）-溶剂B(乙腈)，
[0047]梯度洗脱（0 ?4min，5% - 10%B，4 ?8min，10% - 15%B，8 ?13min，15% - 22%B，13 ? 15min，22% - 30%B，15 ?18min，30%B，18 ?20min，30% - 80%B，20 ?23min，80% - 5%B;梯度 洗脱过程只说明了溶剂B的含量，其余部分为溶剂A);柱温：30°C;
[0048]流速：0?2mL?mirf1;
[0049]进样量：3iiL;
[0050]检测波长：258nm;
[0051] ELSD空气流速：2. 5L?mirT1 ;
[0052] 漂移管温度：105°C，
[0053] 增益值：1。
[0054] 与本发明相关的相关术语解释
[0055]UPLC-PDA-ELSD:超高效液相多波长可见紫外和蒸发光检测法。
[0056]消渴清制剂，包括消渴清颗粒，消渴清片剂，消渴清胶囊剂，消渴清滴丸剂，消渴清 栓剂，消渴清口服液剂，消渴清注射剂。可以根据已知专利中的方法制备。新芒果苷、芒果 苷、知母皂苷BII、巴马汀和小檗碱均为已知药物成分，可以从市场上购买得到。
[0057] 本发明可以用于检测药物制剂中的上述五种成分及其含量，因此本发明也适用于 同时含有上述五种成分的其他药物制剂。
[0058] 本发明的优选方法是经过实验筛选获得的，筛选结果如下：
[0059] 系统适应性试验
[0060] 取供试品（批号130301)溶液、对照品溶液（0. 50mL对照品储备液加75%甲醇定 容至2mL)及阴性对照溶液，按照实施例1中色谱方法检测，记录色谱图比较紫外及蒸发光 检测谱图确定供试品紫外色谱图中1号峰为新芒果苷、2号峰为芒果苷、4号峰为巴马汀、 5号峰为小檗碱，ELSD色谱图中3号峰为知母皂苷BII。此系统条件2号峰理论塔板数 彡120000。（文中标示1 :新芒果苷2芒果苷；3知母皂苷BII;4?巴马汀；5.小檗碱）
【主权项】
1. 一种消渴清制剂的检测方法，包括以下步骤： 供试品溶液制备： 取消渴清制剂，加入提取溶剂甲醇或乙醇适量，超声溶解，再加入溶剂调整溶液浓度， 微孔滤膜滤过，取滤液，既得， 对照品储备液的制备： 取新芒果苷、芒果苷、知母皂苷BII、巴马汀和小檗碱对照品，加甲醇溶解，得到对照品 储备液， 含量测定： 将上述供试品溶液和对照品储备液分别注入UPLC-PDA-ELSD色谱仪，得到色谱图，根 据色谱图，用峰面积法计算供试品溶液中新芒果苷、芒果苷、知母皂苷BII、巴马汀和小檗碱 的含量，并得到消渴清制剂中这些成分的含量， 其中，所述UPLC-PDA-ELSD色谱仪，其色谱条件如下： 色谱柱：UPLC C18或T3柱； 流动相：选自：溶剂A醋酸盐缓冲溶液其中含0. 3-0. 5%乙酸及0. 05-0. 1%三乙胺-溶 剂B乙腈；溶剂A0. 1%甲酸水溶液-溶剂B乙腈；溶剂A0. 1%醋酸水溶液-溶剂B乙腈， 中的一种； 采用梯度洗脱进行洗脱，所述梯度洗脱：选自以下四个不同的洗脱方案中的一种： ① 0 ?4min，5% - 10%B，4 ?lOmin，10% - 15%B，10 ?13min，15% - 22%B，13 ?15min， 22% - 30%B, 15 ?18min, 30%B, 18 ?20min, 30% - 80%B, 20 ?23min, 80% - 5%B ; ② 0 ?4min,5%B,4 ?5min,5%_10%B,5 ?8min,10%B,8 ?10min,10_15%B,10 ? llmin,15-12%B,11 ?13min,12% - 22%B,13 ?15min,22% - 30%B,15 ?18min,30%B,18 ? 20min,30% - 80%B,20 ?23min,80% - 5%B ; ③ 0 ?4min,5%B,4 ?5min,5%_10%B,5 ?8min,10%B,8 ?10min,10_15%B,10 ? llmin，15-12%B，11 ?13min，12% - 20%B，13 ?14min，20% - 25%B，14 ?18min，25 - 30%B， 20 ?23min,80%_ 5%B ; ④ 0 ?4min,5%B,4 ?5min,5%_10%B,5 ?8min,10%B,8 ?10min,10_20%B,10 ? 13min, 20%B, 13 ?14min, 20% - 25%B, 14 ?18min, 25 - 30%B, 20 ?22min, 80% - 5%B ; 柱温：25-35 °C 流速：0? 15-0. 25ml/min ELSD 空气流速：2. 0-3. OL ? mirT1 ; 漂移管温度：100-1 l〇°C ; 进样量为2-4iiL， 紫外检测波长：240-340nm。
2. 根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述供试品溶液制备方法如下： 取消渴清制剂l_7g，用50-80%乙醇或25-80%甲醇超声提取，超声时间为20-40min。
3. 根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述供试品溶液制备方法如下： 提取溶剂为75%的乙醇，或70-80%的甲醇。
4. 根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述供试品溶液制备方法如下： 取消渴清制剂6g，精密称定，置25ml量瓶中，加75%甲醇适量，功率500w超声30min， 放置至室温，加75%甲醇定容至刻度，0. 22 y m微孔滤膜滤过，取续滤液，既得。
5. 根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述对照品储备液的制备方法如下： 取新芒果苷、芒果苷、知母皂苷BII、巴马汀和小檗碱对照品，加70-80%的甲醇，溶解， 得到对照品储备液。
6. 根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述对照品储备液的制备方法如下： 取新芒果苷、芒果苷、知母皂苷BII、巴马汀和小檗碱对照品，加75%的甲醇，溶解，得到 对照品储备液。
7. 根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述对照品储备液的制备方法如下： 取新芒果苷、芒果苷、知母皂苷BII、巴马汀和小檗碱对照品适量，精密称定，加75%甲 醇溶解，得到质量浓度分别为〇. 244、0. 784、0. 772、0. 070和0. 224ii g ? y L-1的对照品储备 液。
8. 根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述色谱条件如下： 色谱柱：Waters Acquity UPLC HSS C18 ; 流动相：溶剂A为醋酸盐缓冲溶液其中含0. 5%乙酸及0. 1%三乙胺-溶剂B为乙腈， 梯度洗脱条件为： 0 ?4min, 5% - 10%B, 4 ?8min, 10% - 15%B, 8 ?13min, 15% - 22%B, 13 ?15min, 22% -30%B，15 ?18min，30%B，18 ?20min，30% - 80%B，20 ?23min，80% - 5%B ;梯度洗脱过程只说 明了溶剂B的含量，其余部分为溶剂A。
9. 根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述色谱条件如下： 柱温：30°C ; 流速：〇? 2mL ? mirT1 ; 进样量：3iiL ; 检测波长：258nm ; ELSD 空气流速：2. 5L ? mirT1 ; 漂移管温度：105°C， 增益值：1。
10. 如权利要求1所述的消渴清制剂为消渴清颗粒。
【专利摘要】本发明涉及一种消渴清颗粒的含量检测方法，所述方法包括以下步骤：供试品溶液制备：取消渴清制剂，加入提取溶剂甲醇或乙醇适量，超声溶解，再加入溶剂调整溶液浓度，微孔滤膜滤过，取滤液，既得；对照品储备液的制备：取新芒果苷、芒果苷、知母皂苷BII、巴马汀和小檗碱对照品，加甲醇溶解，得到对照品储备液；含量测定：将上述供试品溶液和对照品储备液分别注入UPLC-PDA-ELSD色谱仪，得到色谱图，根据色谱图，用峰面积法计算供试品溶液中新芒果苷、芒果苷、知母皂苷BII、巴马汀和小檗碱的含量。
【IPC分类】G01N30-06, G01N30-88
【公开号】CN104614475
【申请号】CN201310538597
【发明人】佟玲, 周水平, 孙鹤, 李东翔, 王露黔, 李晓稳
【申请人】天士力制药集团股份有限公司
【公开日】2015年5月13日
【申请日】2013年11月1日