吸入混悬剂中微量司盘20的含量测定方法与流程

本发明属于分析检测，具体涉及一种吸入混悬剂中微量司盘20的含量测定方法。

背景技术：

1、司盘（span）和吐温（tween）是两种常见的非离子表面活性剂，它们在化学结构、用途和应用领域上有所区别。司盘系列的主要化学成分为山梨醇酐脂肪酸酯，而吐温系列的主要化学成分是聚氧乙烯山梨醇酐单硬脂酸酯。司盘系列通常为油包水型乳化剂，具有良好的润湿、扩散性能，广泛应用于食品、医药、化妆品等行业。吐温系列则为水包油型乳化剂，具有乳化、润湿扩散等作用，同样在食品、医药、化妆品等行业中发挥重要作用。

2、在使用司盘作为药用辅料时，需要根据药物的性质、制剂的类型以及患者的需求进行合理配伍。首先，要选择合适的司盘型号和用量，以确保其在制剂中的稳定性和有效性。其次，要注意司盘与其他辅料的相互作用，避免产生不良反应或影响制剂的质量。此外，在制备过程中要严格控制温度、搅拌速度等工艺参数，以确保制剂的质量符合要求。

3、对于司盘的质量控制，需要遵循相关的药典标准和行业规范。主要的质量控制指标包括外观、熔点、酸值、碘值、过氧化值等。这些指标可以反映司盘的纯度、稳定性和安全性，是确保司盘质量符合要求的重要依据。

4、作为关键辅料，需要对制剂中的司盘含量进行质量控制，特别是在仿制药开发中，准确测定参比制剂中关键辅料的含量，是仿制药开发非常关键的一环。由于吸入混悬剂中组分较为复杂，辅料之间存在一定影响，因此现有方法不适用于吸入混悬剂中司盘20含量测定。

5、cn114324644a公开了一种司盘60含量的测定方法，其利用hplc-elsd对含有司盘60的待测样品进行检测，其中，流动相为正己烷和异丙醇，并进行梯度洗脱。但该方法经本发明发明人验证，其仅能用于检测仅含司盘60的待测样品，并不适宜用于检测司盘20，且当样品中同时含有吐温20等干扰物质时，无法获得准确的检测结果。而由于混悬剂具有特殊的物理状态，同时组分较为复杂，辅料之间存在影响，将吸入混悬剂直接进样，混悬颗粒物粒径在1~10um范围，干扰光路，影响测试准确性，导致该方法也不适用于吸入混悬剂。

6、因此，迫切需要开发一种适用于吸入混悬剂型的，抗干扰能力强，检测灵敏度高，检测结果准确的分析方法，用于测定吸入混悬剂型中司盘20的含量。

技术实现思路

1、为弥补吸入混悬剂型中司盘20检测的技术空白，本发明提出了一种吸入混悬剂中微量司盘20的含量测定方法，其目的旨在开发一种方法，实现吸入混悬剂中吐温20和司盘20的有效分离和检测。

2、本发明提供了一种吸入混悬剂中微量司盘20的含量测定方法，其包括以下步骤：

3、a、绘制标准曲线：配制司盘20的标准线性溶液，进样至lc-ms中进行检测，以标准线性溶液中司盘20的浓度为横坐标，以对应峰面积为纵坐标，绘制浓度-峰面积标准曲线，得到司盘20的线性方程；

4、b、检测并计算吸入混悬剂中司盘20含量：将样品溶液进样至lc-ms中，在步骤a相同条件下进行检测，得样品溶液中司盘20的峰面积，带入步骤a所得线性方程，计算出样品溶液中司盘20的含量；

5、所述吸入混悬剂为丙酸倍氯米松雾化混悬液制剂或丙酸氟替卡松雾化混悬液制剂；

6、步骤a中，所述标准线性溶液由以下方法配制得到：准确称取司盘20，加入异丙醇，配制成目标浓度的异丙醇溶液；

7、步骤b中，所述样品溶液由以下方法配制得到：取丙酸倍氯米松雾化混悬液制剂，加入异丙醇，稀释700~2000倍，即得丙酸倍氯米松样品溶液，和/或，取丙酸氟替卡松雾化混悬液制剂，加入异丙醇，稀释30~80倍，即得丙酸氟替卡松样品溶液；

8、步骤a和步骤b中，检测时，色谱柱为chrom core saa，4.6×150mm，5µm；

9、步骤a和步骤b中，检测时，流速为0.5~1ml/min；

10、步骤a和步骤b中，检测时，柱温为45~55℃；

11、步骤a和步骤b中，检测时，进样量为5~50μl；

12、步骤a和步骤b中，检测时，采用梯度洗脱，梯度洗脱程序为：

13、；

14、流动相a为0.09~0.11%甲酸的水溶液（即将甲酸和水按体积比0.9~1.1：1000混匀），流动相b为0.09~0.11%甲酸的异丙醇溶液（即将甲酸和异丙醇按体积比0.9~1.1：1000混匀）；

15、步骤a和步骤b中，检测时，ms参数为：

16、。

17、优选的，上述测定方法中，配制丙酸倍氯米松样品溶液时，稀释1000倍；配制丙酸氟替卡松样品溶液时，稀释50倍。

18、优选的，上述测定方法中，流动相a为0.1%甲酸的水溶液（即将甲酸和水按体积比1：1000混匀），流动相b为0.1%甲酸的异丙醇溶液（即将甲酸和异丙醇按体积比1：1000混匀）。

19、优选的，上述测定方法，步骤a和步骤b中，检测时，流速为0.6ml/min。

20、优选的，上述测定方法，步骤a和步骤b中，检测时，柱温为50℃。

21、优选的，上述测定方法，步骤a和步骤b中，检测时，进样量为5μl或25μl。

22、其中，上述测定方法，步骤a中，所得线性方程的线性范围为103.6ng/ml~312ng/ml。在绘制标准曲线时，本领域技术人员可以根据需要，在线性范围内，选择适宜的若干浓度点（一般5~6个），获得相应曲线。

23、其中，上述测定方法，步骤a中，标准线性溶液中司盘20的浓度为104ng/ml、166.4ng/ml、208ng/ml、249.6ng/ml和312ng/ml，进样量为5μl，司盘20的线性方程为：y =85.7750 x + 449.5931，x为标准线性溶液或样品溶液中司盘20以ng/ml为单位的浓度数值，y为峰面积。

24、其中，上述测定方法，步骤a中，步骤a中，标准线性溶液中司盘20的浓度为103.6ng/ml、165.76ng/ml、207.2ng/ml、248.64ng/ml和310.8ng/ml，进样量为25μl，司盘20的线性方程为：司盘20的线性方程为：y =472.2191x+3011.2069，x为标准线性溶液或样品溶液中司盘20以ng/ml为单位的浓度数值，y为峰面积。

25、本发明中，所用水可采用超纯水仪制备得到。

26、本发明的有益效果：

27、本发明通过对高效液相色谱法中色谱柱、流动相等色谱条件进行了大量优化试验，均难以实现吸入混悬剂中吐温20和司盘20的有效分离和含量测定；最终利用lc-ms法建立一种能够检测吸入混悬剂中的司盘20含量的方法。该方法实现了吸入混悬剂中吐温20和司盘20的有效分离，保证了司盘20检测结果的准确性；本发明通过稳定性、准确度、重复性等试验考察，实现了快速灵敏、结果准确的检出司盘20，为吸入混悬剂制定了科学、严格的内控标准，有效的提高了吸入混悬剂产品的质量。