用于葡萄酒农残分析的快速前处理方法及检测方法
【技术领域】
[0001] 本发明涉及用于葡萄酒农残分析的快速前处理方法以及使用该前处理方法进行 的检测方法。具体而言，本发明通过对葡萄酒样品进行快速前处理，从而采用气相色谱-质 谱分析法对葡萄酒中多种农药的残留量同时进行检测。
【背景技术】
[0002] 杀菌剂是对病原微生物有杀死作用或抑制生长作用的药剂，应用范围广。酿酒葡 萄易感染真菌性疾病，因此在种植过程中需多次喷撒杀菌剂，包括硫制剂、铜制剂、胺类、芳 香族类、苯并咪唑类、二酰亚胺类三唑类等。杀虫剂和除草剂也是防止有害生物保护植株的 重要农药，常用的包括有机磷类、有机氯类、拟除虫菊酯类、氨基甲酸酯类和二苯醚类等。残 留的农药不仅抑制酒精发酵，也使葡萄酒产品对人体健康构成潜在威胁。
[0003]葡萄酒是新鲜葡萄或葡萄汁经过发酵获得的饮料，含有大量的多酚、糖、色素、维 生素和矿物质，基质复杂，对痕量的农药残留检测存在严重干扰。需对葡萄酒样品进行适当 的前处理后，再采用气相色谱-质谱法同时定性定量分析多种农药残留。目前，国内外研究 葡萄酒中农药残留的前处理方法主要有液液萃取、振荡提取、固相萃取、固相微萃取、凝胶 渗透色谱等方法，这些方法操作具有诸多缺点，如步骤较多，耗时较长，操作人员需与大量 的有机溶剂接触，污染环境，且成本较高。
【发明内容】
[0004] 针对上述技术问题，本领域迫切需要能够缩短样品前处理时间、节省溶剂、降低成 本的检测方法。
[0005] 对此，本发明的目的在于克服现有样品前处理技术处理时间长、消耗溶剂多等缺 点和不足，使用快速、有效和低成本的样品前处理过程，能够对葡萄酒中多种农药的残留量 同时进行检测。
[0006] 本发明的第一方面涉及对葡萄酒进行前处理的方法，该葡萄酒是待进行农药残 留量检测的样品，该前处理方法包括如下步骤：
[0007] (1)提取：向所述葡萄酒中加入内标物、含1 %乙酸的乙腈、氯化钠、无水乙酸钠， 振摇，然后在冰袋的存在下超声提取，再加入干燥剂后振摇，然后离心分离；
[0008] (2)净化：将由所述步骤（1)中得到的上清提取液与吸附剂和干燥剂混合，振摇， 再尚心分尚；
[0009] (3)浓缩：将由所述步骤（2)中得到的上清净化液浓缩，通过滤膜进行过滤，以待 进一步的农药残留量检测。
[0010] 在优选的实施方式中，本发明所述的前处理方法可具有如下技术特征中的一项 或多项：内标物为环氧七氯B;步骤（1)中的干燥剂为无水硫酸镁；吸附剂为石墨化炭黑 和N-丙基乙二胺键合硅胶；步骤（2)中的干燥剂为无水硫酸镁；步骤（3)中的浓缩采用在 30°C下氮吹的方式进行；所述滤膜是孔径为0. 22μm的尼龙滤膜。
[0011] 在优选的实施方式中，各试剂的用量为：葡萄酒l〇g;含1%乙酸的乙腈20mL;氯 化钠4g;无水乙酸钠lg;步骤（1)中的干燥剂6g;作为吸附剂的石墨化炭黑25-100mg，优 选50mg;作为吸附剂的N-丙基乙二胺键合硅胶100-300mg，优选250mg;步骤⑵中的干燥 剂lg。在进一步优选的实施方式中，在所述步骤（2)中，使用10mL由所述步骤（1)中得到 的上清提取液；和/或在所述步骤（3)中，使用5mL由所述步骤（2)中得到的上清净化液。
[0012] 在一个非常优选的实施方式中，所述方法包括如下步骤：
[0013] (1)提取：向l〇g所述葡萄酒中加入环氧七氯B，加入20mL含1%乙酸的乙腈、4g 氯化钠、lg无水乙酸钠，振摇2min，然后在冰袋的存在下超声提取20min，再加入6g无水硫 酸镁后振摇2min，然后以3000r/min离心分离5min;
[0014] (2)净化：将10mL由所述步骤⑴中得到的上清提取液与50mg石墨化炭黑、250mg N-丙基乙二胺键合硅胶和lg无水硫酸镁混合，振摇2min，再以6000r/min离心分离3min;
[0015] (3)浓缩：将5mL由所述步骤（2)中得到的上清净化液在30°C下用氮吹的方式浓 缩至lmL，通过孔径为0. 22μπι的尼龙滤膜进行过滤，以待进一步的农药残留量检测。
[0016] 在进一步优选的实施方式中，步骤（1)在50mL离心管中进行，步骤（2)在15mL聚 丙烯离心管中进行，步骤（3)在带有精准刻度的5mL玻璃离心管中进行。
[0017] 本发明的第二方面涉及对葡萄酒进行农药残留量检测的方法，该检测方法包括使 用本发明第一方面所述的前处理方法对葡萄酒进行前处理的步骤。在优选的实施方式中， 在前处理步骤完成后通过GC/MS进行农药残留量检测。
[0018] 本发明所述前处理方法能够实现对将要进行农残检测的葡萄酒样品进行快速的 前处理，其步骤少，耗时短，无需大量的有机溶剂，十分环保，且成本较低。
[0019] 本发明所述前处理方法的一个重要特征是在冰袋的存在下进行超声提取。虽然通 过例如将提取液体系在冰箱中冷藏一定时间再进行提取也能达到类似的提取效果，但这样 会大大增加步骤（1)所需要的时间，对于实现快速前处理是不利的。如果控制室温或超声 机水浴的温度（例如通过空调或恒温传感控制装置）来缩短时间，又会明显增加检测成本， 也不利于本方法在酒厂的实际应用。事实上，采用冰袋来降低超声工序期间的温度，不仅能 够实现快速提取，同时由于冰袋可以重复利用，使得本发明的方法在时间和经济成本两方 面都具有明显的优势。
[0020] 此外，虽然现有技术中存在一些针对水果、蔬菜、中草药等样品的农残检测前处理 技术，但其所针对的样品基质与本发明的葡萄酒基质相差较大（即使是水果葡萄的基质也 与葡萄酒基质不同）。葡萄酒是采用专用的酿酒葡萄，以新鲜的葡萄或葡萄汁为原料，经过 发酵产生的含一定酒精度的产品。酿酒葡萄与水果葡萄相比，其糖分、酸度和酚类物质（主 要是单宁）含量更高；经酵母发酵和橡木桶陈酿后，葡萄酒中还含有12-14%的酒精、高级 醇和酯、橡木内酯等物质。因此，不宜用针对其它基质的已有前处理方法对葡萄酒样品进行 处理。
【附图说明】
[0021] 图1是0. 100μg/mL52种农药标准品总离子流色谱图。
【具体实施方式】
[0022] 在本发明的下述示例性的【具体实施方式】中，所使用的仪器包括：7890A_5975C气 相色谱-质谱仪（美国Agilent公司）、TG16-II台式高速离心机（长沙平凡仪器仪表有限 公司）、BSA224S-CW电子天平（德国赛多利斯集团）、SB-3200DTDN超声波清洗机（宁波新 芝生物科技股份有限公司）、TTL-DCII氮吹仪（同泰联科技发展有限公司）、QL-902旋涡 混合器（海门其林贝尔仪器制造有限公司）。
[0023] 在本发明的下述示例性的【具体实施方式】中，所使用的农药标准品包括：霜霉威、 内吸磷、杀虫脒、甲拌磷、特丁硫磷、嘧霉胺、百菌清、磷胺、七氯、杀螟硫磷、马拉硫磷、倍 硫磷、对硫磷、腐霉利、苯线磷、丙溴磷、氟娃唑、除草醚、p,P'-DDE、p,P'-DDD、0,P'-DDT、 p，p'-DDT、戊唑醇、氟环唑、氯菊酯、咪鲜胺、嘧菌酯、敌敌畏、仲丁威、灭线磷、治螟磷、 α-666、β-666、γ-666、δ-666、地虫硫磷、氯唑磷、甲基对硫磷、甲霜灵、艾氏剂、乙霉威、 毒死蜱、己唑醇、狄氏剂、腈菌唑、异狄氏剂、烯唑醇、丙环唑、炔螨特、甲氰菊酯、蝇毒磷、氰 戊菊酯（德国Dr.EhrenstorferGmbH公司）。
[0024] 在本发明的下述示例性的【具体实施方式】中，所使