粒子凝集测定用胶乳粒子的制作方法
【技术领域】
[0001]本发明涉及一种粒子凝集测定用胶乳粒子、和使用了该粒子的粒子凝集测定试剂，所述粒子凝集测定用胶乳粒子能够高度抑制非特异性反应，并且能够进行高灵敏度测定。
【背景技术】
[0002]作为在临床检验领域中对被检体中的微量物质进行定量的方法，广泛进行着利用了抗原抗体反应的免疫测定法。其中，使用了担载有抗体等的胶乳粒子(以下有时称作敏化胶乳粒子)的胶乳免疫比浊法简便且测定时间短，因此被检验室等广泛使用。基于胶乳免疫比浊法而进行的被检体中的抗原或抗体的定量，通过对与免疫复合体形成相伴的敏化胶乳粒子的凝集所致的吸光度变化进行光学检测来进行。该吸光度的变化基于敏化胶乳粒子的凝集所致的表观的粒径变化。
[0003]一直以来，如专利文献I所记，胶乳免疫比浊法中，由于与检测对象物质特异性地进行反应的抗原或抗体的固定化(敏化)容易实施、比较廉价、并且聚合反应也容易控制，因此，一直使用的是以聚苯乙烯为主成分的聚苯乙烯系胶乳粒子。但是，聚苯乙烯系胶乳粒子虽然具有能够物理性地吸附(敏化)抗原、抗体的优点，但另一方面，由于也吸附被检体中的非检测对象蛋白质等，因此有时引起不基于抗原抗体反应这种特异性反应的敏化胶乳粒子的凝集反应、所谓的非特异性反应，该非特异性反应的抑制一直以来都是问题。
[0004]专利文献I中，为了抑制非特异性反应，尝试了利用牛血清白蛋白(BSA)等将对抗原、抗体进行了敏化后的胶乳粒子封闭，但大多无法取得充分的效果，给出了高背景值，因此，在制作能够进行高灵敏度测定的试剂的方面存在重大课题。
[0005]专利文献2中，使用苯乙烯、下述通式所示的化合物、苯乙烯磺酸的盐和水溶性自由基聚合引发剂并在水中使它们进行共聚，制成聚合物粒子，并制作了诊断剂用载体粒子。认为由此可抑制非特异性反应，但是按照以高浓度含有负责抑制非特异性反应的下述通式的化合物的方式制作的聚合物粒子，难以使抗原、抗体物理吸附于粒子表面，无法实现作为诊断剂用载体的目的。另外，专利文献2中没有示出在制作载体粒子时使用苯乙烯、下述通式所示的化合物、苯乙烯磺酸的盐和水溶性自由基聚合引发剂以外的化合物。
[0006]CH2 = CR 3-COO (CH2CH2O) x (CH (CH3) CH2O) y (CH2CH2O) ZR4
[0007](式中，R3表示H或CH3，R4表示H或CH 3，x、y和z分别为O或100以下的整数，X、Y、z 满足 I < x+y+z ^ 100)
[0008]专利文献3和专利文献4中公开了一种免疫学的测定用试剂，该免疫学的测定用试剂使用以下述通式所示的化合物为主成分单体而构成的聚合物类作为凝集促进剂。记载了:此时，聚合物虽然可以为共聚物，但下述通式的构成单元优选在聚合物中含有20%以上，另外，作为共聚物中的下述通式以外的构成单元，可以使用苯乙烯衍生物。但是，共聚物以链状聚合物的形式在反应液中以游离状态存在，完全没有示出以胶乳粒子的形态加以使用的情况。另外，专利文献4中记载了，在反应液中添加了聚乙二醇等凝集促进剂的情况下，由于盐析而产生非特异性浑浊，空白值上升，但在使用由下述通式所示的化合物作为主成分单体而构成的聚合物类作为凝集促进剂的情况下，不易产生盐析所致的非特异性浑浊。但是，专利文献4中完全没有示出这些聚合物类能够抑制非特异性地引起凝集反应的偏离被检体等的过剩凝集。
[0009]CH2 = CR 6-C0-X-R5-0 (PO2) OR4-N- (R1) (R2) (R3)
[0010](式中，&至R3分别独立地表示氢原子或可以具有羟基的烷基，R4表示亚烷基，R5表示可以具有取代基并且链中可以具有氧原子的亚烷基，r6表示氢原子或甲基，X表示氧原子或-NH-基)
[0011]现有技术文献
[0012]专利文献
[0013]专利文献1:专利第3708942号公报
[0014]专利文献2:日本特公昭58-34486号公报
[0015]专利文献3:日本特开2005-106609号公报
[0016]专利文献4:日本特开2002-365296号公报
【发明内容】
[0017]发明要解决的课题
[0018]本发明是为了解决上述现有的胶乳免疫比浊法中的问题而完成的发明，本发明的目的在于，提供一种粒子凝集测定用胶乳粒子、和使用了该粒子的粒子凝集测定试剂，所述粒子凝集测定用胶乳粒子能够高度抑制非特异性反应，并且能够进行高灵敏度测定，且能够简便地制作出诊断剂。
[0019]用于解决课题的方法
[0020]本发明人等为了解决上述课题而进行了深入研宄，结果发现，通过在胶乳粒子聚合时使其组成成为特定的组成，从而能够制作出本发明的粒子凝集测定用胶乳粒子，至此完成了本发明。即，本发明如下所述。
[0021][I] 一种粒子凝集测定用胶乳粒子，其特征在于，作为成分，含有具有苯基的聚合性单体、具有苯基和磺酸盐的聚合性单体、和具有式(I)的聚合性单体，具有式(I)的聚合性单体在粒子表面所占的密度(官能团密度)为0.003?0.05 ymol/m2。
[0022]CH2= CR !-COOCH2CH2O (PO2) OCH2CH2-N (CH3) 3...(I)
[0023](式中，R1表示氢原子或甲基)
[0024][2]如上述[I]所述的粒子凝集测定用胶乳粒子，其中，上述具有苯基的聚合性单体为选自苯乙烯、邻甲基苯乙烯、对甲基苯乙烯、对氯苯乙烯、4-乙烯基苯甲酸中的至少I种。
[0025][3]如上述[I]或[2]所述的粒子凝集测定用胶乳粒子，其中，上述具有苯基和磺酸盐的聚合性单体为选自苯乙烯磺酸盐、二乙烯基苯磺酸盐、邻甲基苯乙烯磺酸盐、对甲基苯乙烯磺酸盐中的至少I种。
[0026][4]如上述[I]所述的粒子凝集测定用胶乳粒子，其特征在于，上述具有苯基的聚合性单体为苯乙烯，具有苯基和磺酸盐的聚合性单体为苯乙烯磺酸钠。
[0027][5]如上述[I]?[4]中任一项所述的粒子凝集测定用胶乳粒子，其特征在于，通过物理吸附来担载抗原或抗体。
[0028][6] 一种粒子凝集测定试剂，其是使用了上述[I]?[5]中任一项所述的粒子凝集测定用胶乳粒子的粒子凝集测定试剂。
[0029]发明效果
[0030]通过使用本发明的粒子凝集测定用胶乳粒子和粒子凝集测定试剂，从而能够抑制蛋白质等来源于生物体的物质、检验试剂中特定的构成成分干预免疫反应，抑制目标特异性反应(例如抗原抗体反应)以外的不适于测定目的的反应(例如由偏离被检体所引起的过剩凝集反应)，因此可以制造出能够以比以往更高灵敏度地仅测定目标特异性凝集反应的诊断剂。另外，本发明的胶乳粒子通过一步聚合反应来制作，并且设计为抗原、抗体在胶乳粒子上的敏化通过物理吸附来进行。可见，能够以非常简便的工序得到高灵敏度的粒子凝集测定用胶乳粒子。
【附图说明】
[0031]图1为使用使抗D二聚体抗体敏化后的实施例和比较例的粒子凝集测定用胶乳粒子来测定D 二聚体标准抗原而得的标准曲线。
[0032]图2为使用使抗D二聚体抗体敏化后的实施例和比较例的粒子凝集测定用胶乳粒子来测定D 二聚体偏离被检体I和D 二聚体偏离被检体2，并基于图1的标准曲线进行浓度换算而得的图表。
【具体实施方式】
[0033]本发明提供一种粒子凝集测定用胶乳粒子，其含有具有苯基的聚合性单体、具有苯基和磺酸盐的聚合性单体、和式(I)所示的单体(以下称为“MPC单体”)作为单体成分，且MPC单体在粒子表面所占的密度(官能团密度)为0.003?0.05 ymol/m2。
[0034]以下，进一步详细说明本发明。作为本发明中使用的具有苯基的聚合性单体，没有特别限制，可举出例如苯乙烯、邻甲基苯乙烯、对甲基苯乙烯、对氯苯乙烯、4-乙烯基苯甲酸等。它们可以单独使用，也可以混合使用2种以上。其中，优选使用苯乙烯。
[0035]作为具有苯基和磺酸盐的聚合性单体，只要是能够使聚合后的粒子表面含有磺酸基的单体，则没有特别限制，可举出例如苯乙烯磺酸盐、二乙烯基苯磺酸盐、邻甲基苯乙烯磺酸盐、对甲基苯乙烯磺酸盐等。另外，作为这种情况下的盐，也没有特别限制，可举出钠盐、钾盐、锂盐、铵盐等。它们可以单独使用，也可以并用2种以上。其中，优选使用苯乙烯磺酸盐，进一步优选使用苯乙稀磺酸钠。
[0036]MPC单体为下述通式(I)所示的单体。
[0037]CH2= CR !-COOCH2CH2O (PO2) OCH2CH2-N (CH3) 3...(I)
[0038](式中，R1表示氢原子或甲基)
[0039]具体地，可举出乂为氢原子的磷酸2-(丙烯酰氧基)乙酯-2-(三甲基铵)乙酯、R1为甲基的磷酸2-(甲基丙烯酰氧基)乙酯-2-(三甲基铵)乙酯(东京化成制)。
[0040]本发明的MPC单体的极性基团部分与构成细胞膜的磷脂的极性基团结构相同，将该MPC单体作为主成分聚合而成的聚合物一般具有与生物体的细胞膜成分同样的性质。若使该聚合物人工地溶解于水中，贝lJ形成双分子膜微囊(bilayer membrane vesicle)，从而能够以w/o/w乳液的形式稳定地存在于水中。正在积极地利用该性质来研宄药物投递系统等。另外，已知该聚合物的生物体适合性高，而且若涂布于塑料机材等，则几乎不吸附血液中的蛋白质，显示出抑制非特异吸附的性质，因而人们正在研宄其在医疗器材等中的应用。作为在诊断剂中的应用，如专利文献3和专利文献4所示，已知作为凝集促进剂的效果。但是，尚且没有如本发明所述的用于抑制非特异性反应的应用例，所示非特异性反应是由蛋白质等来源于生物体的物质、检验试剂中的特定的构成成分干预免疫反应而引