60%。
[0039] 表1 20批标准蛇胆川贝液（无糖型）的色谱图中各特征峰的相对保留时间
[0042] 3. 3标准特征图谱的精密度试验
[0043] 取蛇胆川贝液（无糖型，批号为20150503)，按照上述方法制备成标样溶液，连续 进样6次，得到6个色谱图，均出现8个特征峰，设定牛黄胆酸钠的特征峰的相对保留时间 为1，计算6个色谱图中其它7个特征峰的相对保留时间。经计算，6个色谱图中7个特征 峰的相对保留时间的相对标准偏差RSD < 0. 15%。
[0044] 3. 4标准特征图谱的重复性试验
[0045] 取蛇胆川贝液（无糖型，批号为20150503) 6份，按照上述方法分别制备成标样溶 液，分别检测得到6个色谱图，均出现8个特征峰，设定牛黄胆酸钠的特征峰的相对保留时 间为1，计算6个色谱图中7个特征峰的相对保留时间。经计算，6个色谱图中7个特征峰 的相对保留时间的相对标准偏差RSD < 0. 21%。
[0046] 3. 5标准特征图谱的稳定性试验
[0047] 取蛇胆川贝液（无糖型，批号为20150503)，按照上述方法制备成标样溶液，精密 吸取6份标样溶液，每份10 μ 1，按上述色谱条件分别在0h、lh、2h、4h、8h和12h进样，检测 得到6个色谱图，均出现8个特征峰，设定牛黄胆酸钠的特征峰的相对保留时间为1，计算6 个色谱图中7个特征峰的相对保留时间。经计算，6个色谱图中7个特征峰的相对保留时间 的相对标准偏差RSD < 0. 27 %。
[0048] 以上试验结果表明，采用本发明公开的方法构建得到的蛇胆川贝液的标准特征图 谱精密度高，重复性好，结果准确可靠，其能全面的反映蛇胆川贝液的化学信息，进而确保 该产品的质量与疗效。
[0049] 实施例2 :蛇胆川贝液的质量检测
[0050] 1、仪器与试药
[0051] 仪器：Waters高效液相色谱仪，2489检测器。
[0052] 药品：磷酸（分析纯）；甲醇（色谱级，SIGAMA);蛇胆川贝液（无糖型），批号为 20150503,由安徽安科余良卿药业有限公司提供；牛磺胆酸钠对照品（纯度88. 9% )，批号 为 110815-200506。
[0053] 2、色谱条件
[0054] 色谱柱以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂（柱长为250mm，内径为4. 6mm,粒径 5 y m);以甲醇为流动相A，以0. 3 %的磷酸二氢钾溶液为流动相B，流动相按体积比为30~ 56 :70~44的A相和B相梯度洗脱，所述的磷酸二氢钾溶液用磷酸调至pH值为3. 0,梯度 洗脱的时间及流动相比例为：0~1011^11，4相30%-35%，8相70%-65% ;10~201^11， A 相 35%- 56%，B 相 65%- 44% ;20 ~60min，A 相 56%，B 相 44% ;流速 1.0 ml/min ;检 测波长205nm ;柱温30~40°C ;进样液的进样量为10 μ 1 ;按照牛黄胆酸钠峰计算，理论塔 板数彡7000。
[0055] 3、特征图谱中的特征峰的测定
[0056] (1)待测溶液的制备：精密吸取待测蛇胆川贝液1ml，置IOml量瓶中，加40%甲醇 稀释至刻度，摇匀，室温静置20分钟，滤过，取续滤液即得待测溶液。
[0057] (2)参照物溶液的制备：取牛磺胆酸钠对照品40mg，置100mL量瓶中，加甲醇稀释 至刻度，摇匀，滤过，取续滤液作为参照物溶液。
[0058] (3)高效液相色谱分析：精密吸取参照物溶液和待测溶液各10 μ 1，分别注入液相 色谱仪中进行测定，记录60分钟的图谱，即得牛黄胆酸钠对照品的色谱图和待测蛇胆川贝 液的色谱图。待测蛇胆川贝液的色谱图中共有8个特征峰，以牛黄胆酸钠的特征峰的相对 保留时间为1，其1-7号峰的相对保留时间分别为：0. 52、0. 86、0. 91、1. 10、1. 21、1. 76、1. 93 经计算，待测蛇胆川贝液的色谱图中的1-7号峰的相对保留时间与标准特征图谱中相应特 征峰的相对保留时间的相对标准偏差在±5 %以内，即在规定范围内，说明该蛇胆川贝液 (无糖型，批号为20150503)的质量合格。
[0059] 实施例3蛇胆川贝液的质量检测
[0060] 1、仪器与试药
[0061] 仪器：Waters高效液相色谱仪，2489检测器。
[0062] 药品：磷酸（分析纯）；甲醇（色谱级，SIGAMA);蛇胆川贝液（有糖型），批号为 20140603,由安徽安科余良卿药业有限公司提供；牛磺胆酸钠对照品（纯度88. 9% )，批号 110815-200506。
[0063] 2、色谱条件
[0064] 色谱柱以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂（柱长为250mm，内径为4. 6mm,粒径 5 y m);以甲醇为流动相A，以0. 2 %的磷酸二氢钾溶液为流动相B，流动相按体积比为30~ 56 :70~44的A相和B相梯度洗脱，所述的磷酸二氢钾溶液用磷酸调至pH值为3. 0,梯度 洗脱的时间及流动相比例为：0~1011^11，4相30%-35%，8相70%-65% ;10~201^11， A 相 35%- 56%，B 相 65%- 44% ;20 ~60min，A 相 56%，B 相 44% ;流速 1.0 ml/min ;检 测波长205nm ;柱温30~40°C ;进样液的进样量为10 μ 1 ;按照牛黄胆酸钠峰计算，理论塔 板数彡7000。
[0065] 3、特征图谱中的特征峰的测定
[0066] (1)待测溶液的制备：精密吸取待测蛇胆川贝液Iml，置IOml量瓶中，加 45 %甲醇 稀释至刻度，摇匀，室温静置20分钟，滤过，取续滤液即得待测溶液。
[0067] (2)参照物溶液的制备：取牛磺胆酸钠对照品30mg，置100mL量瓶中，加甲醇稀释 至刻度，摇匀，滤过，取续滤液作为参照物溶液。
[0068] (3)高效液相色谱分析：精密吸取参照物溶液和待测溶液各10 μ 1，分别注入液 相色谱仪中进行测定，记录60分钟的图谱，即得牛黄胆酸钠对照品的色谱图和待测蛇胆川 贝液的色谱图。待测蛇胆川贝液的色谱图中共有8个特征峰，以牛黄胆酸钠的特征峰的相 对保留时间为1，其1-7号峰的相对保留时间分别为：0. 52、0. 86、0. 91、1. 10、1. 21、1. 76、 1. 93。经计算，待测蛇胆川贝液的色谱图中的1-7号峰的相对保留时间与标准特征图谱中 相应特征峰的相对保留时间的相对标准偏差在±5%以内，即在规定范围内，说明该蛇胆川 贝液（有糖型，批号为20140603)的质量合格。
【主权项】
1. 一种蛇胆川贝液的标准特征图谱的构建方法，其步骤如下： a) 标样溶液、参照物溶液的准备：将至少20批次合格的蛇胆川贝液分别浸提得到各标 样溶液，将牛黄胆酸钠对照品加甲醇制成参照物溶液； b) 高效液相色谱分析：精密吸取等量的各标样溶液、参照物溶液，分别注入液相色谱 仪进行测定，即得各标样溶液和参照物溶液的色谱图； c) 标准特征图谱的构建：将得到的各标样溶液的色谱图导入中药色谱指纹图谱相似 度评价系统，制定得到蛇胆川贝液的标准特征图谱。该标准特征图谱中有8个特征峰，按出 现的时间顺序将所述的8个特征峰依次编号1~3、S、4~7,以参照物溶液的色谱峰的相 对保留时间为1，计算得知1~7号特征峰的平均相对保留时间分别为0. 52、0. 86、0. 91、 1. 10、1. 21、1. 76、1. 93 ;所述的S号色谱峰是牛黄胆酸钠的特征峰，其平均相对保留时间为 1〇2. 根据权利要求1所述的蛇胆川贝液的标准特征图谱的构建方法，其特征在于：高效 液相色谱分析的色谱条件为：色谱柱以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以甲醇为流动相 A，以0. 04~0. 4%的磷酸二氢钾溶液为流动相B，流动相按体积比为30~56 :70~44的 A相和B相梯度洗脱，所述的磷酸二氢钾溶液用磷酸调至pH值为3. 0 ;流速0. 5~I. 5ml/ min ;检测波长205±2nm ;柱温30~40°C;进样液的进样量为10-20 y 1 ;按照牛黄胆酸钠峰 计算，理论塔板数^ 7000。3. 根据权利要求2所述的蛇胆川贝液的标准特征图谱的构建方法，其特征在于：梯度 洗脱的时间及流动相比例为：0~101^11，4相30%-35%，8相70%-65% ;10~20111111， A 相 35%- 56%，B 相 65%- 44% ;20 ~60min，A 相 56%，B 相 44%。4. 根据权利要求1所述的蛇胆川贝液的标准特征图谱的构建方法，其特征在于：所述 的A相为色谱级甲醇。5. 根据权利要求1所述的蛇胆川贝液的标准特征图谱的构建方法，其特征在于：取 20批合格的蛇胆川贝液分别进行浸提操作，蛇胆川贝液的浸提步骤为：向蛇胆川贝液中加 8~10倍体积的40%~50%甲醇，摇匀，室温静置10~30分钟，滤过，取续滤液即为标样 溶液。6. 根据权利要求1所述的蛇胆川贝液的标准特征图谱的构建方法，其特征在于：取牛 磺胆酸钠对照品，加甲醇制成每1ml含0.1 mg~0. 5mg的溶液，滤过，取续滤液即为参照物 溶液。7. 根据权利要求5所述的蛇胆川贝液的标准特征图谱的构建方法，其特征在于：取20 批合格的蛇胆川贝液分别进行浸提操作，蛇胆川贝液的浸提步骤为：向蛇胆川贝液中加9 倍体积的50%甲醇，稀释，摇匀，室温静置20分钟，滤过，取续滤液即为标样溶液。8. 根据权利要求6所述的蛇胆川贝液的标准特征图谱的构建方法，其特征在于：取牛 磺胆酸钠对照品，加甲醇制成每1ml含0. 3mg的溶液，滤过，取续滤液即为参照物溶液。9. 一种蛇胆川贝液的质量检测方法，其步骤如下：按照标样溶液和参照物溶液的方法 制备并测定得到待测蛇胆川贝液的色谱图和牛黄胆酸钠对照品的色谱图，将待测蛇胆川贝 液的色谱图与构建的标准特征图谱比对，若待测蛇胆川贝液的色谱图中出现标准特征图谱 中相同的8个特征峰，与参照物峰相应的峰为S峰，计算各特征峰与S峰的相对保留时间。 各特征峰的相对保留时间与标准特征图谱中各特征峰的相对保留时间的相对标准偏差在 ± 5 %以内，则该蛇胆川贝液的质量合格，反之则不合格。
【专利摘要】本发明首先公开了一种蛇胆川贝液的标准特征图谱的构建方法，其次公开了一种蛇胆川贝液质量的检测方法，其步骤如下：按照标样溶液和参照物溶液的方法制备并测定得到待测蛇胆川贝液的色谱图和对照品牛黄胆酸钠的色谱图，将待测蛇胆川贝液的色谱图与构建的标准特征图谱比对，若待测蛇胆川贝液的色谱图中出现标准特征图谱中相同的8个特征峰，与参照物峰相应的峰为S峰，计算各特征峰与S峰的相对保留时间，各特征峰的相对保留时间与标准特征图谱中各特征峰的相对保留时间的相对标准偏差在±5％以内，则该蛇胆川贝液的质量合格，反之则不合格，如此可以实现快速检测判断蛇胆川贝液的质量。
【IPC分类】G01N30/02
【公开号】CN105044241
【申请号】CN201510532803
【发明人】刘道芳, 刘海兵, 谢红星, 田湘玲, 倪继红, 徐莉莉, 廖华宁
【申请人】安徽安科余良卿药业有限公司
【公开日】2015年11月11日
【申请日】2015年8月25日