一种分析/分离依折麦布(r,r,s)型的光学异构体的方法
【技术领域】
[0001] 本发明属涉及一种高效液相色谱法，尤其是一种分析分离依折麦布及其光学异构 体的高效液相色谱法。
【背景技术】
[0002] 依折麦布为胆固醇抑制吸收剂，适用于治疗原发性高胆固醇血症，纯合子家族性 高胆固醇血症(HoFH)和纯合子谷留醇血症(或植物留醇血症），其分子式为C 24H23F2N〇4，化学 名为1-(4-氟苯基)-3(R)-[3-(4-氟苯基)-3(S)_羟丙基]-4(S)-(4-羟苯基)-2-吖丁啶(氮 杂环丁烷)酮一水合物，结构式为
[0004] 该分子中含有3个手性中心，存在多个光学异构体，对于依折麦布的光学异构体杂 质，在药物合成过程当中是需要进行质量控制的。含手性碳原子的光学异构体的分离一直 是手性药物合成和制剂过程中质量控制的难点，实现依折麦布及其光学异构体的分离在依 折麦布药物的合成和制剂过程的质量控制方面具有现实意义。本发明旨在介绍一种方法来 分析与分离依折麦布及其(R，R，S)型的光学异构体。经文献检索，未见(R，R，S)型的光学异 构体检测方法的报道。
【发明内容】
[0005] 本发明的目的在于提供一种分析分离依折麦布及其(R，R，S)型的光学异构体杂质 的高效液相色谱法，从而实现依折麦布与其(R，R，S)型的光学异构体杂质的分离测定。
[0006] 发明人发现，以纤维素类手性柱，以正相混合溶剂为流动相，可以将依折麦布及其 (R，R，S)型的光学异构体进行有效分离，从而可以准确控制依折麦布的质量。本发明的方法 能简单、快速、准确地分析分离依折麦布及其(R，R，S)型的光学异构体杂质。
[0007] 所述高效液相色谱法(简写为HPLC)分析/分离依折麦布及其(R，R，S)型的光学异 构体的方法，其特征在于，采用以纤维素类手性柱，以正相混合溶剂为流动相的正相色谱法 进行分离。
[0008] 进一步地，所述纤维素类手性柱是大赛璐(Daicel)的AS-H纤维素类手性柱，柱长 250mm、内径4.6mm，填料粒径5μηι;可以获得更好的分析分离效果。
[0009] 进一步地，本发明的正相溶剂选用含有正己烷和异丙醇的混合溶剂。
[0010] 本发明的方法中的流动相选用体积比例为60:40~95:5正己烷和异丙醇的混合溶 剂。进一步优选地，所述的含有正己烷和异丙醇的混合溶剂中，正己烷和异丙醇的体积比例 为75:25。
[0011] 本发明所述方法中的一种实施方式，至少包括以下步骤：
[0012] (1)将含有依折麦布和/或其(R，R，S)型的光学异构体的样品加正相混合溶剂制成 溶液I;
[0013] (2)设置液相色谱仪的参数为:流动相流速为0.4~1.2mL/min，检测波长为243nm， 色谱柱柱温箱为20~40 °C ;
[0014] (3)取步骤(1)所得溶液I注入液相色谱仪，分析或分离出依折麦布及其(R，R，S)型 的光学异构体。
[0015] 优选地，所述溶液I中，依折麦布及其(R，R，S)型的光学异构体的浓度为0. lg/L~ 1·5g/L〇
[0016] 优选地，所述步骤(2)中色谱柱柱温箱为为25°C。
[0017] 优选地，步骤(3)中注入液相色谱仪的溶液I的量为2~50yL。
[0018]优选地，依折麦布的保留时间为20~45min;依折麦布(R，R，S)型的光学异构体的 保留时间为15~30min;依折麦布与依折麦布(R，R，S)型光学异构体的分离度2 1.5。
[0019 ]本发明所述的分析分离方法中的一种实施方式，可按照以下方法实现：
[0020] (1)取依折麦布样品适量，用异丙醇溶解样品，配制成每lmL含依折麦布0.5~ 1.5mg的样品溶液。
[0021 ] (2)设置流动相流速为0.4~1.2mL/min，检测波长为243nm，色谱柱柱温箱为20~ 40°C，色谱柱柱温的最佳温度为25°C。
[0022] (3)取（1)的样品溶液2~50yL注入液相色谱仪，完成依折麦布及其(R，R，S)型的光 学异构体的分析与分离。
[0023] 其中：
[0024] 色谱柱:AS_H(Daice 1，250mm X 4 · 6mm，5μπι)纤维素手性色谱柱；
[0025] 流动相:正己烷-异丙醇(正己烷:异丙醇体积比=75:25);
[0026]柱温：25°c;
[0027] 检测波长：243nm;
[0028] 流速:0.5mL/min;
[0029] 进样体积：20yL。
[0030] 本发明采用纤维素类AS-H(Daicel，250mmX4.6mm，5ym)手性色谱柱，能够有效的 分析分离依折麦布及其光学异构体(杂质）；选择流动相溶解样品，确保了溶液的稳定性，且 溶剂峰对(R，R，S)型的光学异构体测定无干扰;选择进样体积20yL，柱温为25°C，提高了色 谱峰的对称性。本发明解决了含依折麦布及其光学异构体的原料的分析与分离问题，从而 确保了依折麦布的质量可控。
【附图说明】
[0031] 图1是实施例1的高效液相色谱图：图中1号峰为依折麦布(R，R，S)型的光学异构 体，2号峰为依折麦布。
[0032] 图2是实施例2的高效液相色谱图：图中1号峰为依折麦布(R，R，S)型的光学异构 体，2号峰为依折麦布。
[0033] 图3是实施例3的高效液相色谱图：图中1号峰为依折麦布(R，R，S)型的光学异构 体，2号峰为依折麦布。
[0034] 图4是实施例4的高效液相色谱图：图中1号峰为依折麦布(R，R，S)型的光学异构 体，2号峰为依折麦布。
[0035] 图5是实施例5的高效液相色谱图：图中1号峰为依折麦布(R，R，S)型的光学异构 体，2号峰为依折麦布。
【具体实施方式】
[0036] 下面结合实施例详述本申请，但本申请并不局限于这些实施例。
[0037] 实施例1
[0038] 仪器与条件
[0039] 色谱柱:AS_H(Daicel，250mmX4.6mm，5ym);
[0040] 流动相:正己烷-异丙醇(正己烷:异丙醇体积比=75:25);
[0041] 柱温：25°C;
[0042] 流速:0.5mL/min;
[0043] 进样体积：20yL;
[0044] 检测波长：243nm;
[0045] 实验步骤
[0046] 分别取依折麦布对照品和依折麦布(R，R，S)型的光学异构体对照品适量，加流动 相溶解并定量稀释制成每lmL中约含依折麦布、EZ-ZZ-309分别为0.5mg、5yg的混合溶液，作 为系统适用性溶液。取依折麦布适量，加流动相溶解并稀释制成每lmL约含0.5mg的溶液，作 为供试品溶液;精密量取供试品溶液lmL，置100mL量瓶中，用流动相稀释至刻度，摇匀，作为 对照溶液。量取系统适用性溶液20yL，注入液相色谱仪，记录色谱图，依折麦布峰和(R，R，S) 型的光学异构体的分离度应大于1.5。分别取供试品溶液和对照溶液20yL，按上述条件进行 高效液相色谱分析，记录色谱图。按自身低浓度对照法计算(R，R，S)型光学异构体的含量。
[0047] 结果见附图1，图中1号峰为依折麦布(R，R，S)型的光学异构体，保留时间22.9min 左右;2号峰为依折麦布，保留时间29.8min左右。可以看出在该条件下依折麦布主峰和(R， R，S)型的光学异构体峰完全分离开来。
[0048] 实施例2 [0049] 仪器与条件
[0050] 色谱柱:AS_H(Daicel，250mmX4.6mm，5ym);
[0051] 流动相:正己烷-异丙醇(正己烷:异丙醇体积比=70:30);
[0052] 柱温：25Γ;
[0053] 流速:0.5mL/min;
[0054] 进样体积：20yL;
[0055] 检测波长：243nm;
[0056] 实验步骤
[0057] 分别取依折麦布对照品和依折麦布(R，R，S)型的光学异构体对照品适量，加流动 相溶解并定量稀释制成每lmL中约含依折麦布、EZ-ZZ-309分别为0.5mg、5yg的混合溶液，作 为系统适用性溶液。取依折