水产品中28种多氯联苯快速检测前处理试剂盒及其应用
【技术领域】
[0001] 本发明属于食品安全检测技术领域，涉及水产品中28种多氯联苯快速检测前处 理试剂盒及其应用。
【背景技术】
[0002] 多氯联苯（PCBs)是一类人工合成的有机化合物，在自然条件下难以分解，具有很 高的残留性，已经被列为环境持久污染物之一。该类物质可以在动物的脂肪内富集，对生物 有"致畸、致突变、致癌"危害，且其化学性质稳定、难于被降解，同时可通过多种载体进行迀 移，并通过食物链向人体内富集。全球环境监测系统/食品规划部分（GEMS/Food)中规定了 7种多氯联苯同系物异构体作为PCBs污染状况的指示性单体（Indicator PCBs)，世界卫生 组织（WHO)又对食品中12种具有平面结构的类二噁英多氯联苯的毒性当量因子做出规定， 同时美国国家标准与技术研究院（NIST)和国家海洋和大气局（NOAA)对其他的9种多氯联 苯在环境样品、水生生物体内的含量及其毒性均高度关注。
[0003] 我国对食品中多氯联苯污染物的危害也高度关注，于2015年5月1日出台了新的 食品中多氯联苯含量测定的国家标准（GB 5009. 190-2014)，其中包括7种指示性多氯联苯 和12种具有平面结构的二噁英类结构多氯联苯。
[0004] 可见，多氯联苯已成为危害人类健康的重要因素并引起了人们广泛、高度的关注。 多个国家和地区对食品中多氯联苯类物质均设定了相应的最大残留限量（MRL)，其中欧盟 对油脂、动物肉类及其制品、奶粉、水产品及其制品等多种产品设定了最大残留量值要求， 我国也将水产动物及其制品中的残留限量设定为0. 5 mg/kg。
[0005] 当前关于食品中多氯联苯的检测方法中，前处理提取方法主要集中于索氏提取 法、振荡提取法、加速溶剂提取法、微波辅助提取法及超声波辅助提取法等；常用的净化方 法有固相萃取法、凝胶渗透色谱结合固相萃取法、基质固相萃取法及酸处理法等。实际上， 现有的标准和文献报道方法中对于水产品样品中此规定的28种多氯联苯含量未给出较快 速的检测前处理方法，存在对前处理设备要求高、选择性差、前处理操作步骤繁琐、检测耗 时长、效率低等缺点，难以满足我国相关检测机构对水产品中多氯联苯快速检测筛查的需 求。
[0006] 我国是水产品生产、加工和进出口大国，对水产品中该类物质检测的需求量巨大， 因此，针对水产品中28种多氯联苯含量的快速检测的需求，开发出实用的快速检测前处理 试剂盒及其应用方法具有重要意义。
【发明内容】
[0007] 本发明的目的在于针对现有水产品中28种多氯联苯检测前处理技术中存在的慢 速、低效、高成本、低通量等不足，开发一种操作简便、灵敏度高、结果准确且能够满足28种 多氯联苯含量同时定量检测的前处理试剂盒及其应用。该试剂盒及其应用不需要配备昂 贵的去除样品中脂肪的前处理设备，以及反复使用复杂、低效率、低通量的柱层析前处理过 程，具备检测速度快、灵敏度高、选择性强、准确性高等优点。
[0008] 为实现发明目的，本发明采用如下技术方案： 除非另有说明，本发明所采用的百分数均为质量百分数，使用试剂均为分析纯。
[0009] 一种水产品中28种多氯联苯快速检测前处理试剂盒，由试剂I和试剂II组成；试 剂I由以下原料混合而成：氯化钠1. 〇 g ;无水硫酸钠2. 0 g ;水合铝酸碳酸镁2. 0 g ;试剂 Π 由以下原料混合而成：酸化硅胶4. 0 g，无水硫酸钠2. 0 g。
[0010] 试剂I中水合错酸碳酸镁其纯度为99. 5%，平均粒径1. 5 μ m。
[0011] 试剂I的作用为去除溶剂提取过程中被共提取出的极性物质，减小后续净化步骤 的难度；减少极性物质对色谱分析系统的污染，减少色谱系统维护成本。
[0012] 试剂II中酸化硅胶的粒径范围48~75 μm。
[0013] 试剂II的作用为去除提取过程中的脂肪酸类物质、蛋白质类物质及部分脂溶性 色素。
[0014] 试剂I的配制方法为：于50 mL具塞塑料离心管中称取氯化钠 I. 0 g，无水硫酸钠 2. 0 g，水合铝酸碳酸镁2.0 g，涡旋混匀。
[0015] 试剂II的配制方法为： 1) 酸化硅胶的配制：于500 mL烧杯中称取硅胶60. 0 g，向其中添加浓硫酸40. 0 g，研 磨混匀，得到酸化硅胶100. 0 g ; 2) 称量50.0 g无水硫酸钠，并连同步骤1)中得到的酸化硅胶装入圆底烧瓶中，并将烧 瓶用旋转蒸发器旋转I h~2 h，使之混和均勾无结块； 3) 于50 mL具聚乙烯瓶盖玻璃瓶中称取6.0 g上述混合物，密封保存。
[0016] -种如上所述的水产品中28种多氯联苯快速检测前处理试剂盒的应用，包括以 下步骤： 1) 样品中多氯联苯的提取：在装有试剂I的离心管中加入水产品样品，采用二氯甲烷、 正己烷的混合溶剂对多氯联苯进行高速匀浆提取，离心，取上清液； 2) 净化：将步骤1)得到的上清液加入装有试剂II的离心管中，涡旋、离心，取上清液， 浓缩，定容，过滤和气相色谱质谱分析测试，采用基质匹配工作溶液校正定量。
[0017] 所述的步骤1)中水产品样品的加入量为2. 0 g，混合溶剂中二氯甲烷、正己烷的体 积比为1: 1，用量为30~40 mL ;所述的高速匀浆条件为：以10000~15000 rpm分散匀浆提取 1 ~3min〇
[0018] 步骤2)中所述的祸旋、离心为：祸旋0. 5~2min，以转速4000~5000r/min转速离心 3~5min ;上清液在35~45°C旋转蒸干。
[0019] 与现有技术相比，本发明具有以下优点： ① 本发明能应用于水产品中28种多氯联苯含量的同时快速测定，可以解决现有技术 对前处理设备要求高、前处理操作步骤繁琐、检测耗时长、效率低等缺点； ② 本发明具有检测速度快，灵敏度高、准确率高、选择性好、对前处理设备要求低、在常 规检测实验室中适应性好等优点； ③ 操作方法简便、回收率高、重现性好。
【附图说明】
[0020] 图1为试剂I和试剂II及其组合而成的试剂盒包装图； 图2为28种多氯联苯的标准色谱图；按照时间顺序从左至右PCBs的编号顺序为： PCB8、PCB18、PCB28、PCB52、PCB44、PCB66、PCB101、PCB81、PCB77、PCB123、PCB118、PCB114、 PCB153、PCB105、PCB138、PCB126、PCB187、PCB128、PCB167、PCB156、PCB157、PCB180、PCB169、 PCB170、PCB189、PCB195、PCB206、PCB209 ; 图3为对比例1和实施例1的对比色谱图；其中A为对比例1色谱图，B为实例1色谱 图，添加的浓度水平均为100 μ g/kg。
【具体实施方式】
[0021] 下面结合实例对本发明作进一步地说明，但本发明的保护范围并不限于此。
[0022] 实施例1 以鱼昌鱼为样品： 于装有试剂I的50 mL具塞离心管中加入鲳鱼样品2. 00 g，加入35. 0 mL的二氯甲烷 +正己烧（v/v=l/l)混合液，以11000 rpm高速分散勾衆提取I min，离心管以4500 r/min 转速离心5 min，取上清液；上清液全部倾倒于装有试剂II的50 mL具塞离心管中，涡旋1 min，离心