一种中药组合物的指纹图谱的建立方法
【技术领域】
[0001] 本发明属于分析化学领域，具体设及一种中药组合物的指纹图谱的建立方法，所 述中药组合物为咳喘顺丸。
【背景技术】
[0002] 基于中医药理论的中药组合物（中成药），药味组成一般比较繁多；在药物组合物 的制备过程中，不同成分之间还可能相互发生反应，导致药物组合物的成分更加复杂。仅靠 定性或定量检测其中某个或某几个成分，由于信息量有限，难W体现组合物作为整体的化 学特征。随着现代分析技术的发展，指纹图谱已经是当今国际公认的控制中药质量的质控 模式。
[0003] 中药组合物指纹图谱的建立，应W系统的化学成分研究和药理学研究为依托，体 现系统性、特征性和稳定性=个基本原则。才能保证指纹图谱的标准化、规范化、客观化，从 而便于推广和应用。高效液相色谱法（HHX)具有分离效率高，分析速度快，定量精密度高， 检测器种类多，稳定性好等特点。不受样品挥发度和热稳定性的限制，样品中大多数成分均 可在高效液相色谱仪上进行分析检测，是构建指纹图谱的主要方法之一。2010版《中国药 典》收载了中成药品种共计1069个，但是仅收载了高效液相指纹图谱13项，其中提取物14 项，中成药仅6项。可见中成药指纹图谱的建立，绝非易事，需要解决众多的技术问题，花费 大量的劳动。
[0004] 咳喘顺丸收载于2010年版《中国药典》一部第887页，其原料由陈皮、前胡、瓜萎 仁、半夏、紫毙、桑白皮、紫苏子、苦杏仁、款冬花、鱼腥草、巧等和甘草12味中药材组成，主 治疲湿蕴肺引起的咳嗽，喘息等病症。目前对咳喘顺丸的物质基础研究较少，且实验结果都 不能全面的反映咳喘顺丸中的有效化学信息，因此该些研究结果不能很好的用于咳喘顺丸 的质量控制。
【发明内容】
[0005] 针对上述问题，本发明的一个目的在于提供一种中药组合物指纹图谱的建立方 法，其中所述中药组合物为咳喘顺丸。本发明利用HPLC-UV技术，找出具有特征的色谱指纹 特性，体现了苦杏仁巧、澄皮巧、白花前胡甲素、白花前胡己素为指标的主要特征，从而可W 用该些指标成分来检测咳喘顺丸中苦杏仁、陈皮、前胡药材的投料情况，并且提供了比常规 质量标准更深层次的质量评价依据。
[0006] 为了实现上述发明目的，本发明采用了如下的技术方案：
[0007] 一种中药组合物的指纹图谱建立方法，所述中药组合物的原料组成为；陈皮、前 胡、瓜萎仁、半夏、紫毙、桑白皮、紫苏子、苦杏仁、款冬花、鱼腥草、巧等和甘草，通过本领域 常用的方法，与药学上可W接受的辅料，制备成临床上可W接受的制剂；所述方法包括采用 高效液相色谱法检测所述中药组合物中各类化合物的保留时间，其中所述高效液相色谱的 条件如下：
[000引色谱柱w十八烧基娃烧键合娃胶为固定相；
[0009] 流动相为体积比为5:95?95:5的己膳和重量百分浓度0. 1 %的磯酸水溶液组成 的梯度洗脱系统，流速为0. 5?1. 5mL/min，优选为Iml/min
[0010] 柱温为25?40°C，优选为30°C ;
[0011] 紫外检测波长为225nm。
[0012] 优选的，所述方法的流动相梯度洗脱条件为：
[0013] 0?50min，己膳的体积百分比为5% - 30%，所述0. 1 %磯酸水溶液的体积百分比 为 95%- 70% ;
[0014] 50?120min，己膳的体积百分比为30% - 95%，所述0. 1 %磯酸水溶液的体积百 分比为70% - 5%。
[0015] 优选的，所述方法包括通过W下方法制备供试品溶液；取所述中药组合物3g，粉 碎，精密称定，置于50ml的锥形瓶中，精密加25ml甲醇，超声30min后，放冷至室温，再称定 重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。
[0016] 作为一个优选的实施方式，本发明提供一种所述中药组合物的指纹图谱建立方 法，所述方法具体的操作步骤包括：
[0017] 1)供试品溶液的制备；取咳喘顺丸3g，粉碎，精密称定，置于50ml的锥形瓶中，精 密加25ml甲醇，超声30min后，放冷至室温，既得；
[0018] 2)测定；精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10 y 1，注入高效液相色谱仪，根据 W下色谱条件进行测定，得到指纹图谱：
[0019] 色谱柱；Agilent SB-C18, 250X4. 6mm，固定相平均粒径 Sum;
[0020] 流动相：体积比为5:95?95:5的己膳和体积百分浓度0. 1 %的磯酸水溶液，按照 如下程序进行梯度洗脱：
[0021] 0?50min，己膳的体积百分比为5% - 30%，所述0. 1 %磯酸水溶液的体积百分比 为 95%- 70% ;
[002引 50?120min，己膳的体积百分比为30% - 95%，所述0. 1 %磯酸水溶液的体积百 分比为70% - 5% ;
[002引 流速；1. 0血/min ;
[0024]柱温；30°C ;
[002引紫外检测波长；225皿。
[0026] 优选的，按照上述方法建立的指纹图谱，特征峰包括澄皮巧吸收峰，并W澄皮巧吸 收峰为参照。
[0027] 更优选的，按照上述方法建立的指纹图谱，特征峰还包括苦杏仁巧吸收峰、白花前 胡甲素吸收峰或白花前胡己素吸收峰中的一个或多个，相对保留时间分别为：
[002引苦杏仁巧吸收峰；0. 436 + 0. 159% ;白花前胡甲素吸收峰；1. 917 + 0. 027% ;白花 前胡己素吸收峰；2. 143 + 0. 026%。
[0029] 优选的，本发明所述的中药组合物，原料由如下重量份的药材组成；紫苏子120重 量份，瓜萎仁180重量份，巧等150重量份，鱼腥草300重量份，苦杏仁90重量份，制半夏100 重量份，款冬花120重量份，桑白皮150重量份，前胡120重量份，紫毙120重量份，陈皮50 重量份，甘草100重量份。
[0030] 优选的，所述中药组合物为丸剂。
[0031] 更优选的，所述中药组合物为咳喘顺丸，通过如下方法制备：
[003引 1)准备如下重量份的药材；紫苏子120重量份，瓜萎仁180重量份，巧等150重量 份，鱼腥草300重量份，苦杏仁90重量份，制半夏100重量份，款冬花120重量份，桑白皮 150重量份，前胡120重量份，紫毙120重量份，陈皮50重量份，甘草100重量份；
[0033] 2) W上十二味，紫苏子、前胡、半夏、巧等、陈皮、苦杏仁、款冬花粉碎成粗粉，其余 瓜萎仁等五味加水煎煮二次，滤过，滤液合并，浓缩成稠膏。加入上述粗粉，干燥，粉碎成细 粉，混匀。每100重量份粉末加炼蜜30?40重量份与水适量，泛丸。干燥，用活性炭包衣， 干燥，即得。
[0034] 上述丸剂按照本发明所述方法建立的指纹图谱，包括22个特征峰，W澄皮巧吸 收峰为参照，所述特征峰的相对保留时间分别为：
[0035] 峰 1 ;0. 234 + 0. 471 % ;峰 2 ;0. 395 + 0. 244 % ;峰 3 ;0. 415 + 0. 265 % ;峰 4 ; 0. 436 + 0. 159% ;峰 5 ;0. 603 + 0. 252% ;峰 6 ;0. 802 + 0. 104% ;峰 7 ;0. 916 + 0. 058% ;峰 8 ;0. 936 + 0. 110%;峰 9 ;1. 000 + 0. 000%;峰 10 ;1. 051 + 0. 068%;峰 11 ;1. 076 + 0. 094%; 峰 12:1. 223 + 0. 076 %;峰 13:1. 250 + 0. 042 %;峰 14:1. 480 + 0. 038 %;峰 15; 1. 860 + 0. 067% ;峰 16 ;1. 887 + 0. 027% ;峰 17 ;1. 900 + 0. 027% ;峰 18 ;1. 917 + 0. 027% ; 峰 19:1.966 + 0.134 %;峰 20:2.