一种同时测定姜黄产品中三种有效成分含量的方法
【技术领域】
[0001] 本发明属于药物质量测定方法技术领域，具体为一种同时测定姜黄产品中三种有 效成分含量的方法。
【背景技术】
[0002] 中药具有多成分、多靶点、多层次、整体作用的特点，但目前对于其质量控制多以 药材中单一指标成分的含量为评价指标，难以准确、全面地反映其质量，更不能全面地反应 其功能与效果。姜黄为姜科植物姜黄Curcuma longa L的干燥根莖，是一种药食两用的传 统药材，具有破血行气，通经止痛，临床上用于胸胁刺痛，胸痹心痛，痛经经闭，癥瘕，风湿肩 臂疼痛，跌扑肿痛等。目前，对于姜黄药材及其产品成分含量的测定均以姜黄素作为单一指 标，难以全面地反映其整体质量及药效。
【发明内容】
[0003] 姜黄药材及产品中，主要成分除了姜黄素，还包括去甲氧基姜黄素和双去甲氧基 姜黄素，其在姜黄药材及姜黄产品中占据一定的份量，为了能更全面测定姜黄药材及产品 成分含量，对药材及产品功效进行更全面的把控，本发明提供一种同时测定姜黄产品中姜 黄素、去甲氧基姜黄素和双去甲氧基姜黄素含量的方法，本发明可用于对姜黄药材、饮片、 提取物及配方颗粒中有效成分含量的测定。
[0004] 本发明主要通过以下技术方案来实现：
[0005] -种同时测定姜黄产品中三种有效成分含量的方法，包括以下步骤：
[0006] (1)对照品储备液制备：精确称取姜黄素、去甲氧基姜黄素、双去甲氧基姜黄素， 并将其混合，加入试剂溶液制备成混合对照品储备液；
[0007] (2)对照品溶液制备：精密量取上述储备液，并用试剂溶液稀释成不同浓度，稀释 后的溶液即为对照品混合溶液；
[0008] (3)供试品溶液的制备：取待测样品，用试剂溶液溶解过滤，所得滤液即为供试品 溶液；
[0009] (4)高效液相色谱测定：分别吸取上述对照品溶液及供试品溶液，注入高效液相 色谱仪，进行数据测定；
[0010] (5)待测样品含量计算：根据对照品溶液的峰面积得出各成分含量与峰面积关系 的线性回归方程，并将供试品溶液的峰面积代入线性回归方程即得样品中三种成分的含 量。
[0011] 作为本发明的一些优选，所述试剂溶液为甲醇、乙醇中的一种或两种。
[0012] 作为本发明的一些优选，所述供试品溶液的制备可以通过以下方式来实现：取待 测样品，加入甲醇溶解，称定质量，超声处理，放冷，再称定质量，用甲醇补足减失的质量，摇 匀、过滤、取滤液、再用微孔滤膜过滤，即得供试品溶液。
[0013] 作为本发明的一种优选，所述超声处理的条件为：功率250W、频率40kHz、时间 30min〇
[0014] 作为本发明的一种优选，所述微孔滤膜的孔径大小为0. 45 μ m。
[0015] 作为本发明的一种优选，所述高效液相色谱测定为：色谱条件：色谱柱为 〇11'〇1118丨311￥(]18(规格为4.6_\250_，5 41]1)，流动相为乙腈和4%冰醋酸的混合液，检测 波长为422nm，流速为1.0 mL/min，柱温为30°C，分别吸取上述对照品溶液及供试品溶液各 10 μ L，注入高效液相色谱仪，进行数据测定。
[0016] 作为本发明的一种优选，所述乙腈和4%冰醋酸溶液的质量比为48 :52。
[0017] 作为本发明的一种优选，所述高效液相色谱柱的理论塔板数均大于4000。
[0018] 作为本发明的一种优选，一种同时测定姜黄产品中三种有效成分含量的方法，包 括以下步骤：
[0019] (1)对照品储备液制备：精确称取姜黄素、去甲氧基姜黄素、双去甲氧基姜黄素， 并将其混合，加入甲醇溶液制备成浓度分别为98. 88、44. 40、25. 92 μ g/mL的混合对照品储 备液。
[0020] ⑵对照品溶液制备：精密量取上述储备液0. 3mL、0. 6mL、I. 2mL、2. 5mL，分别用甲 醇溶液稀释至5mL，得不同浓度的对照品混合溶液。
[0021] (3)供试品溶液的制备：取待测样品0. 2g，加入甲醇25mL溶解，称定质量，超声处 理（功率250W、频率40kHz、时间30min)，放冷，再称定质量，用甲醇补足减失的质量，摇匀、 过滤、取滤液、再用孔径大小为〇. 45 μ m的微孔滤膜过滤，即得供试品溶液。
[0022] (4)高效液相色谱测定：色谱条件：色谱柱为Chromstar? C18 (规格为 4. 6mmX 250mm，5 μ m)，流动相为乙腈和4%冰醋酸的混合液（质量比为48 :52)，检测波长为 422nm，流速为1.0 mL/min，柱温为30°C，分别吸取上述对照品溶液及供试品溶液各10 μ L， 注入高效液相色谱仪，进行数据测定。
[0023] (5)待测样品含量计算：根据对照品溶液的峰面积得出各成分含量与峰面积关系 的线性回归方程，并将供试品溶液的峰面积代入线性回归方程即得样品中三种成分的含 量。
[0024] 作为本发明的一种优选，所述线性回归方程如下：
[0025] 姜黄素！Y1= 9159. 46Χ「19. 16
[0026] 去甲氧基姜黄素：Υ2= 8154. 79Χ2-15· 07
[0027] 双去甲氧基姜黄素：Υ3= 9867. 85Χ 3-9· 27
[0028] 其中，Y1表示姜黄素色谱峰峰面积，X i表示姜黄素含量；Y 1表示去甲氧基姜黄素色 谱峰峰面积，X2表示去甲氧基姜黄素含量；Y3表示双去甲氧基姜黄素色谱峰峰面积，X3表示 双去甲氧基姜黄素含量。
[0029] 在本发明对照品?谷液制备过程中，米用先制备出对照品储备液，再将储备液稀释 到所需浓度制备成对照品混合溶液，相比于一次性直接制备成所需浓度的对照品溶液，可 以减少使用天平称量的次数，降低样品的浪费，达到节约成本及提供工作效率的目的。对照 品储备液与对照品溶液的量及浓度应根据待测样品的分量及实验设计需求进行配制，可以 为一份或多份，采用再次稀释的方法制备不同浓度的对照品溶液，方法简单，容易操作。
[0030] 在进行高效液相色谱测定步骤时，对照品溶液及供试品溶液的吸取量可以根据实 验需要进行调节，两者的进样品可以相同也可以不同，应根据色谱仪测试范围及实验需要 来制定。
[0031 ] 在上述供试品溶液制备过程中，采用超声处理可以加速供试品物质在甲醇溶液中 的溶解速率，加强甲醇溶液对姜黄素等物质的提取，且超声处理具有方便、简单、快速的效 果。
[0032] 采用孔径大小为0. 45 μπι的微孔滤膜对滤液进行过滤，可以将滤液中的细小杂质 更好地除去，防止后续在高效液相色谱测试中堵塞仪器。
[0033] 本发明在相同的实验条件下，通过已知浓度含量的对照品溶液与高效液相色谱仪 测得的色谱峰峰面积得出姜黄素、去甲氧基姜黄素、双去甲氧基姜黄素的色谱峰峰面积与 进样量的线性关系，然后再根据样品中姜黄素、去甲氧基姜黄素、双去甲氧基姜黄素的峰面 积推算出样品中各成分的含量。本发明利用高效液相色谱仪一次性得出各有效成分的色谱 峰面积，实现对三种有效成分含量的同时测量，不同于以往只利用单一姜黄素成分含量来 测量姜黄产品含量的控制方法，能够更有效体现姜黄产品的药效及价值。
[0034] 本发明的有益效果：本发明采用高效液相色谱法同时对姜黄产品中姜黄素、去甲 氧基姜黄素、双去甲氧基姜黄素三种有效成分含量进行测定，区别于以往技术中单纯对姜 黄素含量进行测定，可以更准确对姜黄药材及产品的质量及药效进行控制。本发明实验方 法同时实现对三种成分对照品溶液的配制，并同时进行色谱测试，可以一次性实现对三种 成分含量的测定，具有简单、快速、高效、经济、全面等特点。并通过精密度实验、重复性实 验、稳定性实验及加样回收率实验对本发明方法进行验证，表明本发明具有很好的可靠性 及精确性。
【附图说明】
[0035] 图1是本发明方法测定的混合对照品溶液和供试品溶液的高效液相色谱图，其中 A为混合对照品溶液，B为供试品溶液，1为双去甲氧基姜黄素，2为去甲氧基姜黄素，3为姜 黄素。
[0036] 图2是根据本发明对照品储备液及对照品溶液得出的姜黄素、去甲氧基姜黄素、 双去甲氧基姜黄素检测方法的标准曲线，其中（a)为姜黄素，（b)为去甲氧基姜黄素，（c)为 双去甲氧基姜黄素。
【具体实施方式】
[0037] 为了使本实发明的目的、技术方案及优点更加清楚明白，以下结合实施例对本发 明进行进一步详细说明，此处所描述的具体实施例仅仅用以解释本发明，并不用于限定本 发明。
[0038] 实施例1 :
[0039] 按照本发明所述步骤进行对照品溶液及供试品溶液的制备，并进行测定。
[0040] (1)、对照品储备液制备：精确称取姜黄素、去甲氧基姜黄素、双去甲氧基姜黄素， 并将其混合，加入甲醇溶液制备成浓度分别为98. 88、44. 40、25. 92 μ g/mL的混合对照品储 备液。
[0041] (2)、对照品溶液制备：精密量取上述储备液0. 3mL、0. 6mL、l. 2mL、2. 5mL，分别用 甲醇溶液稀释至5mL，得不同浓度的对照品混合溶液。
[0042] (3)、供试品溶液的制备：取待测样品0. 2g，加入甲醇25mL溶解，称定质量，在 250W、频率40kHz的条件下超声处理时间30min，放冷，再称定质量，用甲醇补足减失的质 量，摇匀、过滤、取滤液、再用孔径为0. 45 μm的微孔滤膜过滤，即得供试品溶液。
[0043] (4)、测定：色谱条件：色谱柱为 Chromstar? C18 (规格为 4. 6mmX 250mm，5 μ m)，流 动相为乙腈和4%冰醋酸的混合液（质量比为48 :52)，检测波长为422nm，流速为1.0 mL/ min，柱温为30°C，分别吸取上述对照品溶液及供试品溶液各10 μ L，注入高效液相色谱仪， 进行数据测定。
[0044] (5)、待测样品含量计算：根据对照品溶液的高效液相色谱峰峰面积得出各成分含 量与峰面积关系的线性回归方程，并将供试品溶液的峰面积代入线性回归方程即得样品中 三种成分的含量。
[0045] 图1为本发明方法测定的混合对照品溶液和供试品溶液的高效液相色谱图，其中 A为混合对照品溶液，B为供试品溶液。图1表明姜黄素、去甲氧基姜黄素、双去甲氧基姜黄 素的色谱峰与样品中其它组分色谱峰达基线分离，能够通过色谱峰峰面积实现对这三种成 分含量的测定。
[0046] 1.线性关系考察：
[0047] 精密吸取上述步骤（2)四种浓度的混合对照品溶液及步骤（1)的对照品储备