本发明涉及食品安全，具体为一种检测食品中沙丁胺醇的方法。
背景技术：
1、沙丁胺醇为选择性β2受体激动剂，在现代猪肉养殖中常被用作瘦肉精，来提高生猪的瘦肉产量。2002年始，被列为养殖行业违禁药物，不得在畜禽养殖中添加。人类食用含沙丁胺醇较高的动物组织后会出现肌肉颤动、肌肉、头痛，甚至恶心、呕吐等中毒症状。由于使用沙丁胺醇能够提高动物的瘦肉比例，具有巨大的经济利益，在很多地方，沙丁胺醇的使用屡禁不止，由沙丁胺醇造成的食物中毒事件仍在发生，因此，沙丁胺醇的检测成为遏制人类食用含沙丁胺醇食品的重要措施之一。
2、然而现有的酶联免疫法是通过制备沙丁胺醇的单克隆抗体，通过抗原抗体间的特异性结合实现沙丁胺醇的定性定量检测；此方法虽然具有较高的特异性，但使用的单克隆抗体的制备较为复杂，而且检测结果容易出现假阳性，准确度欠缺，因此，本领域的技术人员提供了一种检测食品中沙丁胺醇的方法，以解决上述背景技术中提出的问题。
技术实现思路
1、(一)解决的技术问题
2、针对现有技术的不足，本发明提供了一种检测食品中沙丁胺醇的方法，解决了现有方法中存在制备复杂和准确度欠缺的问题。
3、(二)技术方案
4、为实现以上目的，本发明通过以下技术方案予以实现：一种检测食品中沙丁胺醇的方法，包括：
5、样品准备，根据食品类型，按照食品安全标准和指南进行采样处理，将采集的样品在适宜的条件下保存，防止沙丁胺醇降解或污染；
6、样品提取，根据食品基质的性质，选择合适的提取溶剂，将样品与提取溶剂混合，通过均质、振荡和离心的步骤提取沙丁胺醇，使用固相萃取柱去除干扰物质；
7、样品净化，将提取液通过预先活化的spe柱，用适当的溶剂进行洗脱，收集含有沙丁胺醇的洗脱液，将洗脱液在氮吹仪或旋转蒸发器中浓缩至适当体积，以便进行lc-ms/ms分析；
8、检测，设置液相色谱仪的流动相、柱温和流速的参数，以实现沙丁胺醇的有效分离，调整质谱仪的参数，其中包括电喷雾离子源的电压、碰撞能量和检测模式，以获得最佳的灵敏度和选择性，将净化后的样品注入液相色谱-串联质谱仪，通过色谱分离和质谱检测，获得沙丁胺醇的色谱图和质谱图；
9、结果分析与判定，通过比较样品的质谱图与标准品的质谱图，确认样品中是否含有沙丁胺醇，使用内标法或标准曲线法，根据沙丁胺醇的峰面积或峰高，结合标准品的浓度，计算样品中沙丁胺醇的含量，根据食品安全标准或法规，判定样品中沙丁胺醇的含量是否超标；
10、质量控制，分析空白样品以确认没有沙丁胺醇的污染，进行回收率试验以评估方法的准确性和可靠性，进行重复性试验以评估方法的精密度。
11、优选的，所述样品准备包括以下步骤：
12、s1.样品采集，根据食品类型和检测目的，按照规定的采样方法和数量进行采样，确保样品具有代表性，并且在采样过程中避免交叉污染；
13、s2.样品保存，采集的样品应立即冷藏或冷冻保存，并尽快进行分析，以防止沙丁胺醇的降解或变化；
14、s3.样品前处理，将采集的样品在无污染的环境中称重，记录样品的准确重量，将称重后的样品放入匀浆机中，加入适量的乙腈或甲醇，进行匀浆处理，以确保沙丁胺醇从样品中完全释放，将匀浆后的样品在高速离心机中离心，以分离出固体颗粒和提取液；
15、s4.样品提取，根据食品基质的性质，选择合适的提取溶剂，这些溶剂应能有效溶解沙丁胺醇并抑制其降解，将样品与提取溶剂按一定比例混合，使用均质器或振荡器进行充分混合，以确保沙丁胺醇从样品中完全释放；然后通过离心或过滤去除固体颗粒，得到清亮的提取液；
16、s5.样品净化，使用固相萃取spe技术进行净化；首先将spe柱进行活化和平衡，然后将提取液通过spe柱，沙丁胺醇被吸附在柱上，而其他干扰物质则被洗脱掉；最后用适当的溶剂洗脱沙丁胺醇，收集洗脱液；
17、s6.样品浓缩，将洗脱液在氮吹仪或旋转蒸发器中浓缩至适当体积，以提高检测的灵敏度；浓缩过程中需注意控制温度，避免沙丁胺醇的损失。
18、优选的，所述样品提取包括以下步骤：
19、s1.样品匀浆，准确称取一定量的食品样品，通常为几克到几十克，具体取决于样品的类型和预期的沙丁胺醇浓度，向样品中加入适量的乙腈、甲醇或乙酸乙酯；这些溶剂能够有效地溶解沙丁胺醇，并有助于抑制其降解，使用匀浆机将样品和提取溶剂混合均匀，确保沙丁胺醇从样品基质中完全释放出来；
20、s2.提取，将匀浆后的样品放置在振荡器上进行振荡，以促进沙丁胺醇与提取溶剂的充分接触和混合，振荡后，将样品在离心机中高速离心，以分离出固体颗粒和提取液；固体颗粒通常包含样品的基质，而提取液则含有沙丁胺醇；
21、s3.提取液净化，将提取液通过固相萃取柱进行净化；首先，对spe柱进行活化和平衡，然后将提取液通过柱子，沙丁胺醇被吸附在柱上，而其他干扰物质则被洗脱掉，使用适当的洗脱溶剂对spe柱进行洗脱，以收集含有沙丁胺醇的洗脱液；
22、s4.提取液浓缩并准备检测，将收集到的洗脱液在氮吹仪或旋转蒸发器中浓缩至适当体积，以提高检测的灵敏度；浓缩过程中需注意控制温度，避免沙丁胺醇的损失，根据需要，将浓缩后的提取液用适当的溶剂稀释至适合检测的浓度，使用微孔滤膜对提取液进行过滤，以去除可能存在的微小颗粒，确保样品的清洁，避免堵塞检测仪器。
23、优选的，所述检测包括以下步骤：
24、s1.样品准备，根据预期的沙丁胺醇浓度，将净化后的样品适当稀释，以确保其在检测仪器的线性范围内，向样品中加入已知浓度的内标物质，以校正仪器的响应变化和样品处理过程中的损失；
25、s2.色谱条件设置，通过选择c18柱作为沙丁胺醇分离的色谱柱，配置适合沙丁胺醇分离的流动相，通常包括水相和有机相，例如水和甲醇或乙腈的混合物，设置梯度洗脱程序，以优化沙丁胺醇的分离效果，设定合适的柱温和流速，以保证沙丁胺醇的分离效率和检测灵敏度；
26、s3.质谱条件设置，选择电喷雾电离源作为沙丁胺醇检测的离子源，使用离子监测或多重反应监测对质谱进行检测，调整毛细管电压、碰撞能量和碰撞气压力，以获得最佳的检测灵敏度和选择性；
27、s4.样品注入与分析，将准备好的样品注入液相色谱-串联质谱仪，通过色谱柱对样品中的沙丁胺醇进行分离，通过质谱仪对分离后的沙丁胺醇进行检测，记录其质谱图和响应信号；
28、s5.数据处理与分析，通过比较样品的质谱图与标准品的质谱图，确认样品中是否含有沙丁胺醇，使用内标法或标准曲线法，根据沙丁胺醇的响应信号和内标响应信号的比值，结合标准品的浓度，计算样品中沙丁胺醇的含量，根据食品安全标准或法规，判定样品中沙丁胺醇的含量是否超标。
29、优选的，所述结果分析与判定包括以下步骤：
30、s1.数据处理，通过比较样品的质谱图与标准品的质谱图，确认样品中是否含有沙丁胺醇；这通常涉及对特定的离子对母离子和子离子的监测，以及对保留时间的匹配，使用内标法或标准曲线法，根据沙丁胺醇的响应信号和内标响应信号的比值，结合标准品的浓度，计算样品中沙丁胺醇的含量；这需要建立一个准确的标准曲线，通过线性回归分析来确定样品中沙丁胺醇的浓度；
31、s2.结果判定，将计算出的沙丁胺醇含量与食品安全标准或法规中规定的最大残留限量mrl进行比较，如果样品中的沙丁胺醇含量超过规定的mrl，则判定为超标，需要采取相应的措施，如召回产品、停止销售，如果样品中的沙丁胺醇含量低于或等于规定的mrl，则判定为合格，产品可以继续销售；
32、s3.质量控制，分析空白样品以确认没有沙丁胺醇的污染，确保检测结果的准确性，进行回收率实验以评估方法的准确性和可靠性，回收率应在一个合理的范围内，通常为70％-120％，进行重复性实验以评估方法的精密度；重复性应良好，变异系数cv应低于一定的阈值，阈值设定为10％；
33、s4.报告编制，详细记录所有检测数据和分析结果，包括样品信息、检测条件、计算过程和最终结果，编制检测报告，报告中应包括样品的描述、检测方法、检测结果、判定结论以及可能的建议或备注；
34、s5.后续行动，保存所有相关的实验记录和检测报告，以备未来参考或审计，如果检测结果表明存在食品安全风险，应及时与相关管理部门沟通，并采取必要的风险控制措施。
35、优选的，所述质量控制包括以下步骤：
36、s1.空白样品分析，准备一个或多个空白样品，这些样品不含有沙丁胺醇，用于检测实验室环境或试剂中可能存在的沙丁胺醇污染，在每次检测批次中，至少分析一个空白样品，以监控实验室环境和试剂的清洁度，如果空白样品中检测到沙丁胺醇，需要调查污染源并采取措施消除污染；
37、s2.回收率实验，在一定数量的样品中加入已知浓度的沙丁胺醇标准品，制备加标样品，与正常样品一样进行提取、净化和检测，根据加标样品中沙丁胺醇的检测浓度与实际加入浓度的比值，计算回收率，回收率应在70％-120％之间，如果超出此范围，需要重新评估提取和净化步骤；
38、s3.重复性实验，对同一样品进行多次独立分析，以评估方法的重复性，计算多次分析结果的标准偏差和变异系数，变异系数应低于10％，如果超出此范围，需要检查实验操作的一致性和仪器的稳定性；
39、s4.标准曲线的制备与验证，使用一系列已知浓度的沙丁胺醇标准品，制备标准曲线，通过分析标准曲线的线性、斜率和相关系数，验证其适用性，定期使用新的标准曲线进行校准，以确保检测结果的准确性；
40、s5.实验室内部质量控制，定期分析实验室内部质控样品，以监控检测过程的一致性，记录所有质控数据，并定期评估检测过程的稳定性和可靠性；
41、s6.实验室间质量控制，参与由外部机构组织的实验室间比对，以评估实验室检测能力的准确性，根据比对结果，调整和优化检测方法；
42、s7.文档记录与审核，保存所有质量控制的记录，包括空白样品、加标样品、重复性实验和标准曲线，定期对质量控制记录进行审核，以确保检测过程的合规性和质量控制的有效性。
43、(三)有益效果
44、本发明提供了一种检测食品中沙丁胺醇的方法。具备以下有益效果：
45、1、本发明中，通过采用lc-ms/ms能够检测到极低浓度的分析物，通常达到皮克(pg)甚至飞克(fg)级别；通过选择性离子监测(sim)或多重反应监测(mrm)模式，可以显著提高检测的选择性，减少样品基质干扰。
46、2、本发明中，液相色谱(lc)部分可以实现复杂样品中不同组分的有效分离，而质谱(ms)部分则提供高分辨率的分子量和结构信息，有助于准确鉴定和定量分析物。
47、3、本发明中，lc-ms/ms通常需要的样品前处理步骤较少，可以减少样品损失和污染的风险，提高分析的准确性和重复性。