基于UPLC-Q-TOF-MS检测心脑欣全化学成分的方法与流程

本发明涉及心脑欣化学成分分析，尤其涉及基于uplc-q-tof-ms检测心脑欣全化学成分的方法。

背景技术：

1、心脑欣的功效是益气养阴、活血化瘀，主要用于治疗气阴不足、瘀血阻滞所引起的头晕，头痛，心悸，气喘，乏力以及缺氧引起的红细胞增多症。心脑欣的主要成分包括天然红景天、枸杞子和新鲜沙棘糖浆。其中，传统藏药红景天为复方君药，具有益气活血，通脉平喘之功，主要包括红景天苷、酪醇、没食子酸等化学成分；枸杞子有滋肝补肾、益精明目之功效，相关研究表明，枸杞子中咖啡酸、对香豆酸等有机酸类成分与其功效密切相关；沙棘有健脾消食，止咳祛痰，活血化瘀之功效，据相关研究表明，没食子酸、槲皮素等可作为沙棘功效相关的质量标志物。但现行质量标准及相关文献中仅检测了红景天苷和甜菜碱的含量，难以作为整体质量评价标准。

2、心脑欣作为一种由3味中药组成的复方中药，所含化学成分复杂。现有技术中，有文献报道了一测多评法测定心脑欣药物中7种成分含量的方法，较好地解决了指标成分单一的问题，但该方法一次检测出的药物成分数量依然较少，不能达到快速且高效地全面评价心脑欣药品质量的目的。为了提升心脑欣药物的质量控制水平，同时提高提升对该类药品进行综合性的评价，亟待开发出来一种简便、快速、准确、高效地检测心脑欣中全化学成分的方法。

技术实现思路

1、针对上述问题，本发明提供一种基于uplc-q-tof-ms检测心脑欣全化学成分的方法。

2、为解决上述技术问题，本发明提供的技术方案是：

3、基于uplc-q-tof-ms检测心脑欣全化学成分的方法，包括如下步骤：

4、(1)供试品溶液的制备：将心脑欣样品加入醇溶剂中进行提取，过滤，得供试品溶液；

5、(2)采用uplc-q-tof-ms方法对所述供试品溶液进行检测，其中，

6、超高液相色谱的条件包括：

7、正离子模式：采用waters acquity hss t3色谱柱，流动相a为0.08wt％～0.12wt％的甲酸水溶液，流动相b为乙腈，进行第一梯度洗脱；

8、负离子模式：采用waters acquity beh amide色谱柱，流动相a为22～28mmol/l的乙酸铵水溶液，流动相b为乙腈，进行第二梯度洗脱；

9、四极杆飞行时间串联质谱的条件包括：

10、电喷雾离子源，正负离子模式，检测模式为信息关联采集模式；其中，质荷比扫描范围为100～1500m/z，离子源温度为520～580℃，簇裂解电压为75～85v，碰撞能量为33～37ev。

11、相对于现有技术，本发明提供的基于uplc-q-tof-ms检测心脑欣全化学成分的方法，先通过醇溶剂提取制备供试品溶液；再采用uplc-q-tof-ms方法对所述供试品溶液进行测定，特定的超高液相色谱的条件可以有效分离出心脑欣的各化学成分，特定的四级杆飞行时间串联质谱的条件可以提高检测的灵敏度和精确度。实施例结果表明，本发明最终鉴定出了心脑欣样品中的102个化合物，这些化合物分别属于黄酮类、蒽醌类，有机酸类，苯丙素类及其他类化合物。以上不同种类、不同来源的活性成分，可以通过协同或互补的方式，对许多心血类疾病具有治疗作用。

12、本发明采用uplc-q-tof-ms方法能快速、准确地检测出心脑欣样品的多种化学成分，为促进以心脑欣为基础的制剂二次开发以及为心脑欣药物的更深入研发提供参考。

13、优选的，所述供试品溶液的具体制备步骤包括：

14、s1，取心脑欣样品，粉碎过筛，加入醇溶剂进行一次提取，固液分离，得滤液；

15、s2，向所述滤液中加入醇溶剂进行二次提取，固液分离，得供试品溶液。

16、本发明采用二次加入醇溶剂进行心脑欣化学成分的提取，可以充分提取目标成分，提高提取的效果。

17、优选的，所述醇溶剂为质量浓度为70％～80％的甲醇水溶液。

18、优选的，步骤s1中，所述心脑欣样品与醇溶剂的质量体积比为1g:(45～55)ml。

19、优选的，步骤s2中，所述滤液与醇溶剂的体积比为1:(0.8～1.2)。

20、本发明优选的醇溶剂对心脑欣中的活性成分具有更好的溶解性及提取能力，优选的用量比可以保证在提取过程中不会造成心脑欣成分的变化或损失。

21、优选的，所述一次提取和二次提取采用超声提取、回流提取或涡旋提取，更优选为超声提取。

22、优选的，所述超声提取的频率为38～42khz，功率为280～320w，时间为18～25min。

23、本发明优选的超声提取条件可以进一步提高提取效率。

24、优选的，所述waters acquity hss t3色谱柱的规格为2.1mm×100mm，填料直径为1.8μm。

25、优选的，所述waters acquity beh amide色谱柱的规格为2.1mm×100mm，填料直径为1.7μm。

26、优选的，所述第一梯度洗脱的洗脱程序如下：

27、0～1.5min，99％流动相a，1％流动相b；

28、1.5～15min，99％→1％流动相a，1％→99％流动相b；

29、15～20min，1％流动相a，99％流动相b；

30、20～21min，1％→99％流动相a，99％→1％流动相b；

31、21～30min，99％流动相a，1％流动相b。

32、优选的，所述第二梯度洗脱的洗脱程序如下：

33、0～2min，5％流动相a，95％流动相b；

34、2～18min，5％→35％流动相a，95％→65％流动相b；

35、18～20min，35％→60％流动相a，65％→40％流动相b；

36、20～22min，60％流动相a，40％流动相b；

37、22～22.1min，60％→5％流动相a，40％→95％流动相b；

38、22.1～30min，5％流动相a，95％流动相b。

39、优选的，流速为0.18～0.22ml/min，柱温为25～30℃。

40、优选的，所述超高液相色谱的条件还包括：进样量0.8～1.2μl。

41、本发明优选的超高液相色谱的条件，可以更有效地分离出心脑欣的各化学成分。

42、优选的，四极杆飞行时间串联质谱的条件还包括：喷雾电压为+(5300～5700)v，-(4300～4700)v；雾化气压力为53～58psi；气帘气压力为33～37psi；辅助气压力为53～58psi；碰撞能量滚动区间为13～17ev。

43、本发明优选的四级杆飞行时间串联质谱的条件，可以进一步提高检测的灵敏度和精确度。

44、本发明采用uplc-q-tof-ms方法，通过筛选液相色谱和质谱的条件，实现了快速检测心脑欣中多种化学成分，操作简便、快速、准确、高效，样品前处理简便，简化了实验步骤，降低了成本；同时，实现了心脑欣中多成分的快速定性或定量，对于提高心脑欣药物的质量标准具有重要意义。