一种太子参药材指纹图谱的建立方法与流程

本发明涉及药物分析，具体涉及一种太子参药材指纹图谱的建立方法。

背景技术：

1、中药太子参为石竹科植物孩儿参pseudostellaria heterophylla(miq.)pax expax et hoffm.的干燥块根，具有益气健脾、生津润肺的功效，同时具有免疫调节、抗肿瘤、降血糖等药理活性。

2、中药指纹图谱基于多种化学成分的鉴定手段，能够用于综合评价中药材质量。目前有多项文献资料及专利申请针对太子参指纹图谱技术进行了报道和公开，但存在峰的分离效果差、可用于比较的共有峰数目少、指纹图谱的准确度较低等问题。

3、比如现有技术1(刘伟祥,胡海云,刘喜纯,等.太子参hplc色谱指纹图谱研究[j].中草药,2007,38(5):4)公开了太子参hplc色谱指纹图谱研究，其色谱条件为：色谱柱：dikmakromasil c18(250mm×4.6mm，5pm)；以乙腈为流动相a，以水为流动相b，梯度洗脱程序为(a)：0～25min：0％～15％；25～40min：15％～16％；40～45min：16％～25％；45～75min：25％～50％。体积流量：0.8ml/min；柱温：25℃；进样量：10μl；检测波长：203nm。供试品溶液的制备包括：精密称取太子参样品(粗粉)1.0g,加50％乙醇50ml，超声30min(300w)，滤过，滤液蒸干，残渣加水10ml溶解，用水饱和的正丁醇30ml萃取，萃取液再用正丁醇饱和的水20ml洗涤，正丁醇液蒸干，残渣用50％甲醇溶解，并定容至5ml，摇匀。过0.45um微孔滤膜，即得。其指纹图谱如图1所示。由图1可知，其指纹图谱的4号峰和5号峰分离度较差，且共有峰的数目较少，仅有7个峰，指纹图谱的准确度有待进一步提高。

4、中国专利申请cn114720568a公开了一种太子参药材的指纹图谱建立方法及其应用，其采用高效液相色谱法，所述高效液相色谱法的条件包括：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈为流动相a，以水为流动相b形成混合流动相，按照0至55min内混合流动相中的流动相a与流动相b的体积比从5：95变化至90：10的梯度进行洗脱；检测波长为203nm。但是其也仅有12个共有峰，指纹图谱的准确度有待进一步提高。

5、因此，开发一种能解决上述技术问题的太子参药材指纹图谱的建立方法是非常必要的。

技术实现思路

1、本发明的目的是克服现有技术的不足而提供一种峰的分离效果较好、共有峰数目较多的太子参药材指纹图谱的建立方法。

2、本发明是通过以下技术方案予以实现的：

3、一种太子参药材指纹图谱的建立方法，包括如下步骤：

4、(1)供试品溶液的制备：取太子参药材用95％乙醇提取，滤过，将滤液干燥后加乙腈溶液复溶，得到供试品溶液；

5、(2)进样分析：将供试品溶液注入高效液相色谱仪进行分析，以共有的色谱峰作为共有特征峰构建太子参药材指纹图谱。

6、在本发明的一些实施例中，步骤(1)中所述乙腈溶液的体积浓度为20％。

7、在本发明的一些实施例中，步骤(1)中所述提取的方式为加热回流提取。

8、在本发明的一些实施例中，步骤(1)中所述太子参药材与95％乙醇的用量比为1g:17.5ml。

9、在本发明的一些实施例中，步骤(1)中所述提取的时间为1h。

10、在本发明的一些实施例中，步骤(1)中太子参药材与乙腈溶液的用量比为4g:5ml。

11、在本发明的一些实施例中，步骤(1)中太子参药材先研磨成粉末再用95％乙醇提取。

12、在本发明优选的一些实施例中，步骤(1)中所述粉末过五号筛。

13、在本发明的一些实施例中，所述建立方法还包括对照品溶液的制备：选择太子参环肽a、太子参环肽b、太子参环肽d、太子参环肽甲、太子参环肽乙、太子参环肽丁、太子参环肽戊和太子参环肽庚作为对照品，加甲醇溶解，制备对照品溶液；步骤(2)中将供试品溶液和对照品溶液注入高效液相色谱仪进行分析，以共有的色谱峰作为共有特征峰构建太子参药材指纹图谱。

14、在本发明的一些实施例中，所述太子参药材指纹图谱至少包括20个共有特征峰，其相对于参照峰太子参环肽b的相对保留时间范围分别为：0.0642-0.0643、0.0806-0.0807、0.0945-0.0947、0.1191-0.1193、0.1637-0.1643、0.1917-0.1923、0.2474-0.2480、0.3300-0.3314、0.3791-0.3804、0.3967-0.3983、0.4433-0.4452、0.4642-0.4662、0.7646-0.7664、0.7946-0.7965、1.0000、1.0854-1.0890、1.1044-1.1068、1.1550-1.1591、1.2282-1.2320、1.2520-1.2564。

15、在本发明的一些实施例中，步骤(2)中所述高效液相色谱仪的测试条件包括：采用变波长检测，具体为0～10.5min，220nm；10.5～35min，270nm；35～135min，203nm。

16、在本发明的一些实施例中，步骤(2)中所述高效液相色谱仪的测试条件包

17、括：采用乙腈作为流动相a，采用0.1％磷酸水溶液作为流动相b。

18、在本发明的一些实施例中，步骤(2)中所述高效液相色谱仪的测试条件还包括：洗脱方式为梯度洗脱，具体为：0～30min，10％～16％a；30～35min，16％～23％a；35～85min，23％～43％a；85～91min，43％～67％a；91～115min，67％～95％a；115～135min，95％a。

19、在本发明的一些实施例中，步骤(2)中进样前将供试品溶液和对照品溶液过0.22μm微孔滤膜。

20、在本发明的一些实施例中，所述高效液相色谱仪的测试条件包括：

21、色谱柱：agilent zorbax eclipse plus c18，5μm，4.6×250mm；

22、流速：1ml/min；

23、柱温：25℃；

24、进样量：20μl。

25、本发明的有益效果是：

26、本发明对提取溶剂进行了优化，最终得到的色谱图峰形好且清晰，分离度较高，有利于构建指纹图谱，提高评价准确度。

27、本发明对复溶溶剂进行了筛选，发现只有采用乙腈溶液才能对提取后得到的物质进行复溶。

28、本发明进一步对洗脱程序进行了优化，采用本发明的洗脱程序得到的色谱峰分布较均匀，峰的数目较多，且分离度较好。

29、本发明采用紫外检测器在203nm、220nm、270nm这3种波长切换条件下进行检测，得到的色谱峰分离度良好且峰的数目较多。

30、本发明构建的指纹图谱获得的共有峰数目高达20个，并且精密度、稳定性和重复性良好，49批太子参药材的相似度评价结果较高。