分离和测定苯磺贝他斯汀光学异构体杂质的方法
【技术领域】：
[0001] 本发明涉及一种分离和测定药物的光学异构体杂质的方法，具体涉及用高效液相 色谱法分离苯磺贝他斯汀及其R-异构体并定量测定该R-异构体的方法。
【背景技术】：
[0002] 苯磺贝他斯汀是非镇静类高选择性组胺Hl受体拮抗剂类药物，具抗过敏、止痒效 果。
[0003] 苯磺贝他斯汀是S-构型的手性化合物，化学名（+)-⑶-4- [4- [ (4-氯苯基） (2-吡啶）甲氧基]哌啶]丁酸苯磺酸盐，与其R-异构体在药理作用方面有较大差异，苯磺 贝他斯汀较R-异构体更优越。
[0004] 在制药过程中，往往将苯磺贝他斯汀的R-异构体作为杂质监控。因此，苯磺贝他 斯汀（s-构型）与R-异构体的分离、以及对苯磺贝他斯汀的R-异构体的含量测定，对苯磺 贝他斯汀质量的控制具有非常重要的意义。
[0005] 现有技术都是用反相液相色谱法来拆分苯磺贝他斯汀的S-构型和R-构型，当使 用正相色谱方法时，使用常用填料的色谱柱不能将苯磺贝他斯汀（S-构型）与R-异构体分 离。如专利（CN1098262C)报道采用ULTRON ES-OVM色谱柱反相液相色谱法来拆分，进口标 准（JX20060221)采用ULTRON ES-⑶反相液相色谱法来拆分。
[0006] 虽反相色谱所用试剂较便宜，但上述两种反相液相色谱拆分方法都存在明显缺 占·
[0007] ULTRON ES-⑶柱对苯磺贝他斯汀两光学异构体的分离效果不理想，且使用一个月 左右后，两异构体基本不能分离；
[0008] ULTRON ES-OVM柱填料为卵蛋白键合硅胶，对苯磺贝他斯汀及其异构体能够有效 分离，但使用一段时间后，峰型变宽，柱效明显下降，色谱柱耐用性差。
[0009] 两种方法的拆分条件和结果如表1所示：
[0010] 表1现有技术两种反相液相色谱方法比较
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【发明内容】
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[0013] 本发明的目的一是提供一种拆分苯磺贝他斯汀光学异构体的方法，不仅两光学异 构体的分离效果好，而且色谱柱耐用性较好，使用一段时间后仍能保持较高柱效。
[0014] 本发明另一目的是提供定量测定苯磺贝他斯汀中所含的R-异构体杂质的方法。
[0015] 本发明提供了一种拆分苯磺贝他斯汀光学异构体并定量测定R-异构体杂质的方 法，采用高效液相色谱法，流动相中含有正己烷和乙醇，其特征在于：
[0016] 1)采用正相液相色谱法；
[0017] 2)使用的色谱柱中所用的填料是表面涂敷有直链淀粉-三（3, 5-二甲苯基氨基甲 酸酯）的硅胶，如Chiralpak AD-H色谱柱；
[0018] 3)所述流动相中还含有碱性添加剂；
[0019] 所述碱性添加剂为含氮原子的碱性有机溶剂，优选为乙醇胺、二乙胺、三乙胺中的 一种或几种。
[0020] 所述流动相中正己烷和乙醇的体积比为：正己烷：乙醇=85~90:10~15。
[0021] 所述碱性添加剂的比例（V/V)为0. 05%~0. 15%，优选浓度为0. 05%~0. 1%。
[0022] 在本发明的一个实施例中，用Chiralpak AD-H色谱柱（4. 6 X 250mm，5 μ m，填料为 表面涂敷有直链淀粉-三（3, 5-二甲苯基氨基甲酸酯）的硅胶）；以正己烷-乙醇-乙醇 胺（87:13:0. 1)为流动相；检测波长为260nm。分别取苯磺贝他斯汀对照品与R-异构体对 照品适量，加乙醇适量超声使溶解，用正己烷稀释至刻度制成每1ml约苯磺贝他斯汀Img和 R-异构体5 μ g的混合溶液，按上述色谱条件进样20 μ 1，记录色谱图。出峰顺序依次为贝 他斯汀、R-异构体，理论板数按贝他斯汀峰计算不低于2000,贝他斯汀和相邻异构体的分 尚度不低于2. 0。
[0023] 本发明的方法经线性关系、回收率试验、检测限等方法学验证，结果证明该测定方 法准确可靠。方法学验证见实施例1。
[0024] 用本发明的方法不仅可将苯磺贝他斯汀与其光学异构体进行分离，还能够采用不 加校正因子的主成分自身对照法（见实施例2)对R-异构体的含量进行测定。
[0025] 实施例1、2给出了有效成分苯磺贝他斯汀（S-构型）与光学异构体（R-构 型）分离的研究，并对三批样品中的光学异构体进行定量测定。结果表明，本方法与专利 CN1098262C方法和进口标准（JX20060221)中的方法相比，本发明方法具有如下优点：
[0026] 1、流动相配制简单。
[0027] 2、两异构体的分离度均在4. 5~5. 5范围内·。
[0028] 3、色谱柱耐用性较好，使用一年Chiralpak AD-H色谱柱后，仍有较高的柱效。
【附图说明】：
[0029] 图1~图6是采用HPLC (高效液相色谱）方法分离苯磺贝他斯汀与R-异构体得 到的色谱图。从各图可看到，现有技术和本发明所用的三种色谱柱，各自在使用时间不同的 情况下，苯磺贝他斯汀及其R-异构体分离情况的比较：
[0030] 图1本发明所用的Chiralpak AD-H新色谱柱初次使用时；
[0031] 图2本发明所用的Chiralpak AD-H色谱柱使用一年后；
[0032] 图3现有技术所用的ULTRON ES-⑶新色谱柱初次使用时；
[0033] 图4现有技术所用的ULTRON ES-⑶色谱柱使用一个月后；
[0034] 图5现有技术所用的ULTRON ES-OVM新色谱柱初次使用时；
[0035] 图6现有技术所用的ULTRON ES-OVM色谱柱使用三个月后。
[0036] 各图中，纵座标是峰面积（单位：mV)，横座标是时间（单位：min)。
【具体实施方式】
[0037] 下面以实施例进一步解释本发明，但是本发明的保护范围并不限于这些实施例中 所使用的色谱分离的流动相、流动相的组成和使用的色谱分离柱及色谱分离柱的填料。
[0038] 以下各实验中所用色谱仪：SHIMADZU LC-2010AHT (日本岛津）；检测器：UV ;色谱 工作站：LCsolution,流速：L 0ml/min〇
[0039] 实施例1Chiralpak AD-H色谱柱正相HPLC (高效液相色谱）检测
[0040] 色谱条件
[0041] 色谱柱=Chiralpak AD-H(填料是表面涂敷有直链淀粉-三（3, 5-二甲苯基氨基 甲酸酯）的硅胶，4. 6 X 250mm, 5 μ m)
[0042] 流动相：正己烷-乙醇-乙醇胺（87:13:0. 1，V/V/V);所用正己烷、乙醇均为色谱 纯，乙醇胺为分析纯
[0043] 检测波长：260nm ;
[0044] 进样量：20 μ 1 :理论板数桉苯磺贝他斯饤峰计不低干2000
[0045] 方法：分别取苯磺贝他斯汀对照品与R-异构体对照品适量，加乙醇适量超声使溶 解，用正己烧稀释至刻度制成每1ml约苯磺贝他斯汀Img和R-异构体50 μ g的混合溶液， 照上述色谱条件进样20μ 1，记录色谱图（图1、图2)
[0046] 图1是Chiralpak AD-H色谱柱初次使用记录的色谱图；图2是该色谱柱使用一年 后，采用同样色谱方法条件记录的色谱图。分离数据见表2。
[0047] 表2Chiralpak AD-H色谱柱使用前后分离数据对比
[0048]
[0049] 从表2数据中看出：Chiralpak AD-H色谱柱使用一年后，理论板数和分离度均没 有明显变化。证明Chiralpak AD-H色谱柱对苯磺贝他斯汀及R-异构体不仅有较好的分离 效果，而且该色谱柱耐用性较好。
[0050] 本发明方法的方法学验证
[0051] 1、线性关系
[0052] 精密称取R-异构体对照品16. 49mg (含量99. 41 % )于100mL量瓶中，用8ml乙醇 超声溶解并用正己烷稀释至刻度，摇匀，作为贮备液（1);再精密量取该贮备液5ml至50ml 量瓶中，用溶剂稀释至刻度，摇匀，作为贮备液（2)。
[0053] 线性溶液的配制：分别精密量取上述贮备液（2) I. 5、2. 5ml于25ml量瓶中，用溶剂 稀释至刻度，摇匀，配制成异构体浓