一种保健食品中pde-5抑制剂类违禁药的非目标物快速筛查检测方法
【技术领域】
[0001] 本发明涉及食品未知成分检测技术领域，具体地，涉及一种保健食品中roE-5抑制 剂类违禁药的非目标物快速筛查检测方法。
【背景技术】
[0002] 保健食品是我国传统习惯上一种俗称，学术上称呼为功能食品。人们的膳食从一 般解决饥饿温饱的传统的营养学概念发展到有益健康养生的新的营养学概念，促进了功能 食品诞生与发展。功能食品的概念最早由20世纪80年代早期日本首先提出来，功能食品发 展了三十多年的历史，然而不同民族和国家地区对此概念的理解和定义存在很大的差异； 目前国际普遍以欧盟对保健(功能)食品的定义;保健食品是指如果能较好地确证一种食品 除提供通常的营养效果之外，还能一种促进机体健康降低疾病风险的方式有益地影响机体 中的一种或一种以上的靶功能的一类食品。随着保健食品行业的发展，文献资料研究显示 保健食品，尤其是保健补酒中添加违禁西药成分的食品安全问题日益突出。
[0003] 目前保健食品中roE-5抑制剂类违禁药物检测技术有HPLC、GC-MS、LC-MS、NMR、LC-FI-ICR-MS、UPLC-TOF-MS、頂S和酶联免疫法。然而已有文献研究发现保健食品中添加 TOE-5 抑制剂类违禁药物达80种以上，常规的色谱联用质谱分析方法不能全部有效检测分析这些 违禁药物成分。
【发明内容】
[0004] 本发明的目的是为了克服现有技术的上述不足，在没有标准品条件下，提供一种 保健食品中roE-5抑制剂类违禁药的非目标物快速筛查检测方法。
[0005] 为了实现上述目的，本发明是通过以下技术方案予以实现的：
[0006] 一种保健食品中PDE-5抑制剂类违禁药的非目标物快速筛查检测方法，包括如下 步骤：
[0007] S1.采用QuEChERS技术结合超声辅助萃取技术对待测保健食品进行前处理萃取， 萃取条件为：向lmL或lg保健食品中加入15mL乙腈与水的溶液(二者体积比6:4)，1.2g硫酸 镁和〇. 3g氯化钠分散剂，80mg吸附剂C18，涡旋，超声10~15min，离心分层后取上清液，上清 液定容稀释，取lmL再次稀释后的溶液过有机系滤膜后作为萃取样液；
[0008] S2.取萃取样液进行IDA-MS数据采集:IDA-MS筛查分析的条件为:液相分离条件为 流动相A为0.1 %甲酸水溶液，流动相B为乙腈，流速0.5mL/min，梯度洗脱:B相由初始体积比 10%，lmin增至30%，7min增至60%，lmin降至10%，保留3min，柱温40°C，C18色谱柱;梯度 洗脱方式质谱条件:ESI和APCI复合源;正离子扫描方式;APCI源连接自动校正系统，样品为 ESI离子化方式，Curtain gas:40psi，离子源gas l:50psi，离子源gas 2:50psi，离子源温 度500°C，离子源电压5500V;-级T0F-MS扫描准确质量范围：100~lOOODa，数据采集时间 100ms，DP: 100V，CE: 10V;二级 IDA-MS 扫描准确质量范围：50 ~1000Da，DP: 100V，CE:35土 15V;高灵敏模式，数据采集时间50ms，信号阈值lOOcps，IDA实验每循环采集6次数据，动态 背景减法扣除；
[0009] S3.样品的IDA-MS高分辨质谱数据分析，利用PeakView数据分析软件处理获得目 标物的准确分子量、同位素分子量、分子式、色谱保留时间，以及精确二级碎片分子量;结合 ChemSpider结构数据库，定性鉴定未知Η)Ε-5抑制剂类西药成分。
[0010] 本发明选择伐地那非、伪伐地那非、硫代艾迪那非、羟基红地那非、Genedenafil、 硫代西地那非、红地那非、豪莫西地那非、西地那非、羟基豪莫西地那非、R a c xanthoabthrafil、他达那非、氨基他达那非共13种PDE-5抑制剂类违禁药物进行定量分析 研究，获得定量分析线性回归方程。
[0011] 所述保健食品为保健药酒或保健中药等食品。
[0012] 与现有技术相比，本发明具有以下有益效果：
[0013] 1.广谱性强:本发明采用IDA-MS筛查分析保健食品中TOE-5抑制剂类违禁药物，利 用TOE-5抑制剂类违禁药物高分辨Masterviews质谱数据库，快速定性筛查分析文献报道86 种此类物质，同时通过数据库比对鉴定出来新型未报道的TOE-5抑制剂违禁西药成分，证明 该方法对保健食品中违禁药物的检测广谱性；
[0014] 2.选择盐酸伐地那非、他达那非、伪伐地那非等13种roE-5抑制剂类违禁药物进行 定量分析研究，标准回归曲线线性好，检测限低，13种违禁药物的检测限在1.2~3yg/L，线 性范围10~400yg/L;
[0015] 3.基质效应小:本发明采用高分辨质谱IDA-MS的m/z全扫描模式采集数据，目标物 利用提取Masterviews离子流色谱图，根据高分辨一级和二级质谱定性定量分析；
[0016] 4.精密度和准确度高:本发明在样品加标回收率实验中证明，13种roE-5抑制剂类 违禁药物混标在20，80，200yg/L等3种浓度测定的RSD均在5 %之内；
[0017] 5.稳定性好:本发明在实验中证明，保健样品放置2个月之后，所有样品的准确度 绝对值均小于15%，表明长时间保健食品样品，不影响本方法对样品浓度进行准备测定；
[0018] 6. QuEChERS基质分散固相萃取技术与超声辅助萃取前处理方法简单，快速，准确； 利用响应曲面实验设计等方法优化样品萃取条件，利用加标回收率作为优化指标，在13种 违禁药物混标在20，80yg/L等浓度加标回收率实验中，回收率在70.2~91.4%表明该前处 理方法有效性。
【附图说明】
[0019] 图1为13种roE-5抑制剂违禁药物高分辨一级和二级质谱图；1-1:伐地那非；1-2: 伪伐地那非；1-3:硫代艾迪那非；1-4:羟基红地那非；1-5: Genedenaf i 1; 1-6:硫代西地那 非；1-7:红地那非；1-8:豪莫西地那非；1-9:西地那非；1-10:羟基豪莫西地那非；1-11 :Rac xanthoabthrafil; 1-12:他达那非；1-13:氨基他达那非。
[0020] 图2为13种roE-5抑制剂违禁药物的色谱图。
[00211图3为响应曲面实验设计优化萃取条件三维图;A、C、E、I和K分别是Qu EChERS与超 声相结合前处理的四个因素条件"^!120(，^^八），1%504&似(：1用量（，1^)，吸附剂(：18 (，mg)，超声时间（，min)每两个因素对硫代艾地那非回收率的的三维曲面响应图；B、D、F、H 和L是每两个因素对Genede nafi 1回收率的三维曲面响应图。
[0022] 图4为保健补酒中未知PDE-5抑制剂违禁药物IDA-MS的鉴定;A、一个保健补酒的 MasterView XICs筛查鉴定图，B、去甲基西地那非T0F-MS图，C、去甲基西地那非IDA-MS图， D、伐地那非IDA-MS图，E、西地那非IDA-MS图。
【具体实施方式】
[0023] 下面结合说明书附图和具体实施例对本发明作出进一步地详细阐述，所述实施例 只用于解释本发明，并非用于限定本发明的范围。下述实施例中所使用的试验方法如无特 殊说明，均为常规方法;所使用的材料、试剂等，如无特殊说明，为可从商业途径得到的试剂 和材料。
[0024] 实施例1
[0025] 1.13种TOE-5抑制剂药物的标准溶液配制:PDE-5抑制剂药物标准品各称取2. Omg， 置于10mL容量瓶中，用甲醇定容至刻度，配制成200yg/mL的标准储备液。根据实验需要用甲 醇稀释配制lOyg/mL混合标准溶液，稀释配制系列标准工作溶液，4°C保存。
[0026] 2. QuEChERS技术与超声辅助萃取前处理方法:利用响应曲面实验设计方法、利用 Box-Behnken实验设计方案，4个因素分别是，ACN:H20比（，％v/v)，MgS04 & NaCl用量（， mg)，吸附剂C18(，mg)，超声时间（，min)，二次回归方程模式预测评估13种TOE-5抑制剂加标 回收率，以来优化四个样品前