脂联素检测试剂盒的制作方法
【技术领域】
[0001 ]本发明涉及生物化学领域，特别涉及一种脂联素检测试剂盒。
【背景技术】
[0002] 脂肪组织主要由大量聚集成团的脂肪细胞构成，脂联素是脂肪细胞分泌的一种内 源性生物活性多肽或蛋白质。脂联素是一种胰岛素增敏激素，能改善小鼠的胰岛素抗性和 动脉硬化症;对人体的研究发现，脂联素水平能预示II型糖尿病和冠心病的发展，并在临床 试验表现出抗糖尿病、抗动脉粥样和炎症的潜力。
[0003] 同时，根据研究发现，血清脂联素水平降低可增加多种癌症发生的危险性。而且， 血液循环中脂联素浓度和肿瘤的发病率是成负相关的。因此，通过检测人体血液中脂联素 的浓度能够作为预防癌症的重要标准。
[0004] 而现有技术中用于检测脂联素浓度的试剂盒使用最多的是酶联免疫分析试剂盒， 该种试剂盒主要是应用双抗体夹心法测定脂联素浓度的。虽然，该种试剂盒检测脂联素的 浓度时灵敏度比较的高，但是该种试剂盒保存的温度需要在2_8°C之间，且也只能够保存6 个月。为此，该种试剂盒的保存条件比较严格且也不能够长时间的保存，不然就会造成试剂 盒中的显示试剂的失效，最终将有可能导致测试结果的假阳性。因此，不利于试剂盒生产企 业的大批量生产和远距离的运输工作的进行。
【发明内容】
[0005] 本发明的目的在于提供一种可长时间保存的脂联素检测试剂盒。
[0006] 本发明的上述目的是通过以下技术方案得以实现的：一种脂联素检测试剂盒，包 括显色试剂R1和显示试剂R2，所述显示试剂R1包括醋酸钠、柠檬酸、30%双氧水;所述显示试 剂R2包括乙二胺四乙酸二钠、柠檬酸、甘油、TMB和乙醇。
[0007] 由于显色试剂R1中的醋酸钠和柠檬酸的组合可以作为有效的酸性缓冲液，而双氧 水在酸性的环境下具有较强的氧化效果，因而显色试剂R1能够保存较长的时间而不会生长 细菌、真菌等微生物，这样在测试过程中显色试剂R1仍能够保证正常的效果。
[0008] 同时，在显色试剂R2中乙二胺四乙酸二钠是EDTA的弱酸盐，其和柠檬酸相互配合 刚好起到了缓冲液的作用，从而能够有效地使显色试剂R2的pH值保持在一定范围内，这样 就可以有效的保证显色试剂R2的相对稳定，从而延长了显色试剂R2的保存时间，降低了显 色试剂R2的保存条件。并且乙二胺四乙酸二钠也是一种良好的配位剂，其可以清除中各物 质混合后所成溶液中的重金属离子，从而避免了在检测的过程中重金属对实验结果的干 扰，进而也进一步提高了试剂盒的灵敏度。
[0009] 作为优选，所述显色试剂R1中的醋酸钠、柠檬酸和30%双氧水的质量比为8~9:1: 0 · 2~0 · 3〇
[0010] 作为优选，所述显示色R2中的乙二胺四乙酸二钠、柠檬酸、甘油、TMB和乙醇质量比 为0.2~0.25:1:66~68:0.15~0.16:2.4~3。
[0011] 作为优选，所述显色试剂R2盛放于充有1.1个大气压的二氧化碳的试剂瓶中。
[0012] 由于TMB是显色试剂R2中的有效成份，而TMB在长期存放的过程，空气中的氧气就 会进入到盛放有显色试剂R2的试剂瓶中，从而TMB就容易发生氧化反应放出二氧化碳，而试 剂瓶中充有1.1个大气压的二氧化碳，这样其就可以有效杜绝氧气进入到试剂瓶中，同时， 二氧化碳的作为保护气体也增强了 TMB的氧化反应的逆反应效果，所以TMB就不容易发生 氧化反应了，这样也就进一步保证了显色试剂R2的稳定性。
[0013] 作为优选，所述显色试剂R2中还包括山梨酸钾。
[0014] 山梨酸钾是一种有效的防腐剂，其可以抑制细菌的生长，尤其在酸性强的情况下， 其仿佛的能力就显得更加的明显，所以显色试剂R2中的柠檬酸刚好为山梨酸钾提供了有效 的氢离子，这样也就有效的提升了山梨酸钾的防腐能力。
[0015] 但是，由于山梨酸钾是一种易被空气氧化，所以冲入试剂瓶中二氧化碳刚好对其 起到了有效的隔绝氧的作用，这样便大大延长了显色试剂R2保存时间。并且当需要使用显 示试剂R2的时候，只需要将瓶盖打开，使瓶口暴露在空气中少许时间，这样不但二氧化碳会 及时散去，而且山梨梨酸钾也会氧化分解，所以不会对显色试剂R2的使用造成任何的影响。
[0016] 所述山梨酸钾与柠檬酸质量比为0.1~0.15:1。
[0017] 综上所述，本发明具有以下有益效果： 1. 显色试剂R1和显色试剂R2内的柠檬酸与其他弱酸组合成了酸性的缓冲液，从而也就 有效的使两种试剂在长期存放过程中pH值能够保持相对温度，进而也就延长了显色试剂R1 和显色试剂R2的保存时间； 2. 而在用于盛放显色试剂R2的试剂瓶中还充有1.1个大气压的二氧化碳，从而也就有 效地阻止了氧气进入到试剂瓶中，对TMB成份造成干扰，进而进一步延长了显色试剂R2的存 放时间； 3. 在显色试剂R2中加入的山梨酸钾在酸性的条件下抑制了细菌、真菌等微生物的生 产，从而也就降低了显色试剂R2的存放条件。 【具体实施方式】 「00181 K试剂合铂成"
[0019] 2、实验原理： 用纯化的抗-脂联素(ADP)抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次 加入脂联素(ADP)，再与HRP标记的脂联素(ADP)抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合 物，经过彻底洗涤后加底物TMB显色。TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色，并在盐酸的作用下 转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的脂联素(ADP)呈正相关。用酶标仪在450nm波长 下测定吸光度(0D值），通过标准曲线计算样品中人脂联素(ADP)浓度。
[0020] 3、实验步骤： 51、 标准品的稀释与加样:在酶标包被板上设标准品孔10孔，在第一、第二孔中分别加 标准品100μΙ，然后在第一、第二孔中加标准品稀释液50μ1，混匀;然后从第一孔、第二孔中 各取l〇〇yl分别加到第三孔和第四孔，再在第三、第四孔分别加标准