一种口腔粘膜的良性病损排查与恶性病变检测试剂盒及其检测方法
【技术领域】
[0001] 本发明涉及一种检测装置试剂盒，尤其涉及一种口腔粘膜的良性病损排查与恶性 病变检测试剂盒及其检测方法。
【背景技术】
[0002] 口腔癌是指发生于口腔的恶性肿瘤，包括唇癌、牙龈癌，舌癌，软硬腭癌、颂骨癌， 口底癌、口咽癌、涎腺癌和上颂窦癌以及发生于颜面部皮肤粘膜的癌症等，口腔癌是头颈部 较常见的恶性肿瘤之一目前用于口腔癌和癌前病变的诊断技术有二类：
[0003] 1、创伤性技术：即组织病理方法，需切除患者病变组织，然后切片在显微镜下观察 组织病变情况。该方法直接，准确，但因具创伤性，有促进转移的可能性，且口腔病损组织 小，取样和切片时可能因部位偏差出现假阴性，故此法不易为病人早期介绍，而影响早期诊 断。
[0004] 2、非创伤性技术：
[0005] 脱落细胞检查法：优点为非创伤性技术，易被患者接受，但此法假阳性结果可达 37%〇
【发明内容】
[0006] 本发明针对【背景技术】中存在的问题提供了一种口腔粘膜的良性病损排查与恶性 病变检测试剂盒。
[0007] 其具体技术方案如下：
[0008] -种口腔粘膜的良性病损排查与恶性病变检测试剂盒，其特征在于：本试剂盒包 括以下组分：
[0009] (1)预检试剂：包括以下原料：摩尔浓度为0.0 lmol/L的磷酸盐缓冲液和以下质量 百分比浓度的原料：山梨酸钾0. 1~1%，牛血清白蛋白0. 01~0. 5%，余量为水；
[0010] (2)检示试剂1:包括以下原料：摩尔浓度为0.0 lmol/L的磷酸盐缓冲液和以下 质量百分比浓度的原料：碳酸氢钠1~5%、山梨酸钾0. 1~1%、牛血清白蛋白0.01~ 0.5%、孟加拉红0. 1 %~5%、十二烷基硫酸钠0.01~0.5%及5-氨基酮戊酸0.01~ 0. 5%，余量为水；
[0011] ⑶检示试剂2 :包括以下质量百分比浓度的原料：碳酸氢钠1~5%、山梨酸钾 0. 1~1%，余量为水。
[0012] 所述磷酸盐缓冲液为0. 01M，配制方法如下：
[0013] 称 7.9g NaCl，0.2g KCl，0.24g KH2P04 和 1.8g K2HP04,溶于 800ml 蒸馏水中，用 HCl调节溶液的pH值至7. 4,最后加去离子水定容至1L，保存于4°C冰箱中备用。
[0014] 所述预检试剂的配制方法为：在温度为0~4°C条件下配制磷酸盐缓冲液，再向配 制完成的磷酸盐缓冲液中依次加入山梨酸钾、牛血清白蛋白，最后用去离子水定容，在摇床 上充分混匀2~12小时即可。
[0015] 所述检示试剂1的配制方法为：在温度为0~4°C条件下配制磷酸盐缓冲液，再依 次加入山梨酸钾、碳酸氢钠、牛血清白蛋白、孟加拉红、十二烷基硫酸钠及5-氨基酮戊酸， 最后用去离子水定容，在摇床上充分混勾2~12小时即可。
[0016] 所述检示试剂2的配制方法为：先配制1~5%碳酸氢钠溶液，再依次加入山梨酸 钾，最后用去离子水定容，在摇床上充分混勾2~12小时即可。
[0017] 上述预检试剂1和预检试剂2中磷酸盐缓冲液分别作为预检试剂溶剂和检示试剂 溶剂，山梨酸钾用于试剂防腐，十二烷基硫酸钠用于增强试剂荧光效应，5-氨基酮戊酸为光 敏剂，用于增加试剂渗透性，牛血清白蛋白为酶稳定剂，用于防止试剂成分被生物酶降解， 碳酸氢钠用于调节试剂溶液PH值。
[0018] 本发明试剂盒需避光，且在-18摄氏度~室温条件下保存。
[0019] 本发明还提供一种利用上述试剂盒检测口腔粘膜的良性病损与恶性病变的方法， 步骤如下：
[0020] (1). 口腔检查，记录病变的详细情况；
[0021] (2).用洁净水漱口，去除食物残肩；
[0022] (3).取预检试剂含漱1~5分钟；
[0023] (4).用棉签蘸取检示试剂1涂擦于病变局部，染色2~10分钟；
[0024] (5) ·取检示试剂2含漱1~5分钟；
[0025] (6).对比比色板或自体激发荧光检测仪器进行半定量或定量评价染色结果。
[0026] 所述对比比色板上由浅至深设置有a、b、c、d四个色相，其制备方法如下：分别配 置al、bl、cl、dl四种溶液，然后al、bl、cl、dl四种溶液中分别浸泡滤纸，待滤纸染色完全 后，拿出晾干，置于同一载体上即得。
[0027] 所述al、bl、cl、dl四种溶液的成分与检示试剂1的成分一致，其中al中各溶质 的浓度为检不试剂1的十分之一，bl中各溶质的浓度为检不试剂1的四分之一，cl中各溶 质的浓度为检示试剂1的二分之一，dl中各溶质的浓度为检示试剂1的四分之三。
[0028] 该试剂盒可用于口腔粘膜的良性病损与恶性病变的辅助鉴别诊断，辅助临床医师 早期诊断口腔癌及监测口腔癌前病变恶变。
[0029] 本试剂盒RB试剂为独有配方，历经多年的研究与改进，配伍合理，特异性高，因为 孟加拉红直接与肿瘤细胞的DNA多聚酶特异性结合，敏感性强，对比比色板或自体激发荧 光检测仪器通过定量和半定量评价染色结果，使结果更精准，精确度更高，在临床使用中发 现，使口腔病损区域着色迅速且不易脱落，与周围正常组织着色程度差异明显。同时，本试 剂盒还增置了对比比色板或自体激发荧光检测仪器进行半定量或定量评价染色结果，使着 色结果的评判更加客观。
【附图说明】
[0030] 图1为利用本试剂盒进行口腔检测的案例图。
[0031] 图2为检测本发明染色结果的荧光光谱诊断系统示意图；
[0032] 图3为检测组织的自发荧光和利用本发明染色的荧光强度光谱图。
【具体实施方式】 [0033] 实施例1
[0034] (1). 口腔检查，记录病变的详细情况；
[0035] (2) ·用洁净水漱口，去除食物残肩；
[0036] (3).取预检试剂含漱1~5分钟；
[0037] (4).用棉签蘸取检示试剂1涂擦于病变局部，染色2~10分钟；
[0038] (5).取检示试剂2含漱1~5分钟；
[0039] (6).对比比色板或自体激发荧光检测仪器进行半定量或定量评价染色结果。
[0040] 上述所述磷酸盐缓冲液为0. 01M，配制方法如下：
[0041] 在温度为0 ~4°C条件下，称 7.9g NaCl，0.2g KCl，1.44g Na2HP04和 1.8g K2HP04， 溶于800ml蒸馏水中，用HCl调节溶液的pH值至7. 4,最后加去离子水定容至1L，保存于 4 °C冰箱中备用。
[0042] 上述预检试剂的配制方法为：在温度为0~4°C条件下配制磷酸盐缓冲液，再向配 制完成的磷酸盐缓冲液中依次加入山梨酸钾、牛血清白蛋白，最后用去离子水定容，在摇床 上充分混匀2~12小时即可；其中0.0 lM的磷酸盐缓冲液中含有以下质量百分比浓度的山 梨酸钾0. 1%、牛血清白蛋白0. 01% ;
[0043] 上述检示试剂1的配制方法为：在温度为0~4°C条件下配制磷酸盐缓冲液，再依 次加入山梨酸钾、碳酸氢钠、牛血清白蛋白、孟加拉红、十二烷基硫酸钠及5-氨基酮戊酸， 最后用去离子水定容，在摇床上充分混匀2~12小时即可，其中0.0 lM的磷酸盐缓冲液含 有以下质量百分比浓度的碳酸氢钠〇. 1 %、山梨酸钾〇. 1 %、牛血清白蛋白〇. 01 %、孟加拉 红0. 1 %、十二烷基硫酸钠0. 01 %及5-氨基酮戊酸0. 01 %;上述检示试剂2的配制方法为： 先配制1~5%碳酸氢钠溶液，再依次加入山梨酸钾，最后用去离子水定容，在摇床上充分 混匀2~12小时即可，其中碳酸氢钠1%、山梨酸钾0. 1%。
[0044] 实施例2
[0045] (1). 口腔检查，记录病变的详细情况；
[0046] (2).用洁净水漱口，去除食物残肩；
[0047] (3).取预检试剂含漱1~5分钟；
[0048] (4).用棉签蘸取检示试剂1涂擦于病变局部，染色2~10分钟；
[0049] (5).取检示试剂2含漱1~5分钟；
[0050] (6).对比比色板或自体激发荧光检测仪器进行半定量或定量评价染色结果。
[0051 ] 上述所述磷酸盐缓冲液为0. 01M，配制方法如下：
[0052] 在温度为 0 ~4°C条件下，称 7.9g NaCl，0.2g KCl，0.24g KH2P04 和 1.8g K2HP04， 溶于800ml蒸馏水中，用HCl调节溶液的pH值至7. 4,最后加去离子水定容至1L，保存于 4 °C冰箱中备用；
[0053] 上述预检试剂的配制方法为：在温度为0~4°C条件下配制磷酸盐缓冲液，再向配 制完成的磷酸盐缓冲液中依次加入山梨酸钾、牛血清白蛋白，最后用去离子水定容，在摇床 上充分混匀2~12小时即可；其中0.0 lM的磷酸盐缓冲液中含有以下质量百分比浓度的山 梨酸钾1%、牛血清白蛋白0.5% ;
[0054] 上