[0045] 被用作检测胰腺癌的标记物的ABAT(4-氨基丁酸转氨酶）也被称为GABA氨基转 移酶或4-氨基丁酸氨基转移酶，并参与在中枢神经系统中作为神经抑制物质的GABA到琥 珀酸半醛的分解。ABAT是包含50kD亚基的同源二聚体，其与5-磷酸吡哆醛形成复合物。 ABAT的缺陷引起例如智力迟钝、肌无力、反射亢进、昏睡、难治性癫痫的症状和脑电波问题。 但是，目前尚不知ABAT可作为检测胰腺癌的标记物。
[0046] 本发明人证实了ABAT用作检测胰腺癌的标记物，从而以高灵敏度和可靠度有效 地诊断出受试者的胰腺癌发病或发病的可能性。具体地，本发明人分析了患有胰腺导管腺 癌（PDAC)、管内乳头状黏液瘤（IPMN)和慢性胆囊炎的受试者的血清样品，鉴定ABAT作为在 胰腺癌中过表达的生物标记物，并通过分析患非乳腺癌的正常受试者的血清样品验证了胰 腺癌的有效生物标记物。
[0047] 本公开内容提供了用于诊断胰腺癌的组合物，其包含用于测量ABAT蛋白（4-氨 基丁酸转氨酶；GenBank登录号：NP_001120920. 1)的蛋白表达水平或编码ABAT蛋白的基 因的mRNA表达水平；以及CHI3L1蛋白（几丁质酶-3-样蛋白1前体；GenBank登录号： NP_001267. 2)的蛋白表达水平或编码CHI3L1蛋白的基因的mRNA表达水平的试剂。
[0048] 在本发明中，ABAT与CHI3L1的结合物用作检测胰腺癌的标记物，从而有效地诊断 受试者的胰腺癌发病或发病的可能性。
[0049] 在使用ABAT与CHI3L1的结合物诊断胰腺癌的组合物中，ABAT与上文所述相 同。用作检测胰腺癌的标记物的CHI3L1 (几丁质酶-3-样蛋白1前体；GenBank登录号： NP_001267. 2)也被称为软骨糖蛋白39,其属于糖基水解酶18家族。ABAT是包含50KD亚基 的同源二聚体，其与5-磷酸吡哆醛形成复合物。CHI3L1是一种分泌到细胞外的糖蛋白，其 表达在乳腺癌、肠癌、前列腺癌、卵巢癌、甲状腺癌、肺癌、肝癌等癌症中增加。但是，目前尚 不知ABAT与CHI3L1的结合物可作为检测胰腺癌的标记物。
[0050] 本发明人证实了ABAT与CHI3L1的结合物用作检测胰腺癌的标记物，从而以高灵 敏度和可靠度有效地诊断出受试者的胰腺癌发病或发病的可能性。具体地，本发明人分析 了患有胰腺导管腺癌（PDAC)、管内乳头状黏液瘤（IPMN)和慢性胆囊炎的受试者的血清样 品，鉴定ABAT作为在胰腺癌中过表达的生物标记物以及CHI3L1作为在胰腺癌中低表达的 生物标记物，并通过分析患非乳腺癌的正常受试者的血清样品验证了胰腺癌的有效生物标 记物。
[0051] 在胰腺癌的情况下，本文使用的术语"测量蛋白表达水平"意指检测和鉴定生 物样品中胰腺癌的诊断标记物（蛋白）或编码其的基因的存在和表达水平。用于测 量或比较分析蛋白的方法的实例包括但不限于：蛋白芯片测定、免疫测定、配体结合测 试、MALDI-T0F(基质辅助激光解吸/电离飞行时间质谱）、SELDI-T0F(表面增强激光解 吸/电离飞行时间质谱）、放射免疫测定、放射免疫扩散、双向免疫扩散（Ouchterlony immunodiffusion)、火箭免疫电泳、免疫组化染色、补体结合试验、2-D电泳、液相色谱-质 谱（LC-MS)、液相色谱-质谱/质谱（LC-MS/MS)、免疫印迹、和ELISA(酶联免疫吸附试验）。
[0052] 在本公开内容的用于诊断胰腺癌的组合物中，用于测量ABAT或CHI3L1的蛋白表 达水平的试剂可包含可特异性结合至蛋白ABAT或CHI3L1的抗体、寡肽、配体、PNA(肽核 酸）或适体。
[0053] 本文使用的术语"抗体"是指特异性结合抗原以引发抗原-抗体反应的物质。出 于本公开内容的目的，术语"抗体"意指特异性结合至ABAT或CHI3L1蛋白的抗体。落入本 公开内容的抗体的范围的是多克隆抗体、单克隆抗体和重组抗体。使用本领域熟知的技术 可容易地制备这些抗体。此外，可用于本公开内容的抗体可以是由两条全长轻链和两条全 长重链组成的完整抗体、或是完整抗体分子的功能片段。术语抗体分子的"功能片段"意指 保留抗体结合功能的片段，例如Fab、F(ab'）、F(ab'）2和Fv。
[0054] 本文使用的术语"PNA(肽核酸）"是指与DNA或RNA相似的人工合成的聚合物， 1991年由Nielsen、Egholm、Berg和Buchardt(哥本哈根大学，丹麦）教授首次引入。 DNA具有磷酸-核糖骨架，而PNA的骨架由通过肽键连接的重复的N-(2-氨基乙基）-甘 氨酸单元构成。由于这种结构，PNA显著增强DNA或RNA的亲合力及稳定性，因此有效 地用于分子生物学研究、诊断、和反义疗法。对于PNA的详细说明，可参考文献[Nielsen PE,EgholmM,BergRH,Buchardt0 (1991 年 12 月）·''Sequence-selectiverecognition ofDNAbystranddisplacementwithathymine-substitutedpolyamide".Science 254(5037):1497-1500]。
[0055] 本文使用的"适体"是结合至特定靶分子的寡核苷酸或肽分子。对于适体的详 细说明，可参考文献[BockLCetal·，Nature355 (6360) :5646 (1992) ;Hoppe-Seyler F,ButzK〃Peptideaptamers:powerfulnewtoolsformolecularmedicine".JMol Med. 78 (8) :42630(2000);CohenBA,ColasP，BrentR."Anartificialcell-cycle inhibitorisolatedfromacombinatoriallibrary^.ProcNatlAcadSci USA. 95(24) :142727 (1998) ]〇
[0056] 在胰腺癌的情况下，本文使用的术语"测量mRNA表达水平"意指检测和鉴定生物 样品中编码诊断标记物（蛋白）的基因的mRNA的存在和表达水平。在本公开内容中，可 用于测量mRNA表达水平的分析方法的实例包括反转录聚合酶链式反应（RT-PCR)、竞争性 RT-PCR、实时RT-PCR、核糖核酸酶保护测定（RPA)、RNA印迹和DNA芯片，但不限于此。
[0057] 在本公开内容的用于诊断胰腺癌的组合物中，用于测量编码ABAT或CHI3L1的基 因的mRNA表达水平的试剂包含特异性结合至编码ABAT和CHI3L1的基因的mRNA的引物、 探针或反义核苷酸。关于ABAT和CHI3L1蛋白的信息可通过UniProt获得，本领域技术人 员可基于该信息设计特异性结合至编码该蛋白的基因的mRNA的引物、探针或反义核苷酸。
[0058] 本文使用的术语"引物"是识别靶基因序列的短核酸序列的链，其包括一对正反向 引物。具体地，所述"引物"包括一对提供特异性和灵敏度的分析结果的引物。弓丨物被认为 在用于扩增靶基因序列时提供高度特异性，但它不引起与靶基因序列不一致或互补的非靶 序列的扩增。
[0059] 本文使用的术语"探针"是指特异性结合至样品中待检测的靶标的物质。通过所述 结合，探针可确定样品中靶标的存在。只要它通常用于本领域中，任何探针都可用于本公开 内容。特别地，所述探针可以是PNA(肽核酸）、LNA(锁核酸）、肽、多肽、蛋白、RNA或DNA， 最优选PNA。具体地，所述探针是一种生物材料，其可以来自有机体或可以体外合成、或是 其模拟物。例如，所述探针可以是酶、蛋白、抗体、微生物、动物或植物细胞或器官、神经元、 DNA或RNA。DNA可包括cDNA、基因组DNA和寡核苷酸。同样地，基因组RNA、mRNA和寡核苷 酸可落入RNA的范围内。蛋白的实例包括抗体、抗原、酶和肽。
[0060] 本文使用的术语"反义"是指具有核苷酸碱基序列和亚基-亚基骨架的寡聚体，所 述骨架允许反义寡聚体通过Watson-Crick碱基配对与RNA中的靶序列杂交以在靶序列中 形成RNA:寡聚体异源双链核酸分子。
[0061] 在一个实施方案中，本发明提供了用于诊断胰腺癌的组合物，其进一步包括用于 测量CA19-9蛋白（糖抗原19-9)的蛋白表达水平或编码CA19-9蛋白的基因的mRNA表达 水平的试剂。特别地，本发明的组合物可包括用于测量ABAT和CA19-9蛋白的表达水平或 编码ABAT和CA19-9蛋白的基因的mRNA表达水平的试剂。此外，所述组合物可包括ABAT、 CHI3L1 (几丁质酶-3-样蛋白1前体；GenBank登录号：NP_001267. 2)和CA19-9蛋白的蛋 白表达水平、或编码ABAT、CHI3L1和CA19-9蛋白的各基因的mRNA表达水平。
[0062]已知CA19-9 蛋白是胰腺癌的标记物[SafiF.etal.，"Diagnosticimportance ofthetumormarkerCA19_9inpancreaticcancer",DtschMedffochenschr 109(49):1869-73(1984);WangFMet.al·，"ThesignificanceofCA19_9tumorantigen intheserumofpatientswithcarcinomas".ProcNatlSciCouncRepubChinaB,Apr 9 (2) : 119-25 (1985)]。ABAT和CA19-9 这两个标记物、或ABAT、CHI3L1 和CA19-9 这三个标 记物的测量值可提供更精确和有效的胰腺癌诊断。
[0063] 此外，本公开内容提供了用于诊断胰腺癌的试剂盒，其包含用于诊断胰腺癌的组 合物。例如，所述试剂盒可以是RT-PCR试剂盒、DNA芯片试剂盒、ELISA试剂盒、蛋白芯片试 剂盒、快速试剂盒、或MRM(多反应监测）试剂盒。
[0064] 例如，所述诊断试剂盒可进一步包含反转录聚合酶链式反应所必需的元件。 RT-PCR试剂盒包含一对特异性针对编码标记物蛋白的基因的引物。各引物是具有特异 性针对所述基因的核酸序列的序列的核苷酸，其长度可为约7至50bp，更特别为约10至 39bp。此外，所述试剂盒可进一步包含特异性针对对照基因的核酸序列的引物。此外，所述 RT-PCR试剂盒可包含测试管或合适的器皿、反应缓冲液（不同pH值和镁浓度）、脱氧核苷 酸（dNTP)、酶（例如Taq聚合酶和反转录酶）、脱氧核糖核酸酶抑制剂、核糖核酸酶抑制剂、 DEPC-水、和无菌水。
[0065] 此外，本公开内容的诊断试剂盒可包含用于操作DNA芯片所必需的元件。所述DNA 芯片试剂盒可包含与基因或cDNA或相当于其片段的寡核苷酸结合的底物、及用于构建荧 光标记的探针的试剂、药剂和酶。此外，所述底物可包含对照基因或cDNA或相当于其片段 的寡核苷酸。