肝损伤类型的检查方法
【技术领域】
[0001] 本发明设及一种肝损伤的检查方法，详细而言设及一种判断肝损伤类型的检查方 法。更详细而言，本发明设及一种判断肝损伤类型的检查方法，其中测定从受试者采取的生 物学试样中的LCA浓度，将测定的LCA浓度作为指标。
【背景技术】
[0002] 肝脏是附属于消化道的腺组织，其具有胆汁的生成分泌、解毒作用、糖代谢、蛋白 质代谢、血液凝固因子的生成、激素调节作用W及脂肪、糖原、蛋白质和维生素等各种生体 构成要素的储存等对生体重要的多种功能。因此，运些功能在受到病毒感染、药物或毒物、 酒精的过量摄入等原因引起的急性的或慢性的损伤时，肝脏功能稳态的保持被破坏，产生 重大的健康损伤。人体检查等中发现的疾病中肝功能损伤占据的比例高，据说日本成人约 30 %具有肝功能损伤。
[0003] 肝疾病所包含的疾病，根据其原因或临床症候进行分类。例如，根据其原因，能够 分类为病毒性肝炎、药剂性肝损伤、酒精性肝损伤、自身免疫性肝损伤、代谢损伤性肝损伤 等。另外，根据其临床症候不同，能够分类为肝细胞损伤型和胆汁渺积型。肝细胞损伤见于 病毒性肝炎、中毒性肝损伤、脂肪肝、肝硬化等。肝细胞损伤因肝细胞的坏死、脂肪化、多核 细胞化、核的液泡变性化等而发生。肝细胞也称为肝实质细胞，其是构成肝脏的细胞之一， 占肝脏的绝大多数。肝细胞是分泌胆汁的外分泌细胞，同时也是将血浆蛋白分泌至顶膜侧， 积累糖原调节血糖的内分泌细胞。因此，肝细胞受到损伤时会引起肝功能的显著的降低。胆 汁渺积是因来自肝脏的胆汁的排泄因某些原因受到阻碍而产生的，最终，导致肝内或肝外 的胆道系统的一部分或整体上胆汁的流出变异常，在肝脏和血中胆汁滞留，引起黄痘或肝 炎等诸症状。
[0004] 现在，肝疾病的诊断和治疗使用将患者的症状和血清生化学参数的值作为指标， 医师根据经验诊断肝损伤类型开始治疗的手法(非专利文献1)。作为生化学参数，使用因肝 细胞损伤而从肝细胞释放的酶，具体而言，谷草转氨酶下简写为AST;也称为谷氨酸-草 酷乙酸转氨酶(GOT))、谷丙转氨酶（W下简写为ALT;也称为谷氨酸-丙酬酸转氨酶(GPT))、 丫-谷氨酷转肤酶下简写为丫-GTP)、碱性憐酸酶下简写为ALP)等。
[0005] 此外，通常在非临床W及临床上，进行总胆汁酸（total bile acids下简写为 TBA)的测定。胆汁酸是在哺乳动物的胆汁中广泛发现的酱体衍生物中具有胆酸骨架的化合 物的总称，是在脂肪的消化吸收发挥重要作用的胆汁的主要成分。胆汁酸由肝脏的肝细胞 通过胆固醇(化olesterol)代谢而生成（图1)，在与甘氨酸或牛横酸(氨基酸乙横酸)等结合 后，作为胆汁被分泌。胆汁酸分为初级胆汁酸和次级胆汁酸。初级胆汁酸是由肝脏合成的胆 汁酸，能够例示胆酸下有时简写为CA)、碟去氧胆酸下有时简写为CDCA)和与CDCA具 有异构体关系的熊去氧胆酸下有时简写为UDCA)等。次级胆汁酸是初级胆汁酸经由胆管 排出至肠管通过由肠内细菌引起的脱径化反应、脱氨反应、氨化反应和去禪反应而生成的 胆汁酸，能够例示去氧胆酸下有时简写为DCA)或LCA等。运些例示的5种胆汁酸成分，分 别W游离型、甘氨酸结合型、牛横酸结合型运3种类型存在。此外，在一部分胆汁酸成分中， 存在硫酸结合型或葡萄糖醒酸结合型。在包括人在内的多个动物种类中，作为初级胆汁酸， 生成在胆酸骨架的3、7、12位具有径基的CA和CDCA。另一方面，部分动物生成该品种特有的 胆汁酸。发现了小鼠体内的α-鼠胆酸下有时简写为OMCA)或β-鼠胆酸下有时简写为0 MCA) W及猪体内的猪胆酸下有时简写为HCA)等在人体内非常少的各动物品种特征性的 胆汁酸。aMCA和MCA是初级胆汁酸，已知其也是牛横酸结合型。HCA是初级胆汁酸，在肠内通 过其的7α-脱径化生成猪去氧胆酸（W下皿CA)。运些胆汁酸成分也存在甘氨酸结合型或牛 横酸结合型。
[0006] 肝疾病的治疗中为了选择适用于肝损伤各类型的治疗，其类型的判断是重要的。 W往，W生化学参数为标准判断肝损伤类型。例如，肝细胞损伤型中将ALT或AST的上升，胆 汁渺积型中将ALP或丫 -GTP的上升作为一个指标，判定肝损伤类型。但是，在将生化学参数 作为标准的判定方法中，也存在错误进行肝损伤类型的判断的情形。因此，测定构成胆汁酸 的多个成分的血清中的各浓度，基于该结果判断肝损伤类型，进一步确定治疗方针的尝试 正在进行。
[0007] 目前为止，报告了肝损伤原因不同的分类和胆汁酸成分浓度之间具有多种关系 (非专利文献2~6)，但是并没有得出一致的见解，没有实现临床应用。
[0008] 此外，也有一些关于肝损伤的临床症候不同的分类和胆汁酸成分浓度之间的关系 的报告(非专利文献6~8)，但是与原因不同的分类同样，得到多个结果，没有得出一致的见 解。另一方面，提倡药剂性肝损伤的临床症候不同的分类，不是利用胆汁酸成分而是利用生 化学参数的评价方法(非专利文献9)，基于此日本肝脏学会也提倡药物性肝损伤的评分(非 专利文献10)。此外，本发明人等报告了将针对大鼠的药剂给药中产生的肝疾病与通过胆管 结扎处理或1-糞基硫代异氯酸醋(ANIT)给药等制成的代表性的胆汁渺积模型进行比较，通 过胆汁酸成分浓度的测定能够判断肝疾病损伤类型的可能性(非专利文献11)。但是，在临 床上，早期诊断毛细胆管水平的肝内胆汁渺积的明确的生物标记物到目前为止没有报告， 治疗方针的确定困难的情形仍不少。
[0009] 现有技术文献
[0010] 非专利文献
[0011] 非专利文献1:严重副作用疾病不同对应手册药物性肝损伤：10-30(平成20年4月， 日本厚生劳动省）
[0012] 非专利文献2 : IA Bouchier , CR Pennington , Serumbi le acids in hepatobiliaiy disease.Gut.Jun;19(6):492-6(1978).
[0013] 非专利文献3: Fischer，S，Beuers，U, Spengler，U, Zwiebel，FM，Koebe，H-G, Hepatic levels of bile acids in end-stage chroniccholestatic liver disease.Clinica Qiimica Acta.251(2):173-86(1993).
[0014] 非专利文献4:Williams CN,Bile-acid metabolismand the liver.Clin Biochem.9(3):149-52(1976).
[0015] 非专利文献5:Be;rr F,Pratschke E,Fischer S,化umga;rtner G.Disorders of bile acid metabolism in cholesterol gallstonedisease.J Clin Invest.90(3):859-68(1992).
[0016] 非专利文献6:0st;row JD,Metabolism of bilesalts in cholestasis in humans.In:Tavoloni,N,Berk,PD(Eds),Hepatictransport and bile secretion.Raven, New York,pp.673-712(1993).
[0017] 非专利文献7 :Burkard I, von Eckardstein A,Rentsch KM,Differentiated quantification of human bile acids in serum byhigh-performance liquid chrom曰togr曰phy-t曰ndem m曰ss spectrometry.J Chrom曰togr BAn曰lyt Technol Biomed Life Sci.826(1-2):147-59(2005).
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[0019] 非专利文献9:Danan G,Benichou C.Causalityassessment of adverse reactions to drugs-I.A novel method based on theconclusions of international consensus meetings :曰pplic曰tion to drug-inducedliver injuries.J Clin 化idemiol.46(11):1323-30(1993).
[0020] 非专利文献10:涨川一，DDW-J 2004Workshop药物性肝损伤诊断标准的提案肝脏 46(2):85-90(2005)
[0021] 非专利文献11:树浏纪子(Noriko MasubucM)等，日本药物动态学会第24次年会， 第 305 页，第 2-P-43 号，2009年。
[0022] 非专利文献 12:A.Stiehl,Bile Salt Sulphatesin 畑olestasis.European Journal of Clinical Investigation.4(1):59-63(1974).
【发明内容】
[0023] 肝损伤根据临床症候不同能够分类为肝细胞损伤型和胆汁渺积型，为了选择适用 于各类型的治疗尽管其类型的判断是重要的，但是仍然没有确立能够判定运些类型的技 术。因此，目前边进行治疗边通过基于医师等的经验的综合判断，实施给药等治疗。W往，将 生化学参数作为标准判断肝损伤类型时，肝细胞损伤型中将ALT或AST的上升，胆汁渺积型 中将ALP或丫-GTP的上升能够作为一个指标，然而仅凭此则存在错误进行判断的情形。因 此，在肝疾病发病的初期阶段如果存在能够更明确判断肝损伤类型的标记物则在早期就能 够确定治疗方针。
[0024] 本发明的课题在于开发对肝损伤类型能够进行早期诊断有用的生物标记物，提供 一种将该生物标记物作为指标的肝损伤类型的判断方法或辅助肝损伤类型的判断的方法。
[0025] 本发明人等为解决上述课题进行深入研究，使用临床血清样本测定24种胆汁酸成 分、肝纤维化标记物、氧化应激标记物浓度，通过对得到的测定数据的多变量解析，发现石 胆酸浓度与肝损伤类型相关。具体地，发现石胆酸浓度，在肝损伤患者群中，在肝细胞损伤 型肝损伤中显示高的倾向，相反在胆汁渺积型肝损伤中显示低的倾向。而且，在肝细胞损伤 型肝损伤中，熊去氧胆酸浓度显示低的倾向，此外作为肝纤维化标记物的IV型胶原蛋白浓 度显示高的倾向。另一方面，在胆汁渺积型肝损伤中，去氧胆酸浓度显示低的倾向，血清硫 酸结合型胆汁酸(serum sul化ted bile acids; W下简写为SSBA)、作为肝纤维化标记物的 IV型胶原蛋白和透明质酸下简写为HA)W及作为氧化应激标记物的活性氧类(reactive oxygen species; W下简写为R0S)显示高的倾向。此外，各种胆汁酸的牛横酸结合体和甘氨 酸结合体也显示与其游离型成分浓度相同的倾向。运表明通过利用含有具有因肝损伤类型 而具有特征性倾向的运些胆汁酸成分的生物标记物，能够判断肝损