一种测定乳及乳制品中硫氰酸钠质量浓度的高效液相色谱方法
【技术领域】
[0001] 本发明涉及一种测定乳及乳制品中硫氰酸钠质量浓度的高效液相色谱方法，属于 乳及乳制品质量安全检测技术领域。
【背景技术】
[0002] 硫氰酸钠是一种有毒化工原料，国家禁止在食品加工中添加和使用。不法商贩将 其添加于乳及乳制品中保鲜。目前，乳及乳制品中硫氰酸钠常用的检测方法为离子色谱法， 其具有灵敏度高，分离效果好的特点，但是其前处理方法复杂，回收率也受到影响。
【发明内容】
[0003] 本发明的目的在于提供一种测定乳及乳制品中硫氰酸钠质量浓度的高效液相色 谱方法。
[0004] 本发明所采用的技术解决方案是：
[0005] -种测定乳及乳制品中硫氰酸钠质量浓度的高效液相色谱方法，步骤包括：
[0006] (1)乳及乳制品前处理步骤:先向乳或乳制品样品中加入乙腈，沉淀除去乳或乳制 品样品中的蛋白，然后用固相萃取柱除去乳或乳制品样品中的部分水溶性维生素和氨基 酸，收集洗脱液，再将洗脱液离心脱脂，备用待测；
[0007] (2)高效液相色谱检测步骤:确定色谱条件为:流动相选用磷酸三乙胺和乙腈的混 合溶液;色谱柱选用Agela-ASB C18色谱柱;柱温为25-30°C;流速控制在0.8mL/min;检测波 长为200-218nm;进样量为8-10yL〇
[0008] 步骤(1)中：所述乙腈与乳或乳制品样品的体积比优选为1:2-3。
[0009] 步骤(1)中:所述固相萃取柱优选采用碱性氧化铝作为填料。
[0010]步骤(2)中：所述磷酸三乙胺和乙腈的体积比优选为95:5;磷酸三乙胺采用如下方 法配制:先将磷酸溶于去离子水中配制成质量浓度为0.2%的磷酸溶液，然后向磷酸溶液中 加入三乙胺，调pH值至7,即得。
[0011] 步骤(2)中：硫氰酸钠的理论塔板为7623,主峰与杂质峰的分离度大于2.0,拖尾因 子为1.25;根据3倍信噪比计算得其检测限为lmg/L，10倍信噪比计算得其定量限为3.3mg/ L;绘制标准曲线，得到￥=18915乂-15581，1? = 0.999，检测限达到0.211^/1^。
[0012] 本发明的有益技术效果是：
[0013] (1)本发明根据反相离子对色谱法的原理，建立了一种检测乳及乳制品中硫氰酸 钠质量浓度的高效液相色谱方法，该方法具有前处理简单，检测灵敏度高、准确性好、结果 稳定，可普及等优点。
[0014] (2)本发明固相萃取柱采用碱性氧化铝作为填料，通过同酸性氧化铝、中性氧化铝 和氟洛里硅藻土等填料的实验对比，结果表明碱性氧化铝对牛奶提取液中的氨基酸和水溶 性维生素的吸附效果更好，对硫氰酸盐的回收率影响小。
[0015] (3)本发明进样质量浓度在5-500mg//L范围内线性良好;取生鲜乳5批以上按色谱 条件进行检测，定量范围为0.5-50mg/kg，回收率> 90 %。
【附图说明】
[0016] 图1为绘制得到的标准回归曲线。
【具体实施方式】
[0017] 本发明提供了一种测定乳及乳制品中硫氰酸钠质量浓度的高效液相色谱方法，该 方法通过前处理及色谱条件的确定，实现乳及乳制品中硫氰酸钠的测定，具有检测灵敏度 高、准确性好、结果稳定等优点，利于普及推广。
[0018] -种测定乳及乳制品中硫氰酸钠质量浓度的高效液相色谱方法，步骤包括：
[0019] (1)乳及乳制品前处理步骤:先向乳或乳制品样品中加入乙腈，所述乙腈与乳或乳 制品样品的体积比为1:2-3,乙腈的加入可沉淀除去乳或乳制品样品中的蛋白；然后用固相 萃取柱除去乳或乳制品样品中的部分水溶性维生素和氨基酸，收集洗脱液，固相萃取柱采 用碱性氧化铝作为填料;再将洗脱液离心脱脂，备用待测。
[0020] (2)高效液相色谱检测步骤:确定色谱条件为:流动相选用磷酸三乙胺和乙腈的混 合溶液，磷酸三乙胺和乙腈的体积比为95: 5;磷酸三乙胺采用如下方法配制:先将磷酸溶于 去离子水中配制成质量浓度为0.2%的磷酸溶液，然后向磷酸溶液中加入三乙胺，调pH值至 7，即得;色谱柱选用Agela-ASB C18色谱柱;柱温为25-30°C;流速控制在0.8mL/min;检测波 长为200-218nm;进样量为8-10yL〇
[0021 ]本方法在选择固相萃取柱进行净化时，尝试了酸性氧化铝，中性氧化铝，碱性氧化 铝，氟洛里硅藻土 4种填料对牛奶进行净化后测定质量浓度，结果表明碱性氧化铝对牛奶提 取液中的氨基酸和水溶性维生素的吸附效果更好，对硫氰酸盐的回收率影响小。
[0022]在上述色谱条件下，对空白、标准工作溶液和样品溶液进行系统适用性试验。硫氰 酸钠的理论塔板为7623,主峰与杂质峰的分离度大于2.0,拖尾因子为1.25。根据3倍信噪比 计算可得其检测限为lmg/L，10倍信噪比计算可得其定量限为3.3mg/L。绘制标准曲线，得到 ￥=18915乂-15581，1? = 0.999，检测限可达到0.211^/1^。
[0023]该方法进样质量浓度在5~500mg//L范围内线性良好。取生鲜乳5批以上按色谱条 件进行检测，结果如下表1，定量范围0.5~50mg/kg，回收率>90%。
[0024] 表 1
[0025]
[0026]下面结合具体实施例对本发明进行更具体的阐述。实施例中的具体参数仅用于说 明本发明而不用于限定范围，本领域内技术人员可以适当修改本发明参数。
[0027] 实施例1
[0028] 乳及乳制品前处理步骤:先向10ml牛奶样品中加入5ml乙腈，沉淀除去牛奶样品中 的蛋白。然后用固相萃取柱除去乳或乳制品样品中的部分水溶性维生素和氨基酸，收集洗 脱液，固相萃取柱选用碱性氧化铝作为填料。再将洗脱液离心脱脂，备用等待高效液相色谱 检测。
[0029]确定色谱条件为：流动相为0.2 %磷酸三乙胺(pH = 7.0):乙腈=95: 5，以体积比 计；0.2%硫酸三乙胺采用如下方法配制：先将磷酸溶于去离子水中配制成质量浓度为 0· 2%的磷酸