-二 硫砷烷）苯基）炔酰胺在叔丁醇与水(体积比为1:1)溶剂中在无水硫酸铜与抗坏血酸钠催 化下发生点击反应生成N- (4"_氧化砷苯基）-1- (1'，3'，4'，6'-0_乙酰基-D-葡萄 糖）-1，2, 3-三唑-4-甲酰胺。
[0029] 2-叠氣-1，3, 4, 6-0-乙醜基-D-匍萄糖（70. 5 mg, 0? 1889 mmol )，N-(4-(1，3， 2- 二硫砷烷）苯基）炔酰胺（64.7 mg，0.2079 mmol),五水硫酸铜（106.3 mg，0.4250 mmol)和抗坏血酸钠（3. 8 mg, 0.01889 mmol)溶于I mL N, N-二甲基甲酰胺中，氮气保 护下100 °C反应4小时，反应完毕，减压蒸干溶剂。向残余物中加入5mL水和20 mL乙酸 乙酯萃取两次，合并有机相，无水硫酸钠干燥，过滤，减压蒸干。残余物经过柱层析(二氯甲 烷：甲醇=20 :1)，得到白色固体N- (4"_氧化砷苯基）-1- (1'，3'，4'，6'-0-乙酰 基-D-葡萄糖）-1，2,3_三唑-4-甲酰胺（44 mg，收率：38%)。
[0030] 实施例五：N- (4"_氧化砷苯基)-1- (1'，3'，4'，6'-0_乙酰基-D-葡萄糖)-1， 2,3_三唑-4-甲酰胺在甲醇中与1，2_乙二硫醇反应生成产物N-(4"-(l"，3"，2"-二 硫砷烷）苯基）-1-(1'，3'，4'，6'-0-乙酰基-0-葡萄糖）-1，2,3-三唑-4-甲酰胺1。
[0031]N- (4"_ 氧化砷苯基）-1- (1'，3'，4'，6' -0-乙酰基-D-葡萄糖）-1，2， 3- 三唑-4-甲酰胺（44 mg，0.07232mmol)溶于4 mL甲醇，加入1，2_乙二硫醇（6.1uL， 0. 07305mmo 1)。室温下搅拌4小时，析出白色固体，重结晶得到白色晶体N- (4 (1 "，3 "， 2"-二硫砷烷）苯基）-1- (1，，3'，4'，6'-0-乙酰基-D-葡萄糖）-1，2,3_三唑-4-甲 酰胺I (26 mg，收率：52. 55%)。产物为P和a构型的混合物。其中0 : a = 17 : 50 经过1H NMR 和 13C NMR 和 HR-MS 表征。
[0032]1HNMR a 构型：S = 8. 92(s, 1H), 8. 28(s, 1H), 7. 81-7. 62(m, 4H), 6. 42(d， / = 3. 2Hz, 1H) , 6. 06-6. 01 (m, 1H), 5. 33-5. 28 (m, 1H), 4. 72-4. 67 (m, 1H), 3. 76(m, 1H), 3.39- 3.32 (m, 2H),3. 20-3. 14 (m, 2H),2. 14-1. 99 (m, 12H); 1HNMR P 构型：S =8.96(s, 1H), 8.23(s, 1H), 7.81-7.62(m, 4H), 6.28(d, / =8. 4Hz,lH), 5. 92-5. 87 (m, 1H), 5. 26-5. 22 (m, 1H),4. 42-4. 35 (m, 1H) ,4. 18-4. 10(m, 2H), 3. 48 (m, 1H), 3. 39-3. 33 (m, 2H), 3. 20-3. 14 (m, 2H), 2. 14-1. 99 (m, 12H). 13C NMR a/0 构型：S = 170. 47, 169. 65, 169. 57，169. 03，167. 9, 157. 34， 143. 27,139. 51，139. 46，138. 14，138. 10，131.72，126. 87,125. 21，119. 69，119. 65， 91.54, 89.78, 73.10, 72.08, 69.99, 68.74, 68.17, 68.03, 63.33, 61.64, 61.30, 41.87, 29.69, 20.70, 20.66, 20.52, 20.49, 20.26, 20.21; HRMS: M+ H+: C25H30AsN4010S2 理论值：685. 0619,实测：685. 0620. 从下面实验可以看出化合物I所示的化合物具有良好的直肠癌生物活性。
[0033] 实施例六： 实验方法 (1)细胞培养 结直肠癌细胞株HCT116由本实验室长期保存于液氮中，使用前培养于含10%胎牛血 清的培养基RPMI培养基1640 (GIBCO)中，置于37° C、饱和湿度及5% CO2培养箱常规培养， 每2~4天传代，取对数生长期的细胞进行实验。
[0034] (2) MTS细胞毒性实验 取对数生长期的细胞结直肠癌细胞HCT116制备细胞悬液，接种在96孔细胞培养 板中，在含有10%FBS的培养基中培养过夜，第二天加入不同浓度的化合物，在5% CO2培 养箱培养；72 h终止培养，加入MTS (Promega)，37 ° C孵育1-4小时，在酶标仪（Thermo Scientific Varioskan Flash)上于490nm读取吸光值。计算细胞毒性IC5。。分别重复三 次以上。取平均值。
[0035]化合物 Ia 的 IC50 = 1. 34 uM， 实验表明：本发明中的I具有良好的抗直肠癌的活性，也可以用做肿瘤的抑制剂。
【主权项】
LN- (4"-(1"，3"，2"-二硫砷烷）苯基）-1- (l'，3，，4'，6'-O-乙酰基-D-葡 萄糖）-1，2, 3-三唑-4-甲酰胺I，其结构式如下：
2. 权利要求1所述化合物I的合成方法，其特征是包括以下步骤： 步骤一：以阿散酸为原料，在二氧化硫与碘化钾的作用下还原成三价砷化物后，经 过盐酸酸化成4-二氯砷苯胺盐酸盐；4-二氯砷苯胺盐酸盐经过以下两种方法之一制备 4-(1，3, 2-二硫砷烷）苯胺；方法一：在碱性条件下生成对氨基苯基氧化砷，再进一步在溶 剂中与1，2-乙二硫醇反应生成4-(1，3, 2-二硫砷烷）苯胺；方法二：4_二氯砷苯胺盐酸盐 直接在碱性条件下与1，2-乙二硫醇反应生成4-(1，3, 2-二硫砷烷）苯胺； 步骤二：以4-(1，3, 2-二硫砷烷）苯胺为原料，与炔丙酸在Ν，Ν'-环己基碳二亚胺作 用下生成N-(4-(l，3，2-二硫砷烷）苯基）炔酰胺； 步骤三：2_叠氮-1，3, 4, 6-0-乙酰基-D-葡萄糖中间体与N-(4-(1，3，2-二硫砷烷） 苯基）炔酰胺在溶剂中在一价铜催化下发生点击反应生成N-(4"_氧化砷苯基)-1-( Γ，3'， 4'，6' -0-乙酰基-D-葡萄糖）-1，2, 3-三唑-4-甲酰胺； 步骤四：N- (4"_氧化砷苯基）-1- 0-，3'，4'，6' -0-乙酰基-D-葡萄糖）-1，2， 3- 三唑-4-甲酰胺在溶剂中与1，2_乙二硫醇反应生成产物N- (4"-(1"，3"，2"-二硫 砷烷）苯基）-1-(1'，3'，4'，6'-0-乙酰基-0-葡萄糖）-1，2,3-三唑-4-甲酰胺1。
3. 根据权利要求2所述的合成方法，其特征是：步骤二中4-(1，3, 2-二硫砷烷）苯胺与 丙炔酸在Ν，Ν'-环己基碳二亚胺作用下生成N-(4-(l，3，2-二硫砷烷）苯基）炔酰胺； 所用的溶剂是二氯甲烷、N，N-二甲基甲酰胺或四氢呋喃。
4. 根据权利要求2所述的合成方法，其特征是：步骤三的反应条件是在氮气保护的条 件下，在体积比为1:1的叔丁醇与水混合溶剂或者N，N-二甲基甲酰胺中100 °C反应4小 时，或者在微波合成仪中反应30min。
5. 根据权利要求2所述的合成方法，其特征是：步骤四的反应条件是在甲醇中室温搅 拌4小时。
6. 根据权利要求2所述的合成方法，其特征是：步骤一中经过盐酸酸化成4-二氯砷苯 胺盐酸盐后，经过过滤和干燥后再用于制备4-(1，3, 2-二硫砷烷）苯胺；步骤一方法一中， 4- 二氯砷苯胺盐酸盐先在碱性条件下水解后，经过过滤、干燥，再在甲醇中与1，2_乙二硫 醇反应，经过重结晶得到4-(1，3, 2-二硫砷烷）苯胺；步骤一方法二中，4-二氯砷苯胺盐酸 盐在碱性条件下直接与1，2-乙二硫醇反应，经过重结晶得到4-(1，3, 2-二硫砷烷）苯胺。
7. 根据权利要求2所述的合成方法，其特征是：步骤二反应完成后，经过柱层析得到 N-(4-(l，3，2-二硫砷烷）苯基）炔酰胺。
8. 根据权利要求2所述的合成方法，其特征是：步骤三的后处理经过硅藻土过滤，减压 蒸馏，柱层析得到^(4"-氧化砷苯基）-1-(1'，3'，4'，6'-0-乙酰基-0-葡萄糖）-1， 2, 3-三唑-4-甲酰胺。
9. 根据权利要求2所述的合成方法，其特征是：步骤四反应完成后将反应体系浓缩，析 出晶体或者柱层析，干燥得到N- (4"-(1"，3"，2"-二硫砷烷）苯基）-1- (1'，3'，4'， 6' -O-乙酰基-D-葡萄糖）-1，2, 3-三唑-4-甲酰胺I。
10. 权利要求1所述化合物在制备抗直肠癌的药物中的应用。
【专利摘要】具有抗肿瘤活性的砷糖化合物及其制法和应用。本发明涉及N-（4”-(1”,3”,2”-二硫砷烷)苯基）-1-（1’,3’,4’,6’-O-乙酰基-D-葡萄糖）-1，2，3-三唑-4-甲酰胺。由阿散酸经过二氧化硫还原，盐酸成盐，碱化，上保护基制备4-(1,3,2-二硫砷烷)苯胺，然后与炔丙酸在N,？N’-环己基碳二亚胺作用下生成N-(4-(1,3,2-二硫砷烷)苯基)炔酰胺；2-叠氮-1,3,4,6-O-乙酰基-D-葡萄糖与N-(4-(1,3,2-二硫砷烷)苯基)炔酰胺反应生成N-（4”-氧化砷苯基）-1-（1’,3’,4’,？6’-O-乙酰基-D-葡萄糖）-1，2，3-三唑-4-甲酰胺；所得产物再与1，2-乙二硫醇反应得到本发明所述化合物<b>。</b>
【IPC分类】C07H1/00, A61P1/00, A61P35/00, C07H23/00
【公开号】CN105175470
【申请号】
【发明人】付伯桥, 覃彩芹, 夏彩芬, 杨新河
【申请人】湖北工程学院
【公开日】2015年12月23日
【申请日】2015年7月24日