一种双氯芬酸二乙胺乳胶剂中有关物质的测定方法与流程

本发明涉及化学药物分析，尤其涉及一种双氯芬酸二乙胺乳胶剂中有关物质的测定方法。

背景技术：

1、双氯芬酸二乙胺凝胶(据中国药典记载：乳胶剂就是凝胶剂的一种)是一种新型抗炎镇痛药物，主要用于缓解肌肉、软组织和关节中的轻至中度疼痛，其通过抑制环氧酶活性，从而阻断花生四烯酸转化前列腺素，达到抗炎、镇痛的效果。为了确保双氯芬酸二乙胺乳胶的质量和安全性，对其进行有关物质的检测显得尤为重要。

2、通过查询国内外药典可知，bp药典和进口药品注册标准中均收载了双氯芬酸二乙胺凝胶的质量标准。其中，bp药典使用的是高效液相色谱法(hplc)法检测有关物质，进口药品注册标准使用超高效液相色谱法(uplc)法检测有关物质，相关标准记载如下表1所示：

3、表1相关检测标准记载

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6、发明人对各标准中有关物质的检测方法进行重现后发现：各方法均无法同时满足主峰、降解杂质(杂质a、杂质b、杂质c、双氯芬酸异丙酯、双氯芬酸十二烷基酯)和工艺杂质(杂质d、杂质e、杂质f)的检出及分离，故标准中收载的方法均不适用于检测双氯芬酸二乙胺凝胶中的有关物质。

7、因此，亟需对标准中的有关物质方法进行优化，以确定双氯芬酸二乙胺乳胶剂中的有关物质。

技术实现思路

1、有鉴于此，本发明提出了一种双氯芬酸二乙胺乳胶剂中有关物质的测定方法，通过在bp2024色谱条件上，优化洗脱方式并设置合适的洗脱程序，实现主峰和杂质峰的全洗脱及有效分离，确定了双氯芬酸二乙胺乳胶剂中有关物质的测定方法。

2、本发明提供了一种双氯芬酸二乙胺乳胶剂中有关物质的测定方法，所述方法，包括以下步骤：

3、第一步，制备双氯芬酸二乙胺供试品溶液、对照溶液、灵敏度溶液和系统适用性溶液；

4、第二步，采用高效液相色谱法，其色谱条件包括：色谱柱为十八烷基硅烷键合硅胶色谱柱，以甲醇-磷酸盐缓冲液为流动相a，以甲醇为流动相b，检测波长为260nm，进行梯度洗脱；

5、所述梯度洗脱的过程为：0～35min内，所述流动相a与所述流动相b的体积比为100：0；35～65min内，所述流动相a与所述流动相b的体积比从100：0匀速渐变至8：92；65～80min，所述流动相a与所述流动相b的体积比从8：92匀速渐变至100：0。

6、在以上技术方案的基础上，优选的，一种双氯芬酸二乙胺乳胶剂中有关物质的测定方法，具体包括：

7、(1)制备双氯芬酸二乙胺供试品溶液、对照溶液、灵敏度溶液和系统适用性溶液；

8、(2)采用高效液相色谱法，其色谱条件包括：色谱柱为十八烷基硅烷键合硅胶色谱柱，以甲醇-磷酸盐缓冲液为流动相a，以甲醇为流动相b，检测波长为260nm，进行梯度洗脱；

9、(3)用(2)中色谱条件检测双氯芬酸二乙胺系统适用性溶液，确定杂质a、b、c、双氯芬酸异丙酯(g)、双氯芬酸十二烷基酯(h)、主峰的出峰位置及杂质峰与主峰的分离情况；

10、(4)用(2)中色谱条件检测双氯芬酸二乙胺供试品溶液和对照溶液，根据出峰位置确定供试品溶液中是否含有已知杂质a、b、c、g、h及其他未知杂质，从而确定双氯芬酸钠供试品中各杂质的存在和/或量；

11、(5)用(2)中色谱条件检测双氯芬酸二乙胺灵敏度溶液，以确定能够检测到的最低浓度的双氯芬酸二乙胺及其杂质，用于微量分析。

12、在以上技术方案的基础上，梯度洗脱程序如表2所示：

13、表2梯度洗脱程序表

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16、在本发明中，作为系统适应性要求：系统适用性溶液色谱图中，杂质a、杂质c、双氯芬酸二乙胺、杂质b、杂质g与杂质h依次出峰，双氯芬酸二乙胺峰与杂质c峰之间的分离度应不小于2，理论板数按双氯芬酸二乙胺峰计算应不低于2000。

17、在本发明中，作为灵敏度要求；灵敏度溶液色谱图中，主成分峰高的信噪比应不小于10。

18、本发明的测定方法，通过精密量取供试品溶液与对照溶液，分别注入液相色谱仪，记录色谱图，根据色谱图中的峰面积和出峰位置，确定供试品中各杂质的存在和量。

19、在本发明中，双氯芬酸二乙胺乳胶剂中各种杂质的限度(最大允许量或范围)，包括：

20、(1)杂质a、杂质b、杂质c按校正后的峰面积计算均不得大于对照溶液主峰面积的1.5倍(0.3％)；

21、(2)双氯芬酸异丙酯、双氯芬酸十二烷基酯按校正后的峰面积计算均不得大于对照溶液主峰面积(0.2％)；

22、(3)其他单个杂质的峰面积不得大于对照溶液主峰面积(0.2％)；

23、(4)总杂不得大于1.0％；

24、其中，供试品溶液色谱图中小于灵敏度溶液主峰面积的杂质峰可忽略不计。可参考如下计算公式：

25、单杂(％)＝as×f/(ar×vr)×100公式(ⅰ)；

26、总杂(％)＝0.05％及以上各单杂之和公式(ⅱ)；

27、式(ⅰ)和/或(ⅱ)中，ar：对照溶液中的主峰面积；vr：对照溶液相当于供试品溶液的稀释倍数(ml)；as：供试品溶液中单个杂质的峰面积；f：校正因子。

28、进一步地，所述色谱柱的型号为ymc-pack pro c18，长度为250mm，内径为4.6mm，填充剂的粒径为5μm。

29、进一步地，在所述流动相a中，所述甲醇与所述磷酸盐缓冲液的体积比为66：34。

30、进一步地，所述磷酸盐缓冲液由磷酸、二水合磷酸二氢钠和水按质量-体积比为0.5g：0.8g：1000ml制得。

31、进一步地，所述磷酸盐缓冲液采用磷酸调节ph值至2.5。

32、进一步地，所述流动相的流速为1ml/min。

33、进一步地，所述色谱柱的温度为30℃。

34、进一步地，还包括保护柱，所述保护柱的型号为ymc-pack pro c18保护柱，内径为4mm，长度为10mm，填充剂的粒径为5μm。

35、进一步地，所述填充剂为十八烷基硅烷键合硅胶。

36、进一步地，所述有关物质包括降解杂质和工艺杂质；所述降解杂质包括杂质a、b、c、双氯芬酸异丙酯和双氯芬酸十二烷基酯；所述工艺杂质包括包括杂质d、e、f。

37、本发明提供的双氯芬酸二乙胺乳胶剂中有关物质的测定方法，相对于现有技术具有以下有益效果：

38、(1)本发明提供的测定方法，通过采用高效液相色谱法(hplc)和梯度洗脱方式，显著提高了分离度和检测灵敏度，能够在较宽的时间范围内有效分离主峰和多种降解杂质及工艺杂质。检测波长设定为260nm，增强了对双氯芬酸二乙胺及其杂质的吸收，确保低浓度杂质也能被准确检出。使用十八烷基硅烷键合硅胶色谱柱，提供了更尖锐的峰形和更高的分辨率，保证了分离效果的稳定性和重现性。

39、(2)本发明的测定方法，通过合理的系统适用性溶液和灵敏度溶液设置，确保了方法的可靠性和准确性，同时缩短了分析时间，提高了实验室的工作效率。本发明能够全面覆盖双氯芬酸二乙胺中的主峰、降解杂质(如杂质a、杂质b、杂质c、双氯芬酸异丙酯、双氯芬酸十二烷基酯)和工艺杂质(如杂质d、杂质e、杂质f)，提供更加准确和可靠的检测结果，有力确保了药品的质量和安全性。