一种使用uplc-ie法测定无烟气烟草制品中主要羰基化合物的方法
【技术领域】
[0001] 本发明属于无烟气烟草制品的理化检验技术领域，具体说是设及一种使用 UPLC-IE法测定无烟气烟草制品中主要幾基化合物的方法。
【背景技术】
[0002] 随着越加严格的控烟措施的实施，无烟气烟草制品正在成为一种重要的烟草消费 品。但对其中含有的有害成分的研究还较少。幾基化合物被国际癌症研究机构（IARC)认为 是人体致癌物质（第1类）或为可疑的人体致癌成分（2B类），因此有必要对无烟气烟草制 品中的幾基化合物进行分析研究。目前，市售的无烟气烟草制品既有简单的手工制品，又有 经过复杂工艺处理的制品，也有在其中添加甜味剂和香精香料等添加剂的产品。该些因素 会导致各种无烟气烟草产品在化学指标方面存在较大差异。美国北卡罗莱纳州立大学烟草 分析服务实验室（Tobacco Anal}ftical Services L油oratory, TA化）出于科学研究的目 的提供了一系列新的标准化的STRP - C0RESTA参考制品（C0RESTA Reference Products -CRPs)，包括CRPl(鼻烟）、CRP2(湿鼻烟）、CRP3(干鼻烟）和CRP4(活页口嚼烟）。 该些STRP被广泛用于无烟气烟草分析方法的验证，但目前还没有统一的方法分析无烟气 烟草制品中的幾基化合物。
[0003] 高效的C0RTECSUPLC色谱柱采用了先进的实屯、核颗粒和填充技术，能够在高流 速下保持良好的分离性能，进而缩短运行时间并提高通量，而且无需牺牲分离质量。同时 C0RTECSUPLC色谱柱采用甲酸水溶液和甲酸己膳溶液作为流动相，避免了在分离复杂基质 时使用有毒的四氨快喃，更符合绿色化学的要求。
[0004] 因此，使用C0RTECSUPLC色谱柱采用超高效液相色谱-等度洗脱法（UPLC-IE)建 立一种能够快速、高效、环保的测定无烟气烟草制品中幾基化合物的方法，有利于提高对无 烟气烟草制品中幾基化合物检测的效率，同时大大降低有机溶剂的损耗，减少对环境的污 染。
[000引
【发明内容】
： 本发明的目的正是基于上述状况而提供一种使用UPLC-IE法测定无烟气烟草制品中 幾基化合物的方法。利用本发明提供的测定方法，能快速、高效、环保地检测无烟气烟草制 品中幾基化合物的含量。
[0006] 本发明的目的是通过W下技术方案来实现的： 一种使用UPLC-IE法测定无烟气烟草制品中主要幾基化合物的方法，所述主要幾基化 合物为甲醒、己醒、丙酬、丙締醒、丙醒、己豆醒、2-了酬、了醒，该方法是利用己酸水溶液萃 取无烟气烟草制品中的主要幾基化合物并通过衍生化处理后，再利用超高效液相色谱等度 洗脱法（UPLC-IE)分析无烟气烟草制品中的主要幾基化合物，具体测定步骤如下： a、衍生化试剂的准备；称取1.Og的2,4-二硝基苯阱（DNPH)固体于50血栋色容量瓶 中，加入25mL磯酸后用己膳定容； b、萃取溶液的配制：准确移取8mL的己酸溶液到200mL的容量瓶中，加入超纯水定容至 刻度； C、样品的准备；称取1g无烟气烟草制品放入100mL锥形瓶中，然后加入50mL4% 己酸水溶液，于80°C水浴中振荡化，然后使用0.22ym聚離讽微孔滤膜过滤；2mL过滤 后的溶液加入5mL容量瓶中，同时加入3mLDNPH溶液进行衍生化，混合均匀后，等待15 分钟至反应完全；取适量萃取液用0. 22ym有机相滤膜过滤后，转移至2血色谱瓶中，进行 UPLC分析； t标准工作溶液制备；配置含有八种幾基化合物的8级具有一定浓度梯度的标准工作 溶液，具体制备方法如下；分别准确称取30mg的丙酬、丙締醒、丙醒、己豆醒、2 -了酬、了 醒的2,4 -二硝基苯腺衍生物标准品，40mg甲醒和50mg己醒的2,4 -二硝基苯腺衍生物 标准品至不同的25mL的容量瓶中，精确至0.Img，分别用己膳定容作为一级储备液，此溶 液密封于4°C存放，有效期为一年；然后分别移取1.OmL的己醒DNPH溶液，0. 75mL的丙酬 DNPH溶液，0. 5血甲醒、丙締醒、丙醒、己豆醒、2 -了酬、了醒的DNPH溶液至同一个25血的 容量瓶中，用己膳定容至刻度，此为二级储备液，密封于4°C存放，有效期为20天；然后移取 0. 05mL、0. 2mL、0. 4mL、0. 8mL、2. 0mL、4. 0mL、7. 0血和 10. 0血的二级储备液至同一个 10血的 容量瓶中，用己膳定容配置8级具有一定浓度梯度的标准工作溶液，有效期为20天； e、超高效液相色谱等度洗脱法（UPLC-IE) (IE表示等度洗脱）测定：利用超高效液相 色谱仪配紫外检测器对标准工作溶液和样品处理液进行检测，具体条件如下： 色谱柱；Acquity UPLC C0RTECS C18色谱柱（1.6 Mm，2. 1cm X 100 mm); 柱温；30°C; 流动相A;0. 1%甲酸水溶液； 流动相B;0. 1%甲酸己膳溶液； 流动相比例；A:B=50 ;50 (v/v); 柱流量；〇. 4血/min; 进样体积；3uL; 检测器；紫外检测器； 选优的，检测器检测波长为365nm。
[0007] 与现有技术相比本发明克服了现有技术样品处理方法的不足，优化了仪器检测条 件，本发明具有如下效果； (1) 检测时间短；采用本发明测定无烟气烟草制品中主要幾基化合物周期仅需要10分 钟左右； (2) 本发明具有操作准确、灵敏度高及重复性好的优点。
[000引①本发明方法的标准曲线和检测限； W甲醒、己醒、丙酬、丙締醒、丙醒、己豆醒、2 -了酬、了醒为检测指标，配制8种幾基化 合物的工作标准溶液，经高液相色谱分析，W目标物色谱峰面积对其相应浓度进行回归分 析，得到标准曲线及其回归方程、相关系数，利用最低浓度标液信噪比为S/N=3时计算出检 测限UW)(表1)。由表1可知，所采用的色谱条件使8种幾基化合物色谱峰都分离较好， 并且均具有较好的相关性（必0. 9999)，检出限在0. 14~0. 25mg/kg之间。
[0009]表1无烟气烟草制品幾基化合物的标准曲线和检测限
注：①检出限W3倍信噪比（S/N= 3)计算。
[0010] ②本发明方法的重复性和加标回收率： 表2方法的回收率与重复性（/?=5)
对样品进行高、中、低不同浓度水平的标准溶液加标回收率试验，每个样品分别测定5 次，计算本方法各种无烟气烟草制品中主要幾基化合物的的回收率及加标后测定值的相对 标准偏差，结果见表2。由表2可W看出，在3个加标水平上，利用此方法检测无烟气烟草制 品中主要幾基化合物的平均回收率在929(^101%之间。样品测试结果的平均相对偏差小于 7% ;说明本法的回收率较高，重复性较好。
【附图说明】
[0011] 图1本发明的测定方法流程图； 图2混标溶液色谱图； 图3样品色谱图； 图中；1.甲醒、2.己醒、3.丙酬、4.丙醒、5.丙締醒、6.己豆醒、7. 2-了酬、8. 了 醒。
【具体实施方式】
[0012] 本发明结合实例做进一步描述。
[001引 实例1 ; 1.试剂与仪器： 标准品：甲醒、己醒、丙酬、丙締醒、丙醒、己豆醒、2-了酬、了醒的2,4-二硝基苯腺衍 生物标准品（Dr.化rensto计er公司，德国）； 试剂；己膳（色谱纯，韩国Duksanpurechemicals公司），甲酸（色谱纯，美国Fisher公 司）。实验用水为Milli-Q纯水系统所制去离子水；2, 4-二硝基苯阱（DNPH) (AR，天津市瑞 金特化学品有限公司）（使用