗脱并记录色谱图。

32、本发明的另一目的在于提供本发明所述的方法在用于分离和/或检测式ii所示的奥扎格雷合成中间体化合物及其有关物质中的应用。

33、除非另有说明，本发明涉及液体与液体之间的百分比时，所述的百分比为体积/体积百分比；本发明涉及液体与固体之间的百分比时，所述百分比为体积/重量百分比；本发明涉及固体与液体之间的百分比时，所述百分比为重量/体积百分比；其余为重量/重量百分比。

34、与现有技术相比，本发明具备以下有益效果：

35、本发明通过科学筛选优化高效液相色谱的洗脱条件和检测条件，实现了对奥扎格雷合成中间体式ii化合物及其有关物质共8个结构近似、难以分离的化合物的有效分离与检测，其中有关物质3为基因毒杂质，其余化合物为一般工艺杂质，分离效果良好，保证奥扎格雷合成中间体式ii化合物以及终产品奥扎格雷的质量控制，显著提高制备药品的质量，减少药物临床试验中和治疗中可能出现的不良反应，保证了患者用药的有效性、安全性。