0yg?mL\479yg?mL^412yg?mL^441yg?mL\475yg?mL1 的储备液，于 4。。保 存。临用前，取对照品储备液适量，先用50%甲醇稀释20倍，再用大鼠空白血浆按倍数稀释 法稀释至所需浓度，即得各成分的标准工作液。
[0158] 内标溶液的配制精密称取红景天苷适量，加甲醇配成399yg?mL1的储备液，于 4°C保存。临用前，加50%甲醇稀释成500ng?mL\即得内标工作液。
[0159] 5种活性成分注射样品的配制
[0160] 芍药苷和丹酚酸B水溶性良好，注射样品时直接用适量生理盐水溶解即可；荷叶 碱水溶性差，但在酸中溶解良好，配制荷叶碱注射样品时，先用30yL冰醋酸溶解，后用适 量生理盐水稀释到合适浓度；芦丁和金丝桃苷的注射样品用吐温：乙醇：生理盐水1 :1 :8 溶液溶解并稀释至刻度。
[0161] 5种活性成分灌胃样品的配制
[0162] 称取适量芍药苷、荷叶碱、芦丁、金丝桃苷、丹酚酸B标准品于50mL烧杯中，用 0. 2%羧甲基纤维素钠水溶液搅拌混匀，呈均匀混悬药液，给药时用注射器吸取适量体积的 上述混悬液灌胃。
[0163] 7. 3. 2大鼠生物利用度试验
[0164]SD大鼠，实验前适应性喂养2d，给药前禁食12h，不禁水，给药后2h内禁水，全程 禁食。由已有各活性成分药代动力学报道可知各成分吸收程度不同，则各成分给药剂量有 所不同，静脉和口服给药剂量也有所不同，具体方案见表11。静脉给药后于〇，5，10，20，30， 60min和 2,4,6,8,12h目眦取血 0? 5mL，口服灌胃给药后于 15, 30,45,60min和 2,4,6,8,12， 24h目眦取血0. 5mL(给药后2h内，每0. 5h灌胃补充与取血量等同的生理盐水，2h后允许自 由饮水），4°C、8000r?min-1下离心lOmin，分离血浆，密封后置于-80°C冰箱保存，备用。
[0165] 表11大鼠给药方式、给药剂量与分组情况
[0166]
[0167] 7. 3. 3血浆样品的处理
[0168] 芍药苷样品制备取血浆样品或血浆稀释样品100yL，加入内标溶液 10yL(10yg?mL^，混合均勾，加入乙腈溶液500yL，漩祸混合4min沉淀蛋白， 12000r.min1离心lOmin，取450yL上清液室温下离心浓缩至干，50%甲醇-水100yL复 溶，12000r?min1离心lOmin，取上清液供UPLC分析。
[0169] 荷叶碱样品制备取血浆样品或血浆稀释样品100yL，加入内标溶液 10yL(10yg?mL^，混合均勾，加入甲醇溶液500yL，漩涡混合4min沉淀蛋白， 12000r.min1离心lOmin，取450yL上清液室温下离心浓缩至干，50%甲醇-水100yL复 溶，12000r?min1离心lOmin，取上清液供UPLC分析。
[0170] 芦丁、金丝桃苷样品制备取血浆样品或血浆稀释样品100yL，加入10yL冰乙酸， 涡漩混合4min，加入内标溶液10yL(10yg.mL3，混合均勾，加入甲醇溶液500yL，涡漩混 合4min沉淀蛋白，12000r?min1离心lOmin，取450yL上清液室温下离心浓缩至干，50% 甲醇-水100yL复溶，12000r?min1离心lOmin，取上清液供UPLC分析。
[0171] 丹酚酸B样品制备取血浆样品或血浆稀释样品IOOyL，加入25yL20%HC1，涡 漩混合4min，加入内标溶液10yL(10yg?mL^，混合均勾，加入乙酸乙酯溶液500yL，涡 漩混合4min沉淀蛋白，12000r?min1离心lOmin，取450yL上清液室温下离心浓缩至干， 50%甲醇-水100yL复溶，12000r?min1离心lOmin，取上清液供UPLC分析。
[0172] 7. 3. 4色谱条件
[0173] WatersBEHRPC18 色谱柱（2.ImmX100mm，L7ym)，流动相为乙臆（A)-〇? 1 % 甲 酸水（B)，流速0. 2mL?minS柱温35°C;进样量5yL。
[0174] 洗脱条件：芍药苷，O- 5min, 8 %A;5 - 5. 5min, 8 - 20 %A;7. 5 - 13min, 20 %A; 检测波长O~6min，275nm;6-13min，225nm。荷叶碱，O- 5min, 8%A;5 - 5. 5min, 8 - 22% A;7. 5 - 13min, 22 %A;检测波长O~6min，275nm;6-13min，270nm。芦丁和金丝桃苷， O- 5min, 8 %A;5 - 5. 5min, 8 - 24 %A;7. 5 - 13min, 24 %A;检测波长O~6min，275nm; 6-13min，360nm。丹酚酸B，O- 5min, 8 %A;5 - 5. 5min, 8 - 40 %A;7. 5 - 13min, 40 %A;检 测波长 〇 ~6min，275nm;6_13min，286nm。
[0175] 7. 3. 5 5种活性成分绝对生物利用度考察
[0176] 取已制备好的血液样品，按"7. 3. 3"项下条件处理，"7. 3. 4"项下条件分析后，由 标准曲线计算出各成分的血药浓度。以不同取血时间为横坐标，各成分血药浓度为纵坐标， 应用Excel绘制出各组药-时曲线，采用梯形面积法计算药时曲线下面积，根据公式（3)式 计算各成分在大鼠体内的绝对生物利用度：
[0178] 5种活性成分两种给药方式的AUC值和给药剂量D见表12。经计算三叶片中芍药 苷、荷叶碱、芦丁、金丝桃苷、丹酚酸B在大鼠体内口服给药绝对生物利用度见表12。
[0179] 表12 5种活性成分不同给药方式给药剂量下的AUC和生物利用度
[0180]
[0181] 通过表12中5种活性组分的绝对生物利用度可以看出，本发明提供的中药口服 速释制剂中活性成分的体外分类方法与绝对生物利用度基本具有良好的相关性。
[0182] 以上所述仅为本发明的较佳实施例而已，并非用于限定本发明的保护范围。凡在 本发明的精神和原则之内所作的任何修改、等同替换、改进等，均包含在本发明的保护范围 内。
【主权项】
1. 一种中药口服速释制剂中活性成分的体外分类方法，其特征在于，包括以下步骤： 测定目标中药口服速释制剂中目标活性成分在第一介质中的溶解度cs，并根据已确定 的溶解度Cs确定目标活性成分的单次口服最大剂量的剂量数D。； 测定所述目标活性成分在第二介质中第30分钟的累积溶出度AD3Q_;并根据AD3。_确 定出所述目标活性成分对应的溶出校正因子D; 测定所述目标活性成分在第三介质中3小时的降解率DP3h;并根据DP3h确定出所述目 标活性成分对应的降解校正因子S; 根据已确定的剂量数D。、溶出校正因子D及降解校正因子S，确定所述目标活性成分的 修正剂量数Mod-D。，所述Mod-D。=DQXDXS; 确定所述目标活性成分的渗透性参数CLogP; 根据已确定的所述目标活性成分的修正剂量数Mod-D。及渗透性参数ClogP，采用二维 象限法对所述目标活性成分进行分类。2. 如权利要求1所述的方法，其特征在于：所述剂量数D。的确定方法为：通过公式D。 =(MiAd) /Cs来计算剂量数D。，其中，M。为目标活性成分单次最大口服剂量；V。为250mL。3. 如权利要求1所述的方法，其特征在于：所述溶出校正因子D的确定方法为： 当所述厶03。_>85%时，0 = 1; 当所述AD3ftninS85%时，D= 85%/AD30nun〇4. 如权利要求1所述的方法，其特征在于：所述降解校正因子S的确定方法为： 当所述〇卩％<5%时，5 = 1; 当所述DP3hS5%时，S=DP3h/5%。5. 如权利要求1所述的方法，其特征在于：所述二维象限法为：以修正剂量数Mod-Dl^ 横坐标，以渗透性参数ClogP为纵坐标，将坐标平面分成四个区域，分别为I区、II区、III区 及IV区，其中，I区对应二维象限法的第一象限，II区对应二维象限法的第二象限，III区对 应二维象限法的第三象限，IV区对应二维象限法的第四象限； 所述对所述目标活性成分通过二维象限法进行分类，具体为： 当所述目标活性成分对应的修正剂量数Mod-D。及渗透性参数ClogP位于I区时，所述 目标活性成分为I类药物，即高溶解性、高渗透性药物；当目标活性成分对应的修正剂量数 Mod-D。及渗透性参数ClogP位于II区时，所述目标活性成分为II类药物，即低溶解性、高渗 透性药物；当目标活性成分对应的修正剂量数Mod-D。及渗透性参数ClogP位于III区时，所 述目标活性成分为III类药物，即高溶解性、低渗透性药物；当目标活性成分对应的修正剂量 数Mod-D。及渗透性参数ClogP位于IV区时，所述目标活性成分为IV类药物，即低溶解性、低 渗透性药物。6. 如权利要求1所述的方法，其特征在于：所述渗透性参数CLogP具体为： 目标活性成分的油水分配系数； 或 目标活性成分的表观渗透系数。7. 如权利要求1所述的方法，其特征在于：采用桨法测定所述目标活性成分在第二介 质中第30分钟的累积溶出度AD3Q_。8. 如权利要求1所述的方法，其特征在于：采用加速实验法测定所述目标活性成分在 第三介质中3小时的降解率DP3h。9. 如权利要求6所述的方法，其特征在于：采用体外表皮单层细胞培养通透性实验确 定目标活性成分的表观渗透系数。10. 如权利要求1所述的方法，其特征在于：所述目标中药口服速释制剂为三叶片，所 述三叶片的活性成分包括：苟药苷、荷叶碱、芦丁、金丝桃苷及丹酸酸B。
【专利摘要】本发明实施例公开了一种中药口服速释制剂中活性成分的体外分类方法，包括以下步骤：测定目标中药口服速释制剂中目标活性成分的单次口服最大剂量的剂量数D0；确定出所述目标活性成分对应的溶出校正因子D；确定出所述目标活性成分对应的降解校正因子S；根据已确定的剂量数D0、溶出校正因子D及降解校正因子S，确定所述目标活性成分的修正剂量数Mod-D0，所述Mod-D0＝D0×D×S；确定所述目标活性成分的渗透性参数CLogP；根据已确定的所述目标活性成分的修正剂量数Mod-D0及渗透性参数ClogP，采用二维象限法对所述目标活性成分进行分类。
【IPC分类】G01N33/15
【公开号】CN105223326
【申请号】CN201510611181
【发明人】王萌, 高秀梅, 张伯礼, 刘虹, 任晓亮, 张德勤, 朱彦, 刘志东, 姜苗苗, 刘亭亭, 金秀丽
【申请人】天津中医药大学
【公开日】2016年1月6日
【申请日】2015年9月23日