一种食品添加剂靛蓝中非色素有机物的测定方法
【技术领域】
[0001] 本发明属于食品检验技术领域，具体涉及一种食品添加剂靛蓝中非色素有机物的 测定方法。
【背景技术】
[0002] 食品添加剂靛蓝在食品生产加工中作为食品着色剂被广泛使用，产品中非色素有 机物的含量是该产品的重要质量指标，其含量多少直接体现了靛蓝产品的品质优劣，因此， 国际上许多国家及组织均对靛蓝中非色素有机物的含量进行了严格的限制，其中，国际食 品法典委员会（FA0/WH0,1992)规定食品添加剂靛蓝中靛红-5-磺酸、5磺基邻氨基苯甲酸、 邻氨基苯甲酸总量不超过0.5% ;美国食品化学品法典（FCC V)中规定靛红-5-磺酸不超 过0. 4 %，5-磺基邻氨基苯甲酸不超过0. 2 %。
[0003] 但遗憾的是我国食品添加剂靛蓝的国家安全标准尚未将非色素有机物限量指标 列入。食品添加剂中非色素有机物的检测方法主要为柱色谱法、纸色谱法和薄层色谱法以 及液相色谱法，但前三种方法因操作繁琐，影响因素多，测定精密度较差，实际检测工作中 很难被广泛采用；尚未检索到国内用液相色谱法测定食品添加剂靛蓝中非色素有机物的报 道，国外液相色谱相关测定方法提取简单且无净化步骤，色素及可溶性有机物随目标检测 物同时进入色谱系统，造成了色谱图干扰严重、洗脱驻留在色谱柱上色素及有机物时间过 长、色谱柱及检测器寿命缩短等缺陷。为了弥补上述方法弊端与缺陷，经过研究与试验，制 定了一种专门针对食品添加剂靛蓝中非色素有机物的提取、净化、浓缩以及高效液相色谱 测定分析方法。
【发明内容】
[0004] 本发明的目的在于公开了一种食品添加剂靛蓝中非色素有机物的测定方法。
[0005] 本发明的目的是通过以下技术方案实现的：
[0006] -种食品添加剂靛蓝中非色素有机物的测定方法，包括以下步骤：
[0007] (1)、靛蓝试样溶液的提取：用浓度为2. 5%的氨水溶液溶解靛蓝试样并提取三种 非色素有机物；
[0008] (2)、靛蓝试样溶液的净化和浓缩：用离子交换硅胶基SPE柱净化、浓缩三种非色 素有机物；
[0009] (3)、靛蓝试样溶液测定：对净化和浓缩后的试样溶液用高效液相色谱仪进行测 定，得到靛蓝试样中各成分的色谱图，记录色谱峰面积，并通过与标准品的标准峰面积进行 比较来测定含量；高效液相色谱仪的色谱条件为：
[0010] a、色谱柱选自柱长 250mm，内径 4. 6mm，填料 5 μπι 的 Agilent ZORBAX SB-C18 柱； 或性能相当的色谱柱；
[0011] b、保护柱选自柱长 15mm，内径 4. 6mm，填料 5 μπι 的 Agilent ZORBAX SB-C18 柱；或 性能相当的色谱柱；
[0012] c、柱温：30 °C ;
[0013] d、流动相：A栗为0· 05mol/L醋酸铵溶液，B栗为甲醇；
[0014] e、检测波长：245nm ;
[0015] f、进样体积：10 μ L。
[0016] 上述技术方案所述的一种食品添加剂靛蓝中非色素有机物的测定方法，其中，步 骤（1)的具体过程为：准确称取适量靛蓝试样，放入小烧杯中，用浓度为2. 5%的氨水溶液 溶解后，全部移入IOOmL容量瓶中，并用浓度为2. 5%的氨水溶液定容至刻度，摇匀，备用。
[0017] 上述技术方案所述的一种食品添加剂靛蓝中非色素有机物的测定方法，其中，准 确称取靛蓝试样〇. 5g，精确至0.0 Olg。本技术方案中0. 5g通常指0. 5g左右，精确至0.0 Olg 通常指单次称量要精确到小数点后第三位。
[0018] 上述技术方案所述的一种食品添加剂靛蓝中非色素有机物的测定方法，其中，步 骤（2)的具体过程为：依次用甲醇5mL、水5mL活化SPE柱，准确吸取步骤（1)获得的试样 溶液10.0 mL过此小柱；再依次用浓度为2. 5%的氨水溶液5mL和甲醇5mL淋洗，吹干小柱 后，用浓度为6 %甲酸甲醇溶液1.0 mL洗脱，洗脱液过0. 22 μ m滤膜后，供步骤（3)测定。
[0019] 上述技术方案所述的一种食品添加剂靛蓝中非色素有机物的测定方法，其中，步 骤（3)中高效液相色谱仪的梯度洗脱程序为：
[0021] 上述技术方案所述的一种食品添加剂靛蓝中非色素有机物的测定方法，其中，靛 蓝试样中非色素有机物的含量测定按式（一）计算。
[0023] 式中：
[0024] X一一试样中非色素有机物的含量，单位为质量百分数（％);
[0025] A一一样液中非色素有机物峰面积；
[0026] Cs--标准工作溶液中非色素有机物的浓度（g/mL);
[0027] V 样液定容体积（mL);
[0028] As一一标准工作溶液中非色素有机物峰面积；
[0029] m--称取的试样量（g)。
[0030] 10--样液浓缩倍数
[0031] 上述技术方案所述的一种食品添加剂靛蓝中非色素有机物的测定方法，其中，所 述方法还包括标准品色谱图的建立，包括：
[0032] ( i )标准品溶液的制备：准确称取标准品館红-5-横酸纳0· 2742g或館红-5-横 酸0. 2500g、5-磺基邻氨基苯甲酸0. 2500g、邻氨基苯甲酸0. 2500g，放入小烧杯中，用 0. 05mol/L醋酸铵溶液溶解后，全部移入IOOmL容量瓶中，并用0. 05mol/L醋酸铵溶液定容 至刻度，摇匀，备用；
[0033] 用移液枪准确移取1.0 OmL上述溶液于另一 IOmL容量瓶中，并用0. 05mol/L醋酸 铵溶液定容至刻度，摇匀，备用；对应靛红-5-磺酸酸、5-磺基邻氨基苯甲酸、邻氨基苯甲酸 标准使用溶液的浓度均为250 μ g/mL ;
[0034] ( ii )将标准品溶液注入高效液相色谱仪进行测定，得到标准品的色谱图；高效液 相色谱仪的色谱条件为：
[0035] a、色谱柱选自柱长 250_，内径 4. 6_，填料 5 μπι 的 Agilent ZORBAX SB-C18 柱； 或性能相当的色谱柱；
[0036] b、保护柱选自柱长15_，内径4. 6_，填料5 μπι的Agilent ZORBAX SB-C18柱；或 性能相当的色谱柱；
[0037] c、柱温：3(TC ;
[0038] d、流动相：A栗为0· 05mol/L醋酸铵溶液，B栗为甲醇；
[0039] e、检测波长：245nm ;
[0040] f、进样体积：10 μ L ;
[0041] g、梯度洗脱程序为：
[0043] 本发明具有以下有益效果：
[0044] 1、本发明建立了一种有效的食品添加剂靛蓝中非色素有机物的提取、净化和浓缩 的方法。
[0045] 2、本发明对试样溶液进行的净化和浓缩，有效地避免了因色素及可溶性有机物随 目标检测物同时进入色谱系统造成的色谱图干扰严重、洗脱驻留在色谱柱上色素及有机物 时间过长、色谱柱及检测器寿命缩短等缺陷。
[0046] 3、本发明确立了一种食品添加剂靛蓝中非色素有机物的高效液相色谱测定分析 条件。
[0047] 4、本发明建立的液相色谱梯度洗脱程序可以有效分离三种非色素有机物。
【附图说明】：
[0048] 1、图1为非色素有机物标准品色谱图，其中1为5-磺基邻氨基苯甲酸，2为靛 红-5-磺酸，3为邻氨基苯甲酸。
【具体实施方式】：
[0049] 为使本发明的技术方案便于理解，以下结合具体试验例对本发明公开的一种食品 添加剂靛蓝中非色素有机物的测定方法作进一步的说明。
[0050] 本发明中所用试剂材料和仪器设备：
[0051] 1、高压液相色谱分析用水指GB/T 6682中规定的一级水。
[0052] 2、醋酸铵：色谱纯；甲醇：色谱纯；甲酸：色谱纯；氨水：优级纯；
[0053] 3、醋酸铵溶液（0. 05mol/L):称取醋酸铵3. 8540g，溶于适量水中，稀释至1L。
[0054] 4、2. 5%的氨水溶液：量取氨水2. 5mL，用水稀释至100mL。
[0055] 5、6%甲酸甲醇溶液：量取甲酸6mL，用甲醇稀释至100mL。
[0056] 6、标准品：纯度彡96 %
[0057] a. 5-磺基邻氨基苯甲酸（2-氨基-5-磺基苯甲酸）。
[0058] b.靛红-5-磺酸或其钠盐。
[0059] c.邻氨基苯甲酸。
[0060] 7、离子交换硅胶基SPE柱：Bond Elut SAX阴离子交换柱，100mg/3mL，或性能相当 者。
[0061] 8、高效液相色谱仪：装有梯度洗脱附件，配有紫外检测器，配有自动进样器。
[0062] 9、分析天平：感量分别为0· OOlg和0· 000lg。
[0063] 10、正压固相萃取装置：带有氮吹功能。
[0064] 实施例1 :
[0065] 一、标准溶液的制备：
[0066] 准确称取标准品靛红-5-磺酸钠0. 2742g (或靛红-5-磺酸0. 2500g)、5-磺基邻氨 基苯甲酸0. 2500g、邻氨基苯甲酸0