浓度为横坐标，峰面积为纵坐标，求得各对照品线性回归方程， 结果如下：
[0033] PA：Y=18732X+19461 r = 0.9999
[0034] DPA：Y = 7037.7X+33795 r = 0.9999
[0035] TA：Y=18901X+3257 r = 0.9999
[0036] DTA：Y = 7023.9X-1823.3 r = 0.9999
[0037] PAC：Y=15067X+3523.5 r = 0.9999
[0038] EDA：Y=19992X+3200.3 r = 0.9999
[0039] 高效液相色谱的检测条件为：仪器为Waters册LC 1525series，色谱柱为￥1(：-Pack Pro C18(4.6*250mm，5皿），柱溫为35°C，流速为 1.7mL/min，PDA设定波长为210nm& 243nm，流动相A为乙腊，流动相B为体积分数0.1%憐酸水溶液，梯度洗脱条件为:0~33min， 流动相A相的体积分数保持为51%，A相的体积分数保持为49% ;33~45min，流动相A相的体 积分数由51 %升为54%，流动相B相的体积分数由49 %降至46 % ; 45~5Imin，流动相A相的 体积分数由54%继续升为100%，流动相B相的体积分数由46%降至0% ;51~55min，流动相 A相的体积分数保持100%，流动相B相的体积分数保持0% ; 55~55.5min，流动相A相的体积 分数由100%降至51 %，流动相B相的体积分数由0%升至54% ; 55.5~60min，流动相A相的 体积分数保持51 %，流动相B相的体积分数保持54%。
[0040] 实施例2:
[0041] 将普通商购巧等药材粉碎后过60目筛，准确称取约Ig药粉，置于lOOmLS角瓶中， 使用甲醇超声提取，提取2次，每次加入甲醇的量为30mL，每次超声30min，冷却后过滤，滤液 合并，蒸干，用乙酸乙醋萃取3次，每次20mL，合并有机层，减压蒸干，所得固体再用甲醇稀释 至5mL，摇匀，过0.22皿滤膜后，按实施例1所示色谱条件，进行HPLC分析。该巧等药材中的 DPA为0.047wt% (保留时间为52.57min)，DTA为0.015wt% (保留时间为29.07min)，PA为 O.OOSwt% (保留时间为52. 17min)，TA为0.012wt% (保留时间为25.47min)，PAC为 0.013wt% (保留时间为41.98min)，EDA为O.OOSwt% (保留时间为47.70min)。
[0042] 实施例3:
[0043] 准确称取含有巧等Ξ祗成分的蛋白粉(纳補瑞多植优高蛋白配方，杏辉药品工业 股份有限公司）lg，置于lOOmLS角瓶中，使用甲醇超声提取，提取2次，每次加入甲醇的量为 30血，每次超声30min，冷却后过滤，滤液合并，蒸干，用乙酸乙醋萃取3次，每次20mL，合并有 机层，减压蒸干，所得固体再用甲醇稀释至5mL，摇匀，过0.22μπι滤膜后，按实施例1所示色谱 条件，进行HPLC分析。该巧等药材中的DPA为O.OOlwt% (保留时间为52.57min)，DTA为 0.002wt% (保留时间为29.07min)，PA为0.004wt% (保留时间为52.17min)，TA为0.004wt% (保留时间为25.47min)，PAC为0.002wt% (保留时间为41.98min)，EDA为0.005wt%(保留时 间为47.70min)。
[0044] 实施例4:
[0045] 将含有巧等Ξ祗成分的胶囊(美乐家宝巧等胶囊，杏辉天力(杭州)药业有限公司） 剥除胶囊壳，准确称取约Ig药粉，置于lOOmLS角瓶中，使用甲醇超声提取，提取2次，每次加 入甲醇的量为30mL，每次超声30min，冷却后过滤，滤液合并，蒸干，用乙酸乙醋萃取3次，每 次20mL，合并有机层，减压蒸干，所得固体再用甲醇稀释至5mL，摇匀，过0.22μπι滤膜后，按实 施例1所示色谱条件，进行Η Ρ L C分析。该巧等药材中的D Ρ A为0.0 2 3 W t % (保留时间为 52.57min)，DTA为0.163wt% (保留时间为29.07min)，PA为0.031wt% (保留时间为 52. 17min)，TA为O.OSlwt% (保留时间为25.47min)，PAC为0.051wt% (保留时间为 41.98min)，EDA为0.044wt% (保留时间为47.70min)。
[0046] 实施例5:
[0047] 选用普通商购巧等药材进行精密度试验，按本发明方法处理后，按实施例1所示色 谱条件，进行HPLC分析，进样6次，测定精密度，结果见表1。
[0048] 表1精密度试验结果
[0049]
[0050]
[0051] 从测定结果可W看出，巧等Ξ祗中的6种祗类化合物的分析值得RSD%均小于2,说 明精密度良好，方法可行。
[0052] 实施例6:
[0053] 取一种未添加巧等Ξ祗的颗粒冲剂（氯化钟颗粒，杏辉天力（杭州）药业有限公 司），分别向其中添加巧等Ξ祗原料，制成巧等Ξ祗中DPA、DTA、PA、TA、PAC W及EDA的含量均 为20mg/100g的颗粒产品，按本发明方法处理样品，结果如表2。
[0054] 表2回收率试验结果
[0055]
[0056] 由表2可知，本申请对于测定运六种巧等Ξ祗类化合物的回收率均在90% W上，说 明此方法准确度高;方法的RSD%均小于2,体现了方法良好的重现性和精密度。
【主权项】
1. 一种茯苓三萜类化合物的检测方法，其特征在于所述方法包括以下步骤： (1) 超声提取； (2) 利用有机溶剂对步骤(1)的产物进行萃取，并用醇溶解； (3) 对步骤(2)醇溶液进行高效液相色谱检测。2. 根据权利要求1的检测方法，其特征在于所述方法的步骤（1)包括下述步骤:称取待 测样品，粉碎后配制成样品醇溶液，密塞超声提取，过滤，再将滤液蒸干;其中，所述粉碎后 过的筛网为60目以上;所述超声提取次数为2~3次，每次20~40min;所述每次使用醇提取 的量为样品质量的25~35倍。3. 根据权利要求1的检测方法，其特征在于所述方法的步骤(2)包括下述步骤：用有机 溶剂对步骤（1)得到的蒸干物质进行萃取数次，合并有机层，蒸干后，再使用醇溶解;其中， 所述使用有机溶剂萃取次数为3次以上，每次有机溶剂的用量为样品质量的15~25倍;所述 蒸干后溶解所需醇的量为4~6mL。4. 根据权利要求1的检测方法，其特征在于所述方法的步骤(3)包括下述步骤:取步骤 (2)醇溶液进行高效液相色谱检测；其中，高效液相色谱的检测条件为:采用C18液相色谱 柱，流动相由A相和B相组成，进行梯度洗脱，使用PDA二极管阵列检测器进行检测，其中所述 A相为色谱乙腈，B相为含有体积分数0.05 %~0.5 %的磷酸水溶液，检测波长为210nm和 243nm，柱温为20~40°C，流速为1.7mL/min，所述梯度洗脱的条件为:0~33min，流动相A相 的体积分数保持为51 %，B相的体积分数保持为49% ; 33~45min，流动相A相的体积分数由 51 %升为54%，流动相B相的体积分数由49%降至46% ;45~51min，流动相A相的体积分数 由54%继续升为100%，流动相B相的体积分数由46%降至0% ; 51~55min，流动相A相的体 积分数保持100 %，流动相B相的体积分数保持0 % ; 55~55.5min，流动相A相的体积分数由 100%降至51 %，流动相B相的体积分数由0%升至54% ; 55.5~60min，流动相A相的体积分 数保持51 %，流动相B相的体积分数保持54%。5. 根据权利要求1的检测方法，其特征在于所述方法包括下述步骤： (1) 称取待测样品，粉碎后配制成样品醇溶液，密塞超声提取，过滤，再将滤液蒸干;其 中，所述粉碎后过的筛网为60目以上;所述超声提取次数为2~3次，每次20~40min;所述每 次使用醇提取的量为样品质量的25~35倍； (2) 用有机溶剂对步骤（1)得到的蒸干物质进行萃取数次，合并有机层，蒸干后，再使用 醇溶解;其中，所述使用有机溶剂萃取次数为3次以上，每次有机溶剂的用量为样品质量的 15~25倍;所述蒸干后溶解所需醇的量为4~6mL。 (3) 取步骤(2)醇溶液进行高效液相色谱检测;其中，高效液相色谱的检测条件为:采用 C18液相色谱柱，流动相由A相和B相组成，进行梯度洗脱，使用PDA二极管阵列检测器进行检 测，其中所述A相为色谱乙腈，B相为含有体积分数0.05%~0.5%的磷酸水溶液，检测波长 为210nm和243nm，柱温为20~40°C，流速为1.7mL/min，所述梯度洗脱的条件为：0~33min， 流动相A相的体积分数保持为51%，B相的体积分数保持为49% ;33~45min，流动相A相的体 积分数由51 %升为54%，流动相B相的体积分数由49 %降至46 % ; 45~5lmin，流动相A相的 体积分数由54 %继续升为100 %，流动相B相的体积分数由46 %降至0 %;51~55miη，流动相 Α相的体积分数保持100%，流动相Β相的体积分数保持0%;55~55.5min，流动相Α相的体积 分数由100%降至51 %，流动相B相的体积分数由0%升至54% ; 55.5~60min，流动相A相的 体积分数保持51 %，流动相B相的体积分数保持54%。6. 根据权利要求1-5任一所述的检测方法，其特征在于所述茯苓三萜类化合物为茯苓 酸、去氢茯苓酸、土莫酸、去氢土莫酸、猪苓酸C以及3-表-去氢土莫酸。7. 根据权利要求1-5任一所述的检测方法，其特征在于所述样品是食品、药品、药材、药 材提取物或者它们的混合物。8. 根据权利要求5所述的检测方法，其特征在于所述醇选自甲醇、乙醇、异丙醇或正丁 醇中的一种或几种。9. 根据权利要求5所述的检测方法，其特征在于所述有机溶剂选自乙酸乙酯、乙酸丁 酯、氯仿或二氯甲烷中的一种或几种。
【专利摘要】本发明涉及一种茯苓三萜类化合物的检测方法，该方法包括以下步骤：(1)超声提取；(2)用有机溶剂对步骤(1)得到的蒸干物质进行萃取数次，合并有机层，蒸干后，再用醇溶解，使用0.22μm有机膜滤过，取续滤液注入高效液相色谱仪进行检测。本发明所述方法具有较高的灵敏度、精密度和准确性。
【IPC分类】G01N30/08, G01N30/74
【公开号】CN105486786
【申请号】CN201610059814
【发明人】王昭日, 杨胜杰, 刘明川, 张小琴, 刘敏, 凌赟, 林汉钦
【申请人】杏辉天力（杭州）药业有限公司
【公开日】2016年4月13日
【申请日】2016年1月28日