一种脑钠肽近红外荧光检测试剂盒及其用图
【技术领域】
[0001] 本发明设及生物技术领域，特别是设及一种脑钢肤炬N巧近红外巧光检测试剂盒 及其用途。
【背景技术】
[0002] 脑钢肤炬rainP^JatriureticP巧tide,BNP)又称B型利钢肤炬-typeP^Jatriuretic P巧tide)、脑利钢肤，是继屯、钢肤（AN巧后利钢肤系统的又一成员，由于它首先是由日本学 者Sudoh等于1988年从猪脑分离出来因而得名，实际上它主要来源于屯、室。BNP具有重要 的病理生理学意义，它可W促进排钢、排尿，具较强的舒张血管作用，可对抗肾素-血管紧 张素-醒固酬系统（RAA巧的缩血管作用，同ANP-样是人体抵御容量负荷过重及高血压的 一个主要内分泌系统。屯、功能障碍能够极大地激活利钢肤系统，屯、室负荷增加导致BNP释 放。
[000引BNP同ANP均是肾素血管紧张素-醒固酬系统（RAA巧的天然括抗剂，亦抵制后叶 加压素及交感神经的保钢保水、升高血压作用。BNP主要在屯、室合成，在屯、室负荷过重或扩 张时增加；因此反映屯、室功能改变更敏感、更具特异性。越来越多的文献支持在屯、肌梗死 (MI)后测定BNP，该不仅可识别有无左屯、收缩功能不全，而且在判断左室重构和死亡危险 方面可能优于屯、超声诊断。在临床实际工作中，BNP还有助于将屯、衰引起的气喘和其它原 因引起的气喘区分开，所W测定血浆BNP浓度可W为临床提供许多有用的信息。
【发明内容】
[0004] 鉴于W上所述现有技术的缺点，本发明的目的在于提供一种脑钢肤近红外巧光检 测试剂盒及其用途，用于建立高效可行的脑钢肤近红外巧光检测技术，解决现有技术中的 问题。
[0005] 鉴于W上所述现有技术的缺点，本发明的目的在于提供一种脑钢肤近红外巧光检 测试剂盒及其用途。本发明所提供的检测试剂盒结合近红外巧光检测技术，可快速，准确的 检测出人全血/血清/血浆中脑钢肤。
[0006] 为实现上述目的及其他相关目的，本发明第一方面提供一种脑钢肤近红外巧光检 测试剂盒，包括位于背板上的试剂条，试剂条从加样端开始依次为样品垫、标记有免疫巧光 探针的玻璃纤维素膜、包被有抗脑钢肤单克隆抗体的硝酸纤维素膜和吸水纸。
[0007]优选的，所述免疫巧光探针为抗脑钢肤单克隆抗体包被的近红外巧光乳胶微球颗 粒。
[000引硝酸纤维素膜上包被的抗脑钢肤单克隆抗体和所述近红外巧光乳胶微球颗粒上 包被的抗脑钢肤单克隆抗体可W为相同的抗脑钢肤单克隆抗体，也可W为不同的抗脑钢肤 单克隆抗体。
[0009] 更优选的，所述硝酸纤维素膜上包被的抗脑钢肤单克隆抗体为Abeam?Atni-BNP 抗体圧P3737 (2) ] -C-terminal，所述近红外巧光乳胶微球颗粒上包被的抗脑钢肤单克隆抗 体为Abcan愧AnU-BNP抗体圧PR3735]，或所述硝酸纤维素膜上包被的抗脑钢肤单克隆抗 体为Abcam?Ami-BNP抗体圧PR3735]，所述近红外巧光乳胶微球颗粒上包被的抗脑钢肤 单克隆抗体为Abeam恶Anli-BNP抗体圧P3737 (2) ] -C-terminal。
[0010] 更优选的，所述巧光乳胶微球颗粒的直径为140-160nm。
[0011]近红外光（NIR)，是介于可见光（VI巧和中红外光（MIR)之间的电磁波，ASTM定义 NIR为波长在780nm-2526皿范围内的电磁波。在近红外光区，生物体自吸收或巧光强度很 小，可避免背景干扰。同时由于散射光强度与波长的四次方呈反比，近红外区的散射干扰大 为减少。
[0012] 本发明第二方面提供所述脑钢肤近红外巧光检测试剂盒的制备方法，包括如下步 骤：
[0013] 1)用缓冲液将巧光乳胶微粒离屯、清洗并将乳胶颗粒分散，在清洗好的乳胶颗粒分 散液中加入抗脑钢肤单克隆抗体；加入邸CA使抗体与颗粒偶联；再加入封闭液封闭乳胶颗 粒上多余的基团，制备获得探针溶液；
[0014] 2)将含有抗脑钢肤单克隆抗体的缓冲溶液喷加到硝酸纤维素膜上，烘干备用；
[001引扣将步骤1制备获得的探针溶液浸润玻璃纤维薄膜，干燥备用；
[0016] 4)将步骤2所得的硝酸纤维素膜、步骤3所得的标记有免疫巧光探针的玻璃纤维 素膜、样品垫、吸水纸及背板组装制备成脑钢肤近红外巧光检测试剂盒。
[0017] 优选的，所述步骤1中，再加入封闭液封闭乳胶颗粒上多余的基团，并加入冠離， 制备获得探针溶液，所述冠離选自二环已基-18-冠-6、15-冠離-5、18-冠離-6中的一种 或多种的组合。
[001引更优选的，步骤1制备获得的探针溶液中冠離的浓度为0.l-20mg/ml，更优选为 4-8mg/ml。
[0019] 优选的，所述步骤1中，缓冲液为磯酸盐（PB巧缓冲液。
[0020] 更优选的，所述PBS缓冲液为0. 009-0.Ollmol/L，PH7. 25-7. 35的PBS缓冲液。
[0021] 优选的，所述步骤1中，巧光乳胶微粒的直径为140-160nm。
[0022] 优选的，所述步骤1中，乳胶颗粒、抗脑钢肤单克隆抗体、邸CA的重量比为9-11 : 0? 9-1. 1 ;0? 9-1. 1 〇
[0023] 在本发明一实施例中，乳胶颗粒、抗脑钢肤单克隆抗体、邸CA的投料量分别为 Img、lOOug、lOOug。
[0024] 优选的，所述封闭液为己醇胺，加入量为适量，本领域技术人员可根据实际情况调 整己醇胺的用量。
[0025] 优选的，所述步骤2中，所述缓冲溶液为PBS缓冲液。
[0026] 本领域技术人员可选取适当浓度和抑的PBS缓冲液，更优选为0. 009-0.Ollmol/ L，PH7. 25-7. 35 的PBS缓冲液。
[0027] 优选的，所述步骤2中，含有抗脑钢肤单克隆抗体的缓冲溶液中还含有冠離，所述 冠離选自二环已基-18-冠-6、15-冠離-5、18-冠離-6中的一种或多种的组合。
[002引更优选的，所述含有抗脑钢肤单克隆抗体的缓冲溶液中冠離的浓度为0.l-20mg/ml，更优选为4-8mg/ml。
[0029] 优选的，所述步骤2中，含有抗脑钢肤单克隆抗体的缓冲溶液中抗脑钢肤单克隆 抗体的浓度为1. 8-2. 2mg/ml。
[0030] 优选的，所述步骤2中，抗脑钢肤单克隆抗体的缓冲溶液的喷加量为0. 9-1.lul/cm〇
[0031] 优选的，所述步骤2中，烘干的具体条件为36-38C烘箱烘干。
[0032] 所述喷加过程利用微量蛋白点膜系统。
[003引优选的，所述步骤1中的抗脑钢肤单克隆抗体为Abeam盛Ami-BNP抗体 圧P3737 (2)]-C-terminal，所述步骤2中的抗脑钢肤单克隆抗体为Abeam盛Anli-BNP抗体 圧PR3735]，或所述步骤1中的抗脑钢肤单克隆抗体为Abcam?Aini-BNP抗体圧PR3735]， 所述步骤2中的抗脑钢肤单克隆抗体为Abeam篡Ami-BNP抗体圧P3737似]-C-terminal。
[0034] 优选的，所述步骤3中，干燥的具体条件为真空干燥机干燥。
[0035] 本发明第=方面提供所述脑钢肤近红外巧光检测试剂盒在脑钢肤检测领域的用 途。
[0036] 所述用途具体为使用所述脑钢肤近红外巧光检测试剂盒对样品中的脑钢肤进行 检测，所述样品选自人全血、血清或血浆中的一种或多种的组合。
[0037] 本发明所提供的检测试剂盒W人全血/血清/血浆为检测样本，结合近红外巧光 检测技术，可快速，准确的检测出患者标本中的脑钢肤。所述试剂盒采用免疫巧光层析法， 其最小可测量可达0. 5pg/ml，检测方便、成本低，灵敏度高，特异性好，比同类定量诊断试剂 价格低20-30%，大大节约了社会医疗成本，检测过程中样品收集及处理简单，可快速准确 的获得结果，非常适合突发事件现场和基层使用，并可应用到临床检测中，为临床治疗提供 定性依据。
【具体实施方式】
[003引W下通过特定的具体实例说明本发明的实施方式，本领域技术人员可由本说明书 所揭露的内容轻易地了解本发明的其他优点与功效。本发明还可W通过另外不同的具体实 施方式加W实施或应用，本说明书中的各项细节也可W基于不同观点与应用，在没有背离 本发明的精神下进行各种修饰或改变。
[0039] 在进一步描述本发明【具体实施方式】之前，应理解，本发明的保护范围不局限于下 述特定的具体实施方案；还应当理解，本发明实施例中使用的术语是为了描述特定的具体 实施方案，而不是为了限制本发明的保护范围；在本发明说明书和权利要求书中，除非文中 另外明确指出，单数形式"一个"、"一"和"该个"包括复数形式。
[0040] 当实施例给出数值范围时，应理解，除非本发明另有说明，每个数值范围的两个端 点W及两个端点之间任何一个数值均可选用。除非另外定义，本发明中使用的所有技术和 科学术语与本技术领域技术人员通常理解的意义相同。除实施例中使用的具体方法、设备、 材料外，根据本技术领域的技术人员对现有技术的掌握及本发明的记载，还可W使用与本 发明实施例中所述的方法、设备、材料相似或等同的现有技术的任何方法、设备和材料来实 现本发明。
[0041] 除非另外说明，本发明中所公开的实验方法、检测方法、制备方法均采用本技术 领域常规的分子生物学、生物化学、染色质结构和分析、分析化学、细胞培养、重组DNA技 术及相关领域的常规技术。该些技术在现有文献中已有完善说明，具体可参见Sambrook 等 MOLECULAR CLONING ;A LABORATORY MANUAL, Second edition, Cold Spring Harbor L油oratory Pres