一种检测楮实子样品中香草酸-4-O-β-D-葡萄糖苷含量的方法及其应用与流程

本发明涉及一种检测楮实子样品中香草酸-4-o-β-d-葡萄糖苷含量的方法及其应用，属于药物分析。

背景技术：

1、楮实子为桑科植物构树broussonetiapapyrifera(l.)vent.的干燥成熟果实，秋季果实成熟时采收，性寒，味甘，归肝、肾经，具有补肾清肝，明目，利尿等功效，用于肝肾不足，腰膝酸软，虚劳骨蒸，头晕目昏，目生翳膜，水肿胀满。现代研究表明，楮实子含有脂肪油、氨基酸、色素和多糖等化学成分，具有抗氧化、降血脂、增强免疫、抗肿瘤、保护肝功能等作用(姜倩倩,梁少瑜,李仲秋,等.构树果实——楮实子的资源分布、古今用药、化学成分及药理作用[j].河南科技大学学报(医学版),2018,36(03):236-240.)。

2、现有技术中关于楮实子的质量研究主要有：现行《中国药典》2020年版楮实子药材饮片项下，仅收载了性状、鉴别、检查及浸出物项，无含量测定指标。刘宏伟等测定了楮实子药材的脂肪油得率及水分、灰分、浸出物情况(刘宏伟,黄渊帅,熊峻,等.湖南不同产地野生楮实子质量标准的初步研究[j].世界复合医学,2016,2(02):54-56.)；庞素秋等采用比色法对楮实子药材中总生物碱含量进行了测定(庞素秋,王国权,黄宝康,等.不同产地楮实子生物碱含量比较[j].药学实践杂志,2010,28(03):223-224.)；熊山等采用比色法对楮实子药材中总皂苷含量进行了测定(熊山,陈玉武,叶祖光.楮实子中总皂苷含量测定[j].中国现代中药,2009,11(07):26-27+44.)；迟玉新等采用比色法对楮实子药材中总黄酮含量进行了测定(迟玉新,窦德强.楮实子与构树叶中总黄酮含量测定[j].中国现代中药,2008,10(11):16-17.)；黄宝康等分析了楮实子药材中氨基酸及脂肪酸(黄宝康,秦路平,郑汉臣,等.楮实子的氨基酸及脂肪油成分分析[j].第二军医大学学报,2003(02):213-217+227.)。专利(张志强，石玉喆，蒙芹德，等.一种楮实子配方颗粒的质量控制方法及其应用[p].cn115561378a，2023.01.03.)测定楮实子配方颗粒中的亚油酸含量，亚油酸这一含量测定指标在多种植物中均有分布，专属性不强。

3、现有技术方法对楮实子质量控制，待测成分不够清晰、测定方法繁琐准确性差，且仅是对药材进行控制，亟需一种专属性好、能够适用于药材到制剂全过程的质量控制方法。

技术实现思路

1、发明目的：本发明所要解决的技术问题是提供了一种专属性强的检测楮实子样品中香草酸-4-o-β-d-葡萄糖苷含量的方法及其应用。

2、技术方案：为解决上述技术问题，本发明提供一种检测楮实子样品中香草酸-4-o-β-d-葡萄糖苷含量的方法，包括以下步骤：

3、(1)取楮实子样品粉末，加入提取溶剂15-100ml，密塞，称定重量，提取，再称定重量，用10％-50％甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得供试品溶液；

4、(2)取香草酸-4-o-β-d-葡萄糖苷对照品适量，精密称定，加10％甲醇，即得对照品溶液；

5、(3)将对照品溶液和供试品溶液分别注入超高效液相色谱仪中，比对对照品溶液和供试品溶液的特征图谱；

6、(4)利用香草酸-4-o-β-d-葡萄糖苷的进样量与峰面积的回归方程y＝8434.6543x-5203.9643，r2＝0.99990，计算楮实子样品中香草酸-4-o-β-d-葡萄糖苷的含量。

7、其中，所述楮实子样品为楮实子的药材、标准汤剂、提取物、配方颗粒或者含有楮实子的经典名方的基准样品、制剂中间产品或成品。

8、其中，步骤(1)中所述提取的方式包括超声处理、加热回流或振摇提取。

9、其中，步骤(1)中所述提取的时间为45-90min。

10、其中，步骤(1)中所述提取的时间为15-60min。

11、其中，提取溶剂为醇类或醇类水溶液。

12、优选地，所述提取溶剂为甲醇或甲醇水溶液；

13、优选地，所述甲醇水溶液的浓度以甲醇的体积百分比计小于等于50％。

14、优选地，提取溶剂为10％-50％甲醇。

15、其中，步骤(3)中色谱条件为：流速0.20ml/min～0.30ml/min，柱温25℃～35℃，色谱柱为beh sheild rp18，流动相a为乙腈或甲醇，流动相b为磷酸水溶液、醋酸水溶液、甲酸水溶液或水，洗脱方式为梯度洗脱或等度洗脱。

16、优选地，流动相a为甲醇，流动相b为浓度以磷酸的体积百分比计为0.1％的磷酸水溶液。

17、优选地，流动相a与流动相b的体积比为4︰96至50︰50；流速为0.20-0.30ml/min；柱温为25-35℃；采用紫外检测器、蒸发光散射检测器、示差折光检测器或电雾式检测器。

18、优选地，检测器为紫外检测器，检测波长为200nm～300nm，优选为254nm。

19、其中，所述楮实子样品粉末与10％-50％甲醇的质量体积比为1g:(50～330ml)。

20、本发明还提供一种在楮实子中回收香草酸-4-o-β-d-葡萄糖苷的方法，包括以下步骤：

21、(1)取楮实子样品粉末，加入10％-50％甲醇15-100ml，密塞，称定重量，提取15-60min，再称定重量，用10％-50％甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得供试品溶液；所述提取的方式包括超声处理、加热回流或振摇提取；

22、(2)将供试品溶液注入超高效液相色谱仪中，即可回收香草酸-4-o-β-d-葡萄糖苷。

23、其中，所述楮实子样品为楮实子的药材、标准汤剂、提取物、配方颗粒或者含有楮实子的经典名方的基准样品、制剂中间产品或成品。

24、其中，步骤(2)中色谱条件为：流速0.20ml/min～0.30ml/min，柱温25℃～35℃，色谱柱色谱柱为beh sheild rp18，流动相a为乙腈或甲醇，流动相b为磷酸水溶液、醋酸水溶液、甲酸水溶液或水，洗脱方式为梯度洗脱或等度洗脱，检测波长为254nm。

25、本发明还提供所述方法在楮实子样品质量控制或质量检测中的应用。

26、本发明建立了一种楮实子样品的质量控制方法，具体涉及楮实子中香草酸-4-o-β-d-葡萄糖苷(vanillic acid 4-o-β-d-glucoside)的含量测定方法。

27、香草酸-4-o-β-d-葡萄糖苷为黄酮苷类成分，分子式为c14h18o9，具有较好的抗氧化(yu h,yang g,sato m,et al.antioxidant activities of aqueous extract fromstevia rebaudiana stem waste to inhibit fish oil oxidation and identificationof its phenolic compounds[j].food chemistry,2017,232:379-386.)(chemam y,benayache s,marchioni e,et al.on-line screening,isolation and identificationof antioxidant compounds of helianthemum ruficomum[j].molecules,2017,22(2):239.)、抗炎(jung c j,park s m,lee d g,et al.adenophora stricta root extractalleviates airway inflammation in mice with ovalbumin-induced allergic asthma[j].antioxidants,2023,12(4):922.)等药理活性，与楮实子药理作用相贴近。同时，未见以香草酸-4-o-β-d-葡萄糖苷为含量测定指标在楮实子中质量控制中的研究及应用。

28、有益效果：与现有技术相比，本发明具有如下显著优点：1、本发明通过超高效液相色谱法，并对色谱条件进行合理设置，建立楮实子样品中香草酸-4-o-β-d-葡萄糖苷的含量测定方法，专属性及耐用性良好，可以为楮实子样品的质量检测提供新的分析手段；2、本发明的方法以香草酸-4-o-β-d-葡萄糖苷这一具体成分为指标，而不是以某类成分的总和作为质控指标，更加合理、准确；3、本发明方法适用范围不仅局限于楮实子药材，还拓展到标准汤剂、配方颗粒以及含有楮实子的其它产品的检测；4、本发明的方法操作简单，重现性、稳定性好，回收率可靠，检测成本低，检测效率高、环境污染小。