乳制品中氯霉素类残留的检测方法
【技术领域】
[0001] 本发明设及食品检测领域，具体的，本发明设及一种乳制品中的氯霉素类残留的 检测方法。
【背景技术】
[0002] 氯霉素、甲讽霉素、氣苯尼考(氣甲讽霉素)一般对革兰氏阴性菌的作用较革兰氏 阳性菌强。氯霉素、甲讽霉素、氣苯尼考(氣甲讽霉素)在动物中具有较高的治疗指数，曾是 兽医临床常用的抗生素。氯霉素、甲讽霉素、氣苯尼考(氣甲讽霉素)类的主要毒副作用是抑 制造血机能，发生不可逆转的再生障碍性贫血。人和幼龄动物对氯霉素、甲讽霉素、氣苯尼 考(氣甲讽霉素)均非常敏感。欧盟、中国W及许多国家将氯霉素、甲讽霉素、氣苯尼考(氣甲 讽霉素)列为食品动物禁用兽药，在动物性食品中规定氯霉素、甲讽霉素、氣苯尼考(氣甲讽 霉素)是不得检出的。但是，一些违法使用氯霉素、甲讽霉素、氣苯尼考(氣甲讽霉素）的现象 非常严重，已经造成严重国际影响。
[0003] 氯霉素易溶于乙酸乙醋、甲醇，微溶于水，不溶于正已烧。目前氯霉素残留的检测 方法大致可分为3大类:微生物测定法、免疫分析法和化学方法。确证主要采用液相色谱-质 谱联用化C-MS/MS)和气相色谱质谱联用(GC-MS)。在仪器测定中，往往需要复杂的样品中氯 霉素的提取和净化，称为前处理。氯霉素残留测定的前处理一般利用萃取法，提取试剂有乙 酸乙醋、正乙烧等，如国家标准GB29688-2013《食品安全国家标准牛奶中氯霉素残留量的测 定液相色谱-串联质谱法》，一般包括：W乙酸乙醋为提取溶剂，利用正己烧脱脂，同位素内 标法测定产品中氯霉素药物残留。
[0004] 目前运些方法都不能避免乙酸乙醋提取过程中产生的乳化现象，会使得氯霉素的 提取不完全，而目前一般采用内标法来避免运一问题带来的检测不准确，但由于内标物质 价格昂贵，检测单个样品成本会较高。
【发明内容】
[000引本发明旨在解决现有技术中的问题的至少之一或者至少提供一种商业选择。为 此，本发明的一个目的是提供一种不需内标的乳制品中的氯霉素类残留的检测方法。
[0006]依据本发明的一方面，本发明提供一种乳制品中氯霉素类残留的检测方法，所述 氯霉素类包括氯霉素、甲讽霉素和氣苯尼考，该方法包括:对待测样品进行前处理，其中包 括:称取ml克待测样品，加入vl毫升乙酸乙醋提取，W获得第一提取物，利用v2毫升甲醇溶 解所述第一提取物，加入v3毫升正己烧混匀，离屯、弃去上层，W获得第二提取物，利用固相 萃取柱净化所述第二提取物，W获得净化物;利用液相-串联质谱仪分析所述净化物，W检 测所述待测样品中的氯霉素类残留；其中，ml小于等于5，vl小于20，v2小于l，v3小于8。所称 乳制品指，使用牛乳或羊乳及其加工制品为主要原料，加入或不加入适量的维生素、矿物质 和其他辅料，使用法律法规及标准规定所要求的条件，加工制作的产品。乳制品包括液体 乳，例如己氏杀菌乳、灭菌乳、调制乳、发酵乳等;乳粉，例如全脂乳粉、脱脂乳粉、部分脱脂 乳粉、调制乳粉、牛初乳粉;w及其他乳制品，例如奶油、奶酪等。
[0007] 本发明的运一方面的方法不需加入内标例如気代氯霉素，能避免检测过程中的乳 化现象，降低基质对检测的干扰，同时检测氯霉素类药物，灵敏度高、回收率高、节约成本且 易操作。
[0008] 根据本发明的实施例，上述本发明运一方面的检测乳制品中的氯霉素残留的方法 还可W具有W下附加技术特征至少之一：
[0009] 本发明的运一方面的方法中的步骤W及各步骤条件是根据乳制品的特性而多次 试验简化步骤、优化条件而确定的。例如，相较于国标法中取试料lOg，该方法称取的待测样 品小于或者等于5g，运是由于乳制品富含蛋白质、脂肪、碳水化合物等，发明人试验发现，如 果称样量过大，乙酸乙醋提取时，乳化现象尤其严重，大大影响提取效果及检测准确性，而 称样量过小，会影响检出限，因此多次试验不同类型的乳制品，发明人确定出乳制品氯霉素 类残留检测的较佳称样量为lg-5g。再例如，相较于国标法中两次乙酸乙醋提取W及利用 4%氯化钢溶液溶解第一提取物，本发明的运一方法只需结合一次乙酸乙醋提取W及利用 v2毫升的甲醇溶解第一提取物，就能达到很好的提取效果。
[0010] 乳制品的类型大致可分为W下几类：第一类是液体乳类，主要包括杀菌奶、发酵 奶、酸奶、调制乳等;第二类是乳粉类，包括全脂乳粉、脱脂乳粉、全脂加糖乳粉、调味乳粉、 婴幼儿乳粉和其他配方乳粉;第Ξ类是炼乳类;第四类是乳脂肪类，包括稀奶油、奶油、无水 奶油等;第五类是干酪类;第六类是乳冰洪淋类;第屯类是其他乳制品类，主要包括干酪素、 乳糖、奶片等。
[0011] 根据本发明的一个较佳实施例，当所述待测样品为液体乳类时，ml= 5。如此，能够 减轻乳化现象，利于高效提取液体乳类中的氯霉素类残留，W及利于利用该方法进行准确 检测。
[0012] 根据本发明的实施例，当待测样品为液体乳类时，所述称取ml克待测样品，加入VI 毫升乙酸乙醋提取，W获得第一提取物，包括依次进行W下：加入15毫升乙酸乙醋，满旋混 匀，超声提取20min，1000化/min下离屯、lOmin，取7.5毫升的上清液，于40°C± 2氮气吹干所 述7.5毫升的上清液，W获得所述第一提取物。上述具体的试剂的使用量W及操作条件，是 发明人多次试验、组合优化的，利于操作简便、高效的提取5g液体乳类中的包含氯霉素类残 留的第一提取物。
[0013] 根据本发明的一个较佳实施例，当所述待测样品为乳粉类时，ml=l。如此，能够减 轻乳化现象，利于高效提取液体乳类中的氯霉素类残留，W及利于利用该方法进行准确检 测。
[0014] 根据本发明的实施例，当所述待测样品为乳粉类时，所述称取ml克待测样品，加入 VI毫升乙酸乙醋提取，W获得第一提取物，包括依次进行W下:加入5毫升超纯水溶解所述 待测样品，加入15毫升乙酸乙醋，满旋混匀，超声提取20min，1000化/min下离屯、lOmin，取 7.5毫升的上清液，于40°C±2氮气吹干所述7.5毫升的上清液，W获得所述第一提取物。上 述具体的试剂的使用量W及操作条件，是发明人多次试验、组合优化的，利于操作简便、高 效的获得Ig乳粉类中的包含氯霉素类残留的第一提取物。
[0015] 根据本发明的一个较佳实施例，当所述待测样品为乳脂肪类和/或干酪类时，ml= 2。
[0016] 根据本发明的实施例，当所述待测样品为乳脂肪类和/或干酪类时，所述称取ml克 待测样品，加入VI毫升乙酸乙醋提取，W获得第一提取物，包括依次进行W下:加入5毫升超 纯水和5毫升正己烧满旋溶解所述待测样品，弃上清液后加入15毫升乙酸乙醋，满旋混匀， 超声提取20min，1000化/min下离屯、lOmin，取7.5毫升的上清液，于40°C± 2氮气吹干所述 7.5毫升的上清液，W获得所述第一提取物。对于运类脂肪含量高的乳制品，在乙酸乙醋提 取前先利用适量正乙烧除脂，能够降低乙酸乙醋提取时的乳化现象。上述具体的试剂的使 用量W及操作条件，是发明人多次试验、组合优化的，利于操作简便、高效的获得2g乳脂肪 类乳制品中的包含氯霉素类残留的第一提取物。
[0017] 根据本发明的实施例，在获得各类乳制品的第一提取物后，所述利用v2毫升甲醇 溶解所述第一提取物，加入v3毫升正己烧混匀，离屯、弃去上层，W获得第二提取物，包括依 次进行W下:加入0.5mL甲醇溶解所述第一提取物，接着加入5mL超纯水稀释后满旋混匀，再 加入5mL正己烧，满旋混匀，300化/min下离屯、2min，弃去上层液体，W获得所述第二提取物。 甲醇能使第一提取物中的氯霉素类更好的溶解。离屯、后所称的上层液体为正己烧液。上述 具体的试剂的选择、使用量W及操作条件，是发明人多次试验、组合优化的，利于操作简便、 高效的获得各类乳制品中的包含氯霉素类残留的第二提取物。运里，相较于国标法的二次 正己烧提取，该方法在保证提取效果的同时，操作简单、节约时间。发明人在氮吹后溶剂及 其添加量的选择过程中，分别选用了 〇.5mL甲醇、l.OmL甲醇、l.OmL纯水对吹干后加标样品 进行溶解，再加入5mL纯水稀释、过净化柱、制备样品、上机进行测定，结果表明用0.5mL甲醇 溶解的回收率最好，在90%W上，加入1.OmL甲醇和1.OmL纯水溶解的效果不佳，回收率都