一种防己青风藤提取物指纹图谱的测定方法
【技术领域】
[0001] 本发明属于中药指纹图谱领域，特别涉及一种防己青风藤提取物指纹图谱的测定 方法。
【背景技术】
[0002] 防己为防己科植物粉防己StephaniatetrandraS.Moore的干燥根。青 风藤来源于防己科植物青藤Sinomeniumacutum(Thunb.)Rehd.etWils?及毛青藤 S.acutum(Thunb.)Rehd.etWils.var.cinereumRehd.etWils?的干燥根莖。防己和青风 藤分别被收载于中国药典2010年版一部，是常用中药，在复方中药中如防己黄芪汤、芪麝 丸等中有应用。
[0003] 防己中含有多种生物碱成分如粉防己碱和防己诺林碱；青风藤中也主要含有生物 碱类成分如青藤碱。由于防己和青风藤同属防己科植物，有一定的植物亲缘关系，因此在所 含成分方面有一定的交叉性，如木兰花碱是两种植物共同含有的成分。所含有的多种成分 决定了其在液相色谱分离与检测中会以多个特征与专属的色谱峰形式出现，这些特征峰的 数量及面积的大小对于监控中间体的质量可发挥重要的作用。
【发明内容】
[0004] 本发明所要解决的技术问题是提供一种防己青风藤提取物指纹图谱的测定方法， 该方法可有效地监控防己青风藤药材的质量，保证其在临床或生产应用时的有效、安全和 稳定。
[0005] 本发明的一种防己青风藤提取物指纹图谱的测定方法，包括：
[0006] (1)取防己青风藤提取物，精密称定，加入甲醇，35KHZ~60KHz、280W超声提取 5min，放冷，补足减失的溶剂重量，滤膜过滤，取续滤液，即得供试品溶液；
[0007] (2)取青藤碱对照品、木兰花碱对照品、防己诺林碱对照品、粉防己碱对照品，精密 称定，分别加入甲醇制成对照品溶液；
[0008] (3)分别精密吸取供试品溶液和对照品溶液，注入高效液相色谱仪测定，即得防己 青风藤提取物指纹图谱；其中，色谱条件为：色谱柱：WatersXSelectCSHC18色谱柱；柱 温：25°C~40°C;检测波长：205nm~280nm;进样体积：10y1 ;流速：1ml?mirT1;流动相： 流动相A为0. 1%甲酸水，流动相B为甲醇；梯度洗脱程序：0~lOmin:5%B，10~80min: 5%B- 27%B，80 ~90min:27%B- 35%B。
[0009] 所述步骤（1)中的防己青风藤提取物的获取方式为：防己、青风藤经过水提 取后减压浓缩和干燥后制得；或者防己、青风藤经过70%的乙醇回流提取后，经回收乙 醇减压浓缩和干燥后制得；防己、青风藤经过水提取后减压浓缩至相对密度达1. 06~ 1. 16 (70°C)，加入乙醇使含醇量达70%静置过夜，回收乙醇，减压浓缩和干燥后制得。
[0010] 所述步骤⑴中的防己青风藤提取物与甲醇的比例为50mg:20ml;防己青风藤提 取物中防己和青风藤的质量比为1:1~5。
[0011] 所述步骤⑴中的微孔滤膜的孔径为〇. 22ym。
[0012] 所述步骤⑴和⑵中的甲醇的体积百分数为5%。
[0013] 所述步骤⑵中的对照品溶液具体为：每lml各含青藤碱、木兰花碱、粉防己碱、防 己诺林碱20ng~80ng的混合溶液。
[0014] 所述步骤（3)中的Waters XSelect CSH C18色谱柱规格为4.6mmX250mm，填料粒 度大小为5ym。
[0015] 所述步骤（3)中的防己青风藤提取物指纹图谱中11个色谱峰被确定为共有色谱 峰，通过与对照品保留时间的比较，确定峰2为青藤碱；峰6为木兰花碱；峰10为防己诺林 碱；峰11为粉防己碱。
[0016] 有益效果
[0017] 本发明特对药材指纹图谱进行了研宄，建立了液相指纹图谱测定条件，并进行了 方法学考察，根据多批大生产样品，制订了防己青风藤提取物液相指纹图谱标准，在生产过 程中可有效的指导投料、规范生产操作，真正确保了临床用药的安全、有效、可靠，对所测得 的指纹图谱的辨认，采用国家药典委员会提供的中药色谱指纹图谱相似度评价系统，操作 方便、快捷，以其得出的相似度结果，对药材指纹图谱进行评价，结论较为客观、准确。
【附图说明】
[0018] 图1为对照品指纹图谱；其中，1为青藤碱；2为木兰花碱；3为防己诺林碱；3为粉 防己碱；
[0019] 图2为10个批次防己青风藤提取物指纹图谱；
[0020] 图3为防己青风藤提取物标准指纹图谱；其中，2为青藤碱；6为木兰花碱；10为防 己诺林碱；11为粉防己碱。
【具体实施方式】
[0021] 下面结合具体实施例，进一步阐述本发明。应理解，这些实施例仅用于说明本发明 而不用于限制本发明的范围。此外应理解，在阅读了本发明讲授的内容之后，本领域技术人 员可以对本发明作各种改动或修改，这些等价形式同样落于本申请所附权利要求书所限定 的范围。
[0022] 实施例1
[0023] 1.检测波长的选择
[0024] 所建立的测试波长是通过以下实验确定的，经过比较205nm、254nm、265nm、280nm 和320nm波长下的指纹谱图，发现上述几个波长下254nm检测得到的谱图色谱峰高度较平 均，特征峰数量多，基线平稳，色谱峰吸收强度大。
[0025] 2.色谱柱的选择和流动相洗脱梯度程序的优化
[0026] 所选择的色谱柱是通过以下实验确定的。供试品溶液的制备方法为：称取防己 青风藤提取物0.〇l〇〇g，加70%乙醇20ml超声（53KHz，280W)处理30min，静置至室温， 补足减重，过〇? 22 ym微孔滤膜，取续滤液即得。色谱柱为Kromasil、（4.6mmX250mm， 5 tim)、Acchrom Unitary C18色谱柱（4.6mmX 250mm，5 tim)、Acchrom Unitary C18色谱柱 (4.6mmX250mm，5iim)和Waters XSelect CSH C18色谱柱（250mmX4.6mm，5iim);柱温为 30°C;流动相为0. 1%甲酸水（A)-甲醇（B);洗脱条件为：0~10min:5%B，10~80min: 5%B- 27%B，80 ~90min:27%B- 35%B;流速为lml.mirT1，进样体积为 10y1，检测 波长为254nm〇
[0027] 对上述色谱柱实验摸索结果以Waters XSelect CSH C18色谱柱指纹谱图效果最 好。
[0028] 3.色谱条件柱温的筛选
[0029] 供试品溶液的制备方法为：称取防己青风藤提取物0. 0500g，加甲醇20ml超声 (53KHz，280W)处理5min，静置至室温，补足减重，过0.22ym微孔滤膜，取续滤液即得。色谱 条件：色谱柱为Waters XSelect CSH C18色谱柱（4. 6mmX 250mm，5 ym);柱温分别为25°C、 30°C、35°C;流动相为0? 1%甲酸水（A)_甲醇（B);洗脱条件为：0~lOmin :5% B~5% B， 10~75min :5% B~27% B，75~80min :27% B~30% B，80~90min :30% B~100% B ; 流速为lml ? mirT1;进样量为10 y 1 ;检测波长为280nm。经过比较25°C时的谱图较好，故 本发明