一种血府逐瘀组合物的指纹图谱建立方法及其标准指纹图谱与应用与流程

本发明涉及中药质量检测方法，具体涉及一种血府逐瘀组合物的指纹图谱建立方法及其标准指纹图谱与应用。

背景技术：

1、血府逐瘀方源自清代医家王清任的《医林改错》，是活血化瘀方中的经典名方，具有活血祛瘀，行气止痛的功效。该方由柴胡、当归、地黄、赤芍、红花、炒桃仁、麸炒枳壳、甘草、川芎、牛膝及桔梗十一味中药组成，主治气滞血瘀所致的胸痹、头痛日久、痛如针刺而有定处、内热烦闷、心悸失眠、急躁易怒等。以血府逐瘀方为基础，采用现代制药工艺研究开发了血府逐瘀胶囊、片剂等，以下统称为血府逐瘀组合物。

2、血府逐瘀组合物在长期的生产实践和质量控制过程中，存在控制指标较为单一的问题。如文献号为cn101700304b的中国发明专利公开了一种血府逐瘀口服液的检测方法，其通过高效液相色谱法、使用蒸发光散射检测器测定血府逐瘀组合物中的苦杏仁苷含量，具有较好重现性、稳定性和精密度，但其质控指标单一，文献号为cn102091167b的中国发明专利提供了一种中药制剂血府逐瘀胶囊的检测方法，其质量标准中设置以柴胡、甘草为对照药材，薄层色谱法鉴别血府逐瘀胶囊处方中是否含有柴胡、甘草成分；以苦杏仁苷、芍药苷、柚皮苷为对照品，高效液相色谱法检测血府逐瘀胶囊处方中苦杏仁苷、芍药苷、柚皮苷的含量的检验方法，改变了原标准中单指标成分含量控制复方质量的局面，提高了血府逐瘀胶囊质量标准的可控性，但该方法需要采用薄层色谱法和高效液相色谱结合来检测，操作方法复杂。

3、中药制剂质量均一化一直是阻碍中药走向世界的拦路石，如何合理、科学、高效实现中药均一化是推动中药产业高质量发展的重要课题，中药质量均一化的问题亟待解决。目前，针对血府逐瘀组合物尚无完善的质量控制方法这一问题，亟须针对该产品建立多指标成分含量测定评价方法，从定量的角度反映处方药味、生产工艺对产品质量影响，进而加强生产过程与质量控制。

技术实现思路

1、本发明意在提供一种血府逐瘀组合物的指纹图谱建立方法，以解决现有技术存在的问题：即现有技术中缺乏针对血府逐瘀组合物的指纹图谱评价方法，不能较全面地反映复杂中药成分之间相关性。

2、为达到上述目的，本发明采用如下技术方案：

3、一种血府逐瘀组合物的指纹图谱建立方法，包括以下依次进行的步骤：

4、s1：使用甲醇溶解血府逐瘀组合物，经超声处理和过滤后获得供试品溶液；

5、s2：对所述供试品溶液进行高效液相色谱检测，获得该供试品的色谱图；整合若干供试品的色谱图，生成血府逐瘀组合物的指纹图谱。

6、本发明还提供了一种血府逐瘀组合物的指纹图谱建立方法所获得的血府逐瘀组合物标准指纹图谱。

7、本发明还提供了血府逐瘀组合物标准指纹图谱在含有血府逐瘀组合物的药品质量检测中的应用。

8、进一步，在s2中，所述指纹图谱包括8个指定峰，第1指定峰代表地黄苷d，第2指定峰代表苦杏仁苷，第3指定峰代表芍药苷，第4指定峰代表甘草苷，第5指定峰代表阿魏酸，第6指定峰代表柚皮苷，第7指定峰代表橙皮苷，第8指定峰代表新橙皮苷。

9、优选地，在s2中，所述指纹图谱包括8个在分析过程中依次出现的指定峰，包括：

10、第1指定峰代表地黄苷d，其主要来源于药材原料地黄；

11、第2指定峰代表苦杏仁苷，其主要来源于药材原料桃仁；

12、第3指定峰代表芍药苷，其主要来源于药材原料赤芍；

13、第4指定峰代表甘草苷，其主要来源于药材原料甘草；

14、第5指定峰代表阿魏酸，其主要来源于药材原料当归和川芎；

15、第6指定峰代表柚皮苷，其主要来源于药材原料枳壳；

16、第7指定峰代表橙皮苷，其主要来源于药材原料枳壳；

17、第8指定峰代表新橙皮苷，其主要来源于药材原料枳壳。

18、优选地，在s2中，所述指纹图谱包括8个依次出现的指定峰，第1指定峰代表地黄苷d，其相对保留时间为0.24±10％；第2指定峰代表苦杏仁苷，其相对保留时间为0.52±10％；第3指定峰代表芍药苷，其相对保留时间为0.64±10％；第4指定峰代表甘草苷，其相对保留时间为0.79±10％第5指定峰代表阿魏酸，其相对保留时间为0.82±10％；第6指定峰代表柚皮苷，其相对保留时间为1.00；第7指定峰代表橙皮苷，其相对保留时间为1.04±10％；第8指定峰代表新橙皮苷，其相对保留时间为1.13±10％。

19、更优选地，在s2中，所述指纹图谱包括8个依次出现的指定峰，第1指定峰代表地黄苷d，其相对保留时间为0.24±5％；第2指定峰代表苦杏仁苷，其相对保留时间为0.52±5％；第3指定峰代表芍药苷，其相对保留时间为0.64±5％；第4指定峰代表甘草苷，其相对保留时间为0.79±5％第5指定峰代表阿魏酸，其相对保留时间为0.82±5％；第6指定峰代表柚皮苷，其相对保留时间为1.00；第7指定峰代表橙皮苷，其相对保留时间为1.04±5％；第8指定峰代表新橙皮苷，其相对保留时间为1.13±5％。

20、最优选地，在s2中，所述指纹图谱包括8个依次出现的指定峰，第1指定峰代表地黄苷d，其相对保留时间为0.24±2％；第2指定峰代表苦杏仁苷，其相对保留时间为0.52±2％；第3指定峰代表芍药苷，其相对保留时间为0.64±2％；第4指定峰代表甘草苷，其相对保留时间为0.79±2％第5指定峰代表阿魏酸，其相对保留时间为0.82±2％；第6指定峰代表柚皮苷，其相对保留时间为1.00；第7指定峰代表橙皮苷，其相对保留时间为1.04±2％；第8指定峰代表新橙皮苷，其相对保留时间为1.13±2％。

21、保留时间的检测结果为上述平均相对保留时间的±10％(变化范围在标准值的±10％之内，或者±5％之内，或者±2％之内)，可判定上述色谱峰为对应的指定峰。

22、进一步，在s2中，高效液相色谱检测的条件为：

23、色谱柱：十八烷基键合硅胶色谱柱；

24、流动相：乙腈作为流动相a，0.1％磷酸水溶液作为流动相b；采用梯度洗脱的方式；

25、流速：0.8～1.2ml/min；

26、柱温：25～35℃；

27、检测波长：200～403nm；

28、进样体积：5～20μl。

29、进一步，在s2中，洗脱程序为：

30、0～4min，5％～6％流动相a；

31、4～13min，6％～18％流动相a；

32、13～18min，18％～19％流动相a；

33、18～20min，19％～20％流动相a；

34、20～30min，20％～21％流动相a；

35、30～40min，21％～35％流动相a；

36、40～50min，35％～50％流动相a。

37、进一步，在s2中，色谱柱为gl science c18色谱柱，尺寸：4.6×250mm，粒径：5μm。

38、进一步，在s1中，甲醇的体积百分数为50％～100％；血府逐瘀组合物经研磨后与甲醇混合，血府逐瘀组合物和甲醇的用量比为0.5g：50ml。

39、进一步，在s1中，超声处理的参数条件为：功率100～300w，频率25～100khz，时间20～60分钟；过滤使用的微孔滤膜的孔径为0.45μm。

40、优选地，在s1中，超声处理的参数条件为：功率300w，频率40khz，时间40分钟。

41、进一步，以重量份计，血府逐瘀组合物的原料包括：柴胡25～30份、当归75～90份、地黄75～90份、赤芍50～60份、红花75～90份、桃仁105～120份、枳壳50～60份、甘草25～30份、川芎35～45份、牛膝75～90份、桔梗35～45份。

42、更优选地，以重量份计，血府逐瘀组合物的原料包括：柴胡29.9份、当归89.8份、地黄89.9份、赤芍59.9份、红花89.9份、桃仁119.8份、枳壳59.9份、甘草29.9份、川芎44.9份、牛膝89.9份以及桔梗44.9份。

43、优选地，所述桃仁为炒桃仁、所述枳壳为麸炒枳壳。

44、本方案的原理及有益效果在于：

45、本技术方案建立血府逐瘀组合物的指纹图谱评价方法，较全面地反映复杂中药成分之间相关性，通过反映中药化学成分中某些重要的特征信息，进而控制中药质量确保其质量的均一、稳定，提升了该品种的质量控制水平。针对质量控制指标存在的问题，本技术方案选择有效/活性成分、毒性成分、主药所含指标成分等为含量测定指标，并且考虑含量测定指标与工艺稳定性的相关性，并尽可能建立多成分或多组分的含量测定方法。本方案最终建立本品的指纹图谱，较全面地反映复杂中药成分之间相关性，通过反映中药化学成分中某些重要的特征信息，进而控制中药质量，确保其质量的均一、稳定。