一种食品中转基因成分的检测方法和装置的制造方法
【技术领域】
[0001]本发明涉及一种食品中转基因成分的检测方法和装置。
【背景技术】
[0002]通过基因工程技术将一种或几种外源性基因转移到某种特定的生物体中，并使其有效地表达出相应的产物(多肽或蛋白质)，此过程叫转基因。以转基因生物为原料加工生产的食品就是转基因食品。根据转基因食品来源的不同可分为植物性转基因食品，动物性转基因食品和微生物性转基因食品。转基因食品有较多的优点:可增加作物产量；可以降低生产成本；可增强作物抗虫害、抗病毒等的能力；提高农产品耐贮性。转基因生物的安全评价是转基因生物及其产品市场化和商品化的前提，在安全评价中转基因成分的检测是一项重要内容，建立转基因生物快速、简便、准确的检测方法为安全评价和管理奠定基础。植物性转基因食品的检测主要采用以下两条技术路线，一是应用PCR、Southern等技术检测插入的外源基因，二是使用Elisajestern等检测转基因表达的蛋白。蛋白质水平的检测，主要是基于抗原和抗体相互作用的免疫学方法，针对转基因植物及其产品中外源目的基因表达的特异性蛋白进行定性和定量检测，其结果相对更加精准，可靠性也更好，但是Elisa和Western等目前的检测蛋白的手段都比较繁琐，出结果也较慢。尤其是在海关等进出口的部位，转基因成分的检测工作非常繁琐且效率较低。
【发明内容】
[0003]本发明的目的之一是提供一种食品中转基因成分的检测方法，在蛋白质水平上快速检测食品中的转基因成分；
[0004]本发明的另一目的是提供一种食品中转基因成分的检测装置，该装置能够快速方便地结合特异性地蛋白，并且使用简单，效率高。
[0005]本发明提供的技术方案为:
[0006]一种食品中转基因成分的检测方法，包括:
[0007]步骤一、提取原材料的总蛋白；
[0008]步骤二、将步骤一得到的总蛋白质注射到一检测装置的加样孔，使总蛋白质通过所述检测装置，该检测装置包括加样装置、多根中空纤维聚丙烯膜、和第一多孔板体，所述中空纤维聚丙烯膜上附着有与所述总蛋白中的转基因蛋白特异性结合的第一抗体，所述加样装置包括第二多孔板体和设置于所述第二多孔板体上并与其形成一容置空间的圆锥体，所述圆锥体的直径由下到上逐渐减小且其自由端形成所述加样孔，所述多根中空纤维聚丙烯膜的一端固定在所述第二多孔板体且与所述第二多孔板体上的孔洞连通，所述多根中空纤维聚丙烯膜的另一端固定在所述第一多孔板体且与所述第一多孔板体上的孔洞连通，当所述总蛋白通过所述检测装置时，封闭所述第一多孔板体上的孔洞，以使总蛋白的流动仅发生在所述多根中空纤维聚丙烯膜的一端和所述中空纤维聚丙烯膜的膜孔之间，使该转基因蛋白质与所述第一抗体结合进而附着到所述中空纤维聚丙烯膜上；之后进行步骤三；
[0009]步骤三，打开所述第一多孔板体上的孔洞，洗涤所述中空纤维聚丙烯膜的腔中的残渣；之后进行步骤四；
[0010]步骤四，再次封闭所述第一多孔板体上的孔洞，将与所述转基因蛋白质特异性结合的且带有标记的第二抗体注射到所述检测装置的加样孔，使第二抗体通过所述检测装置；之后进行步骤五；
[0011]步骤五，再次打开所述第一多孔板体上的孔洞，洗涤所述中空纤维聚丙烯膜的腔中的残渣；之后进行步骤六；和
[0012]步骤六，检测所述中空纤维聚丙烯膜上是否存在所述第二抗体的标记，若存在所述标记，则认为该总蛋白中存在该转基因蛋白，并判断该原材料中存在转基因成分。
[0013]优选的是，所述食品中转基因成分的检测方法中，所述步骤一中提取原材料的总蛋白的具体过程包括:
[0014](1.1)将原材料置于一密封袋中，在液氮中速冻30s后，置于研钵中用液氮研磨成粉，之后向所述密封袋中按照体积质量比6: I向原材料加入分离缓冲液，于O?4°C充分混匀；
[0015](1.2)将步骤(1.1)中得到的混合物吸入到离心管中，于温度4°C，12000rpm离心1min后，弃上清，之后按照与原材料的体积质量比为1:1加入裂解液重悬沉淀，静置1min ；以及，
[0016](1.3)将步骤(1.2)中的混合物于温度4°C，12000rpm离心20min，取上清即得到所述总蛋白。
[0017]优选的是，所述食品中转基因成分的检测方法中，所述步骤(1.1)中，所述密封袋的形状与所述研钵的内壁贴合，所述密封袋包括从外到内彼此连接的外层和内层，所述外层和所述内层之间设置有若干个玻璃珠，所述密封袋由聚砜材料制成。
[0018]优选的是，所述食品中转基因成分的检测方法中，通过使用密封膜封闭和打开所述第一多孔板体上的孔洞。
[0019]优选的是，所述食品中转基因成分的检测方法中，其中所述标记为辣根过氧化物酶，所述步骤六中，利用DAB检测所述中空纤维聚丙烯膜上是否存在所述第二抗体的标记，若将DAB加入到所述中空纤维聚丙烯膜上时产生棕色沉淀，则判断所述中空纤维聚丙烯膜上存在所述标记。
[0020]优选的是，所述食品中转基因成分的检测方法中，所述步骤二中，将步骤一得到的总蛋白质吸取到一注射器中，之后通过将所述注射器插入到所述加样孔中从而将该总蛋白注射到该检测装置中。
[0021]优选的是，所述食品中转基因成分的检测方法中，所述原材料包括玉米、水稻、大豆和小麦。
[0022]一种食品中转基因成分的检测装置，该检测装置包括加样装置、多根中空纤维聚丙烯膜、和第一多孔板体，所述中空纤维聚丙烯膜上附着有与所述总蛋白中的转基因蛋白质特异性结合的第一抗体，所述加样装置包括第二多孔板体和设置于所述第二多孔板体上并与其形成一容置空间的圆锥体，所述圆锥体的直径由下到上逐渐减小且其自由端形成加样孔，所述多根中空纤维聚丙烯膜的一端固定在所述第二多孔板体且与所述第二多孔板体上的孔洞连通，所述多根中空纤维聚丙烯膜的另一端固定在所述第一多孔板体且与所述第一多孔板体上的孔洞连通，当所述总蛋白通过所述检测装置时，封闭所述第一多孔板体上的孔洞，以使总蛋白的流动仅发生在所述多根中空纤维聚丙烯膜的一端和所述中空纤维聚丙烯膜的膜孔之间，使该转基因蛋白质与所述第一抗体结合并附着到所述中空纤维聚丙烯膜上。
[0023]本发明的有益效果:本发明提供的检测装置中，将转基因蛋白质的第一抗体附着在中空纤维聚丙烯膜上，从而通过使待检测原材料的总蛋白流过该检测装置来检测原材料中是否存在转基因蛋白质，并且通过注射器将蛋白质液体加入到本发明的检测装置中，易于操作，本发明的装置能够有效快速地检测是否存在转基因蛋白。依照本发明的方法能快速检测转基因蛋白。在蛋白质提取中，将原材料装入一密封袋中，所述密封袋的形状与所述研钵的内壁贴合，这样，在研钵中研磨时密封袋不会发生移动，所述密封袋包括从外到内彼此连接的外层和内层，所述外层和所述内层之间设置有若干个玻璃珠。这样，在研磨时，石杵与玻璃珠接触，使得原材料在密封袋中被研磨的次数和面积都大大增加，同时所述密封袋由聚砜材料制成，耐磨，耐低温，不会损坏。而且，使用分离缓冲液将研磨成粉的原材料重悬后，很容易从密封袋中全部吸取出，且可在低温环境下操作，避免了普通研钵研磨过程中，由于液氮快速蒸发，而不得不快速从研钵中取出原材料的粉末。有时，由于取出不及时，造成了原材料的浪费，也造成了时间及人力物力的浪费。本发明的方法避免了此种情况。本发明的方法对于转基因蛋白的检测快速、准确，效率高。
【附图说明】
[0024]图1为本发明所述的检测装置的第一多孔板体的孔洞封闭时的结构示意图；
[0025]图2为本发明所述的检测装置的第一多孔板体的孔洞打开时的结构示意图。
【具体实施方式】
[0026]下面结合附图对本发明做进一步的详细说明，以令本领域技术人员参照说明书文字能够据以实施。
[0027]细胞核分离缓冲液:0.25M 蔗糖，18mM PIPES (ρΗ6.8)，5mM MgCl2,60mM KCl, 15mMNaCiamM CaCl2,1.0%的Triton X-100, ImM PMSF(蛋白酶抑制剂现用现加)。新鲜配置并于4°C保存。
[0028]细胞核裂解缓冲液:50mMHEPES (ρΗ7.5)，150mM NaCl，ImM EDTA, 1.0% SDS, 0.1 %胆氧胆酸钠，1.1 % 的 TritonX-100,1 μ g/mLpestatinA 和 I μ g/mL aprotinin (蛋白酶抑制剂现用现加)。新鲜配置并于4°C保存。
[0029]TBST 缓冲液:12.1HgTris 碱，调 pH 至 7.5，16.332gNaCl，lMlTween-20，加水至IL0
[0030]DAB辣根过氧化物酶显色试剂盒购买自碧云天，产品编号为P0202。
[0031]本发明提供一种食品中转基因成分的检测方法，该方法检测的样品为液体，包括:
[0032]步骤一、提取原材料的总蛋白，提取原材料的总蛋白的具体过程包括:
[0033](1.1)将原材料置于一密封袋中，在液氮中速冻30s后，置于研钵中用液氮研磨成粉，之后向所述密封袋中按照体积质量比6: I向原材料加入分离缓冲液(如需要提取细胞质蛋白质，则加入普通的分离缓冲液，若需要提取细胞核蛋白质，则使用细胞核分离缓冲液)，本实施例中，此处加入的如上所述的细胞核分离缓冲液，再于O?4°C充分混匀；所述密封袋的形状与所述研钵的内壁贴合，所述密封袋包括从外到内彼此连接的外层和内层，所述外层和所述内层之间设置有若干个玻璃珠，所述密封袋由聚砜材料制成。
[0034](1.2)将步骤(1.1)中得到的混合物吸入到离心管中，于温度4°C，12000rpm离心1min后，弃上清，之后按照与原材料的体积质量比为1