一种磺胺类药物金纳米棒快速检测试纸的制作方法
【技术领域】
[0001] 本实用新型涉及动物性食品快速检测领域，尤其是涉及一种磺胺类药物的胶体金 纳米棒快速检测试纸。
【背景技术】
[0002] 磺胺类药物（Sulfonamides，SAs)是一类具有对氨基苯磺酰胺结构的化学治疗药 物，通过影响细胞核蛋白质的合成，抑制细菌的繁殖。磺胺类药物能抑制革兰氏阳性菌及一 些阴性菌，可以治疗多种细菌感染，在兽医临床上广泛应用于治疗由敏感细菌感染的各种 畜禽疾病。由于磺胺类药物在体内的作用和代谢时间较长，通过任何途径摄入的磺胺都有 可能在人体内蓄积。蓄积浓度超过一定值时，就会对人体造成损害。短时间大剂量或长时 间小剂量的刺激可分别引起急性或慢性中毒，影响机体的泌尿、免疫系统，破坏肌肉、肾脏 和甲状腺等组织，如诱发人的甲状腺癌等。另外，人体内长期存在磺胺会导致许多细菌对磺 胺类药物产生抗药性。因此，国际食品法典委员会（CAC)和许多国家规定，动物性食品中磺 胺类总量的最大残留限量（MRL)为0. lmg/kg。
[0003] 现有的磺胺类检测方法多为色谱法，但是这些方法的灵敏度受样品的净化、浓缩 等步骤的影响较大，再者这些方法需要复杂的仪器，过程繁琐，不适应现场大量样本的筛 查。胶体金免疫层析法以其灵敏、快速、准确、操作简便得到越来越广泛的应用，但目前的胶 体金检测产品仍存在灵敏度低的状况。 【实用新型内容】
[0004] 针对现有技术存在的上述问题，本申请人提供了一种快速检测动物性食品中磺胺 类药物的胶体金试纸。本实用新型在传统的胶体金免疫层析试纸基础上进行了改进，将胶 体金标记抗体复合物直接冻干于微孔中，使得检测过程中待测样本与金标抗体充分反应， 提尚检测灵敏度。
[0005] 本实用新型的技术方案如下：
[0006] -种磺胺类药物金纳米棒快速检测试纸，由底板（7)、吸水板（1)、硝酸纤维素膜 (5)、样品吸液板（2)、MX线（6)和微孔试剂（8)组成；
[0007] 所述硝酸纤维素膜（5)叠放在底板（7)的中部上面；所述吸水板（1)叠放在底板
[7] 的其中一端的端头部分上面，所述样品吸液板（2)叠放在底板（7)的另一端的端头部分 上面；
[0008] 所述硝酸纤维素膜（5)两端分别与吸水板（1)和样品吸液板（2)相交叠，且所述 硝酸纤维素膜（5)位于吸水板（1)和样品吸液板（2)的下方；
[0009] 从所述硝酸纤维素膜（5)靠近样品吸液板（2)的那一端开始，依次设置试验线（3) 和控制线（4);所述试验线（3)由磺胺-大分子蛋白偶联物包被；所述控制线（4)由羊抗鼠 多克隆抗体包被；
[0010] 所述微孔试剂（8)为冻干后的金纳米棒标记磺胺单克隆抗体复合物。
[0011] 底板（7)是PVC背板，样品吸液板⑵是玻璃纤维材料，微孔试剂⑶的微孔是聚 苯乙稀材料。
[0012] 所述硝酸纤维素膜（5)两端与吸水板（1)和样品吸液板（2)相交叠的部分长度分 别为1~2毫米。
[0013] 本试剂盒的使用方法如下：将水相待测样品加入金标微孔试剂（8)至微孔中固体 充分溶解，样品中若含有磺胺类药物，样品中的磺胺类药物将与微孔试剂（8)中磺胺单克 隆抗体-金纳米棒标记物发生特异性结合。插入试纸条，由于毛细管作用样品将沿着试纸 条吸水板端移动，当移动至固定有磺胺-大分子蛋白偶联物试验线时，由于磺胺单克隆抗 体-金纳米棒标记物与样品中磺胺类药物优先结合成复合物而不能与磺胺-大分子蛋白偶 联物结合，因此显色的金纳米棒不能滞留于试验线上，试验线处没有色带显示，即只有一条 控制线为阳性。相反如果样品中没有磺胺类药物，磺胺单克隆抗体-金纳米棒标记物移动 到试验线上，磺胺单克隆抗体就会与磺胺-大分子蛋白偶联物发生特异结合，使胶体金滞 留于试验线上，即二条色带为阴性。
[0014] 当移动至羊抗鼠多克隆抗体控制线时，无论样品中有无磺胺类药物，控制线都会 显色。因此控制线无色带产生则代表操作有误，即检测时样品液面超过MAX线或试纸已经 过期。
[0015] 本实用新型有益的技术效果在于：
[0016] 本试剂盒改变了以往采用胶体金标记待测物质抗体的方法，而是采用金纳米棒标 记待测物质的单克隆抗体。本实用新型所提供的检测试剂盒具有灵敏度高、操作简便、方便 携带、成本低、检测结果可靠等特点。
【附图说明】
[0017] 图1为本实用新型中检测试纸部分的结构图；
[0018] 图2为本实用新型微孔试剂部分的结构图；
[0019] 图3为本实用新型的使用方法图；
[0020] 图4为本实用新型的阴性结果图；
[0021] 图5为本实用新型的阳性结果图；
[0022] 图6为本实用新型的无效结果图；
[0023] 图中：1、吸水板，2、样品吸液板，3、试验线，4、控制线，5、硝酸纤维素膜，6、MAX线， 7、底板，8、微孔试剂。
【具体实施方式】
[0024] 下面结合附图，对本实用新型进行具体描述。
[0025] 一、本试剂盒的组成：
[0026] 本实用新型所涉及的试剂盒是由检测试纸和微孔试剂8组成，如图1所示。其中 检测试纸由底板7、吸水板1、硝酸纤维素膜5、样品吸液板2、MAX线6组成。底板7中部上 方叠加硝酸纤维素膜5,硝酸纤维素膜上5有平行的一条试验线（T线）3和一条控制线（C 线）4 ;底板7 -端端头上方叠加吸水板1，另一端端头上方叠加样品吸液板2,硝酸纤维素 膜5两端分别与吸水板1和样品吸液板2相互交叠连接（交叠连接部分1~2毫米），且位 于吸水板1和样品吸液板2的下方。其中试验线3由磺胺-大分子蛋白偶联物包被，控制 线4靠近吸水板，由羊抗鼠多克隆抗体包被。微孔试剂8为将磺胺单克隆抗体-金纳米棒 标记物直接冻干于微孔中制成，如图2所示。
[0027] 二、磺胺类药物胶体金检测试剂盒的制备：
[0028] 1、磺胺-大分子蛋白偶联物即磺胺类药物半抗原-载体蛋白偶联物的合成与鉴定
[0029] 磺胺类药物是小分子物质，只有免疫反应性，没有免疫原性，不能诱发机体产生免 疫应答，必须与大分子载体蛋白偶联后才具有免疫原性。
[0030] (1)磺胺类药物半抗原的合成
[0031] 2_氛基_3_吡啶甲酸0. 48g和二乙胺2ml溶入IOml二氣甲烧中，加入适量催化剂 4_二甲氨基吡啶（DMP)。室温下缓慢滴入4-乙酰氨基苯磺酰氯的2ml二氯甲烷溶液，滴 加完毕后继续反应5h，蒸除溶剂，柱层析纯化后，加入2mol/L NaOH水溶液80ml，加热回流 l〇h，乙酸乙酯萃取，柱层析纯化后得到磺胺类药物半抗原醛基磺胺吡啶。
[0032] (2)免疫原的制备--磺胺类药物半抗原与牛血清白蛋白偶联物合成
[0033] 取磺胺类药物半抗原23mg用3ml二甲基甲酰胺（DMF)溶解完全，制成溶液I ;取 牛血清白蛋白出5厶)10011^用711110.1111〇1/1?85(?!17.0)溶解完全，制成溶液11;将溶液1 加入溶液II中，室温反应24h后，用0.0 lmol/L PBS透析三天，每天换液三次，得免疫原。
[0034] (3)包被原的制备一一磺胺类药物半抗原与卵清蛋白偶联物合成
[0035] 取磺胺类药物半抗原23mg用3ml DMF溶解完全，制成溶液I ;取卵清蛋白 (OVA) IOOmg用7m