一种针对循环肿瘤DNA片段检测的肿瘤早期诊断试剂盒的制作方法

本技术属于检测试剂盒，具体涉及一种针对循环肿瘤dna片段检测的肿瘤早期诊断试剂盒。

背景技术：

1、目前，肿瘤诊断主要依靠影像学、血清蛋白以及活体组织检测。然而，影像学和血清检查在诊断中的准确性和敏感性存在局限性，而活体组织检查因其有创性、存在种植转移风险而受到临床应用的限制。因此，找到一种可靠的方法用来检测早期肿瘤并检测肿瘤复发是至关重要的。近年来，液体活检标本检查技术在癌症的早期筛查诊断方面展现出一定的优势，是指对血液或其他液体进行微创和非侵入式检查，可以得到患者肿瘤的遗传信息。因此，液体活检在早期诊断、预测治疗反应、监测疾病复发、识别靶向治疗的耐药机制等方面具有重要的临床意义。液体活检的肿瘤信息来源包括循环肿瘤dna(ctdna)、循环肿瘤细胞(ctcs)以及来自体液(如血清、血浆、尿液、唾液等)的循环mirnas以及循环外泌体，其中ctdna/cfdna是最常见用于分析的生物标志物。

2、循环游离dna(cfdna)是由细胞释放到血液中的降解的dna分子。这些片段的长度在1它行为时，如恶性肿瘤、外伤、器官移植排异、组织器官衰竭和怀孕等，细胞会释放大量dna进入血液循环，血液中cfdna的水平普遍升高。以诊断和筛查为目从人类血液中分离出的各种类型的cfdna包括循环肿瘤dna、线粒体dna和胎儿dna，在临床研究的不断积累与支撑之下，已广泛用于液体活检、癌症早筛、无创产前筛查(nipt)、用药指导、以及感染性疾病诊断等领域。

3、poct是point ofcare testing的简称，中文名为“即时检测”，指在病人身边进行快速便捷的检测，能减少样品传送流程，缩短报告时间。poct是体外诊断行业中快速增长的一个细分行业。相比于传统科室或实验室诊断，poct保留了“采样—分析—质控—输出”的核心步骤，较大程度降低了诊断时间，对检测空间要求更加灵活，以及检测操作者可以是非专业检验师，甚至是被检测对象本人。更具体来说，poct的技术优越性体现在以下几个方面：1)操作简单，无需专业人。poct对操作人员没有特定的要求，医护人员或是患者能够拿到相应仪器的操作说明书，稍加培训或直接进行使用。2)检验过程环节少，检验结果迅速。过去传统诊断中，部分时间被用于样本运输、标记、录入、分发等环节，而反应与分析时间占比低。相比之下，poct获得检验结果只用十几分钟，而医院急诊报告时间约为30分钟，poct能够更快速做出反应从而为患者赢得救治时间。(如急性心肌梗死的患者，再灌注治疗每延迟30分钟，死亡风险增加7.5％)。3)便携式的仪器和试剂。poct设备常为小型化设备，便于移动，对操作环境无特殊要求。大部分产品为干片式固定试剂，对保存与封装的条件要求较低。4)检验个性化。针对每个患者所患疾病不同，可以通过poct实现有针对性的检验项目，满足病患需求同时减少不必要的浪费。5)应用领域不断拓宽。poct最早仅应用在血糖、血气分析等少数项目，目前已拓宽至更广泛的领域。因此，开发新型方便快捷且智能化的poct试剂盒，有利于居民对肿瘤进行自我检测，将极大的提高我国肿瘤“早筛早治”能力。

技术实现思路

1、针对上述现有技术中存在的技术问题，本实用新型的目的在于设计提供一种针对循环肿瘤dna片段检测的肿瘤早期诊断试剂盒，通过简单加热实现循环肿瘤dna片段扩增，并配合胶体金试纸条和智能化荧光采集和分析装置，实现循环肿瘤dna片段在体外快速检测，具有检测快速、价格低廉、检测时长短、具备智能化等优势。

2、为了实现上述目的，本实用新型采用以下技术方案：

3、一种针对循环肿瘤dna片段检测的肿瘤早期诊断试剂盒，所述试剂盒包含盒体、试纸条和试剂滴加组件机构；

4、所述盒体的前端设有typec充电口，盒体的后端设有试纸条插入口，盒体的上端由左至右依次设有加热启动开关、生物反应室和荧光显色收集装置。

5、所述的一种针对循环肿瘤dna片段检测的肿瘤早期诊断试剂盒，所述typec充电口在盒体内与加热启动开关相连接。

6、所述的一种针对循环肿瘤dna片段检测的肿瘤早期诊断试剂盒，所述生物反应室配套设有反应釜，反应釜的上端扣合有上盖；

7、所述反应釜包含圆柱形小室和盒盖，所述圆柱形小室的侧壁上开设有贯穿孔，所述圆柱形小室与盒盖配合使用。盒盖的作用是保证反应是在密封状态下进行，防止污染。

8、所述的一种针对循环肿瘤dna片段检测的肿瘤早期诊断试剂盒，所述荧光显色收集装置包含led显示屏，和与之相连的荧光采集装置；

9、所述led显示屏与盒体紧密扣合。

10、所述荧光采集装置可以检测试纸条所发荧光，并将荧光转换成数字，显示在led显示屏上。led显示屏显示荧光强度。

11、所述的一种针对循环肿瘤dna片段检测的肿瘤早期诊断试剂盒，所述led显示屏为长方形，led显示屏通过无线网络与手机或电脑相连接。

12、所述的一种针对循环肿瘤dna片段检测的肿瘤早期诊断试剂盒，所述生物反应室为加热室。

13、优选，所述加热室为取电芯片。通过typec充电口供电。type-c为快充诱骗芯片，通过取电芯片定制电压输出，其内置的通讯模块可以与供电端的协议芯片握手通信，获得所需要的电压用于加热。

14、所述的一种针对循环肿瘤dna片段检测的肿瘤早期诊断试剂盒，所述试剂滴加组件机构用于滴加待测样品至反应釜中。

15、所述的一种针对循环肿瘤dna片段检测的肿瘤早期诊断试剂盒，所述试纸条为金纳米颗粒-胶体金反应检测试纸条。

16、所述的一种针对循环肿瘤dna片段检测的肿瘤早期诊断试剂盒，所述试纸条包括样品垫、结合垫、吸收垫、硝酸纤维膜和塑料背衬板；

17、样品垫与结合垫的一部分相重合粘贴在塑料背衬板上；

18、结合垫上分布有金标抗体，结合垫粘贴在塑料背衬板的一侧并与硝酸纤维膜重叠，结合垫与纤维膜检测线位于同一侧；

19、所述塑料背衬板在与结合垫相反的一侧粘贴有有用于维持毛细管力的吸收垫，并与硝酸纤维膜控制线端重叠；

20、所述试纸条的第一条测试线t线为链霉亲和素捕获线，第二条测试线为proteina捕获线。

21、所述的一种针对循环肿瘤dna片段检测的肿瘤早期诊断试剂盒，所述试纸条插入口的宽度与试纸条的宽度一致，用于插入试纸条。

22、所述样品为肿瘤血液或肿瘤组织提取物。

23、与现有技术相比，本实用新型具有以下有益效果：

24、1、本实用新型胶体金纸条检测装置具有气密性优良的、便携、快速等温扩增的特点，循环肿瘤dna扩增和检测的过程中无需进行开盖检测，整个装置始终处于封闭状态，有效避免了循环肿瘤dna扩增、检测、及结果读取等各个检测中的污染，确保了检测结果的特异性及灵敏度，检测时间短，检测成本低，可广泛应用于基层医疗机构、社区、乃至家庭、个人等非正式医疗环境。

25、(2)本实用新型检测装置具有手持式、一体化、集成化的特点，无需进行专业培训，只需通过简单手动操作即可方便快捷的完成整个检测过程，包括等温扩增、稀释混合反应、纸条层析反应及检测结果读取等多个步骤。

26、(3)本实用新型等温扩增胶体金纸条检测装置具有显著的体积与成本优势，通过紧凑优化的结构设计，极大化压缩了装置尺寸，加热方法简单，可采用pcr仪、等温扩增仪器或其他能够提供恒温加热的装置即可完成检测操作，具有体积小，结构简单，成本低，操作简单等优点。

27、(4)本实用新型以一种简单、方便、可靠、安全的模式，在无需依靠专业化检测仪器以及检测人员的情况下，通过简单的手动操作即可实现整个检测过程，并通过人眼对试纸条层析结果进行读取，来实现最终结果的检测判定，因此本装置有利于在野外、社区、家庭等非正式医疗环境和场所应用与推广。