Hplc测定原料苯磺顺阿曲库铵含量的方法
【技术领域】
[0001] 本发明属于药物分析领域，具体设及一种HPLC测定原料苯横顺阿曲库锭含量的 方法。
【背景技术】
[0002] 2010版药典测定苯横顺阿曲库锭含量的高效液相色谱法的色谱条件为：用十八 烷基键合硅胶为填充剂；W1. 02 %憐酸二氨钟缓冲溶液（用憐酸调节抑至3. 1)-甲醇-乙 腊（75:5:20)为流动相A，W1. 02 %憐酸二氨钟缓冲溶液（用憐酸调节抑至3. 1)-甲醇-乙 腊巧0:30:20)为流动相B，按梯度进行洗脱；检测波长为280nm。
[0003]
[0004] 该方法采用的是梯度洗脱，要求仪器脱气效果好，色谱柱耐高压。并且该方法用时 较长，单针进样需用时60min，由此流动相用量也会相应加大，可谓费时耗财。
【发明内容】
[0005] 发明目的：为了解决现有技术的不足，本发明提供了一种HPLC测定原料苯横顺阿 曲库锭含量的方法，解决苯横顺阿曲库锭含量检测耗时过长的问题，同时兼顾简化配制流 动相工序，节约流动相消耗，降低检验成本。同时提高了高效液相色谱仪和色谱柱的使用寿 命等问题。
[0006] 技术方案：一种HPLC测定原料苯横顺阿曲库锭含量的方法，包括如下步骤：
[0007] (1)进样重复性
[0008] 精密称取苯横顺阿曲库锭对照品lOmg，置25ml量瓶中，加流动相定容至刻度，摇 匀，作为供试品溶液，精密量取供试品溶液20μ1，注入液相色谱仪，重复进样5次，记录色 谱图；
[000引 似系统适应性
[0010] 精密称取苯横酸阿曲库锭对照品lOmg，置100ml量瓶中，加流动相定容至刻度，摇 匀，作为系统适应性溶液，同法配制六份，精密量取系统适应性溶液各20μ1，注入液相色谱 仪，记录色谱图；
[0011] 做溶液稳定性
[001引精密称取苯横顺阿曲库锭对照品lOmg，置25ml量瓶中，加流动相定容至刻度，摇 匀，作为供试品溶液，将供试品溶液在进样盘-4°C条件下放置，分别于化、2h、4h、6h、^、 lOh、12h，精密量供试品溶液20 μ 1注入液相色谱仪，记录色谱图；
[001引（4)检测限定量限
[0014] 精密称取苯横顺阿曲库锭对照品lOmg，置25ml量瓶中，加流动相定容至刻度，摇 匀，作为供试品溶液，逐级稀释，直至信号与噪音的比值约为3:1，即为检测限浓度；
[001引精密称取苯横顺阿曲库锭对照品lOmg，置25ml量瓶中，加流动相定容至刻度，摇 匀，作为供试品溶液，逐级稀释，直至信号与噪音的比值约为10:1，即为定量限浓度，同法配 制六份；
[0016] 精密量各供试品溶液20 μ 1注入液相色谱仪，记录色谱图；
[0017] (5)回收率
[001引对照品溶液：取苯横顺阿曲库锭对照品lOmg，精密称定，置25ml量瓶中，加流动相 定容至刻度，摇匀，即得；同法配制两份；
[0019] 苯横顺阿曲库锭胆备液：取取苯横顺阿曲库锭对照品约20mg，精密称定，置25ml 量瓶中，加流动相溶解并稀释至刻度，摇匀；
[0020] 供试品溶液：取胆备液4ml、5ml、6ml各Ξ份，置10ml量瓶中，加流动相溶解并定容 至刻度，摇匀，即得；
[0021] 精密量取对照品溶液、供试品溶液各20μ1，分别注入液相色谱仪，记录色谱图，按 外标法W峰面积计算回收率；
[002引做线性
[002引苯横顺阿曲库锭胆备液：取苯横顺阿曲库锭对照品约20mg，精密称定，置25ml量 瓶中，加流动相溶解并稀释至刻度，摇匀；
[0024] 供试品溶液：精密量取该胆备液4ml、4. 5ml、5ml、5. 5ml、6ml分别置10ml量瓶中， 加乙腊稀释至刻度，摇匀，配制成浓度为320μg/ml、360μg/ml、400μg/ml、440μg/ml、 480μg/ml系列浓度的溶液；
[00巧]精密量取供试品溶液各20μ1注入液相色谱仪，每个浓度点平行进两针，记录色 谱图；
[002引（7)重复性
[0027] 对照品溶液：取苯横顺阿曲库锭对照品lOmg两份，精密称定，分别置于25ml量瓶 中，加流动相溶解并稀释至刻度，摇匀；
[0028] 供试品溶液：取苯横顺阿曲库锭样品lOmg六份，精密称定，分别置于25ml量瓶中， 加流动相稀释至刻度，摇匀；
[0029] 精密量取供试品溶液与对照品溶液各20μ1，分别注入液相色谱仪，记录色谱图， 按外标法W峰面积计算苯横顺阿曲库锭的含量；
[0030] (8)中间精密度
[0031] 同重复性试验项下的供试品溶液配制，两名分析人员于不同时间、不同仪器进行 重复性试验；
[0032] 精密量取供试品溶液与对照品溶液各20μ1，分别注入液相色谱仪，记录色谱图， 按外标法W峰面积计算苯横顺阿曲库锭的含量；
[003引（9)专属性
[0034]酸碱空白：取0.Imol/L盐酸溶液1ml，置10ml具塞试管中，加0.Imol/L氨氧化钢 溶液调抑值至中性，加流动相定容至刻度，摇匀，再取500μL上述溶液至5mL量瓶，定容， 摇匀，即得；
[003引氧化空白：取30%双氧水1ml，置10ml量瓶中，加流动相定容至刻度，摇匀，再取 500μL上述溶液至5血量瓶，定容，摇匀，即得；
[0036] 未破坏样品：取苯横顺阿曲库锭样品lOmg，置25ml量瓶中，加流动相定容至刻度， 摇匀，即得；
[0037] 酸破坏样品：取苯横顺阿曲库锭样品lOmg，置10ml具塞试管中，加0.Imol/L盐酸 溶液1ml，摇匀，于室溫放置30min后，加0.Imol/L氨氧化钢溶液调抑至中性，加流动相定 容至刻度，摇匀，再取500μL上述溶液至5mL量瓶，定容，摇匀，即得；
[003引碱破坏样品：取苯横顺阿曲库锭样品lOmg，置10ml具塞试管中，加0.Imol/L氨氧 化钢溶液1ml，摇匀，于室溫放置30min后，加0.Imol/L盐酸溶液调抑至中性，加流动相定 容至刻度，摇匀，再取500μL上述溶液至5血量瓶，定容，摇匀，即得；
[0039] 氧化破坏样品：取苯横顺阿曲库锭样品lOmg，置10ml具塞试管中，加30%过氧化 氨溶液1ml，摇匀，于室溫放置30min后，加流动相定容至刻度，摇匀，再取500μL上述溶液 至5血量瓶，定容，摇匀，即得；
[0040] 精密量取溶剂、未破坏、氧化空白、酸碱空白及上述破坏样品溶液各20μ以分别注 入液相色谱仪，记录色谱图。
[0041] 作为优化：所述（2)系统适用性中，系统适用性溶液中顺阿曲库锭及各杂质分离 良好，主峰峰面积的相对标准差小于2. 0%，保留时间的相对标准差均小于1. 0%;各物质分 离度大于1. 5,拖尾因子、理论塔板数均符合规定，系统适用性良好。
[0042] 作为优化：所述（3)溶液稳定性中，供试品溶液在12h内不同时间取样，主峰峰面 积RSD值均小于2. 0%，说明溶液在-4°C下放置12h内稳定。
[0043] 作为优化：所述（4)检测限定量限中，6份最低定量限浓度的溶液各杂质峰保留时 间的RSD值均小于2. 0 %，峰面积的RSD值均小于5. 0 %。
[0044] 作为优化：所述巧）回收率中，在高、中、低浓度下，本品回收率平均为100.8%， RSD为0. 98%(η= 9)，说明本方法回收率良好。
[0045] 作为优化：所述（6)线性中，浓度在332. 5μg/ml~498. 7μg/ml范围内，浓度狂） 与主峰面积灯）呈良好的线性关系，其线性方程为：y= 10575X+47886,R= 0. 9994。
[0046] 作为优化：所述（7)重复性中，按外标法W峰面积计算得到的六份样品含量的RSD 值为0. 53 %，小于2. 0 %，重复性良好。
[0047] 作为优化：所述（8)中间精密度中，按外标法W峰面积计算得到的六份样品含量 的RSD值为0. 64%，小于2. 0%，与重复性试验项下共十二份样品含量的RSD值为0. 56%， 小于2.0%，中间精密度良好。
[0048] 作为优化：所述（9)专属性中，破坏产生的杂质峰与主峰完全分离，已知杂质峰与 其它峰分离良好，此方法专属性良好。
[004引有益效果：本发明建立了HPLC测定苯横顺阿曲库锭含量的新色谱条件，采用等度 洗脱的方式，使得流动相的配制由配制两份变为一份，显得更加方便、省时，同时等度洗脱 更利于延长仪器W及色谱柱的寿命。本方法单针进样耗时25min，提高了检验效率，而且减 少了流动相的消耗，从而降低检验成本。
[0050] 本发明建立了HPLC测定苯横顺阿曲库锭含量的新色谱条件，即：用十八烷基键 合硅胶为填充剂，W1. 02%憐酸二氨钟缓冲溶液（用憐酸调节抑至3. 1)-甲醇-乙腊 (21:11:8)为流动相，流速1.Oml/mi